在高产奶牛日粮中添加瘤胃保护氨基酸

今天奶牛营养学家面临的挑战是给现代高产奶牛提供充足的养分以发挥其完全的遗传潜力。这种挑战在配合泌乳初期的日粮时可能是激烈的,因为此时日粮能量和蛋白质可能都不足。目前添加氨基酸的研究提出了降低日粮中瘤胃非降解蛋白质而提高泌乳量和乳蛋白含量的途径。 在泌乳初期,乳牛于物质采食量低,但泌乳量高,这就需要一种含充足可利用能量和蛋白质的     

猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

为明确导致新疆某猪场猪急性死亡的病原菌,试验对采集的猪病变淋巴结、肺脏进行病原菌分离培养、形态观察、16S rDNA测定、生化鉴定、药敏试验以及PCR血清型鉴定.将该分离株与国内外13株分离株构建系统进化树进行比对分析.结果 显示:分离菌株镜捡观察为革兰氏阳性长链状球菌,具有β溶血性,可发酵大多数糖类,符合猪链球菌的生...     

日粮精粗比对奶牛瘤胃内环境的影响

本文主要讨论了日粮精粗比对奶牛瘤胃内环境的影响,包括对瘤胃细菌菌群数量、瘤胃pH值、瘤胃内容物稀释率和外流速度、氨态氮浓度以及挥发性脂肪酸的影响。     

过瘤胃氨基酸在奶牛日粮中的应用

作者综述了过瘤胃氨基酸的类型、特点和过瘤胃性能的测定方法及近年来奶牛日粮中的添加效果和对奶牛的影响,分析了影响添加效果的因素,提出了今后的研究方向。     

奶牛日粮中添加过瘤胃氨基酸的研究

对过瘤胃氨基酸的概念、分类和稳定性以及其应用效果、存在问题和应用前景做一研究综述,希望能对奶牛日粮中应用过瘤胃氨基酸的研究取得进一步成果。     

瘤胃保护性氨基酸在奶牛日粮中的应用

日粮中大部分蛋白质在瘤胃中被降解,而增加日粮蛋白质的饲喂量,随之会增加瘤胃内蛋白质的降解量。为了减少瘤胃内蛋白质的降解损失,曾采用各种措施提高日粮中瘤胃非降解蛋白质(UDP)的量,但过多的UDP又会影响微生物蛋白质的合成,导致进入小肠的微生物蛋白质的数量减少。蛋氨酸和赖氨酸被认为是合成乳和乳蛋白的主要限制性氨基酸,而添加游离的氨基酸在瘤胃中很快被降解,必需以某种形式加以保护,使其在瘤胃内稳定,在真胃释放,在小肠吸收。本文综述了瘤胃保护性氨基酸(RPAA)的保护形式、包被物、RPAA的作用以及影响RPAA利用效果的因素。     

奶牛日粮中何时使用及使用哪种类型的“过瘤胃脂肪”？

当今讲求经济效益的奶牛生产业,都要求以最低成本来获取含有特定牛奶成分的最大产奶量。这促使奶牛场主更加专业化,他们更喜欢饲养平均产奶量很高的奶牛。这类奶牛——高产奶牛时下每个泌乳周期产奶量超过9000升,同时还可维持最佳的繁殖性能及健康状况。 然而,高产奶牛在营养上遇到了低产奶牛饲养中并不常见的挑战。在生产上,奶牛营养学家及饲料厂家通常都可轻而易举地满足高产奶牛对蛋白质及其它大多数营养物质的需要,但对日粮中能量的需要是很难仅靠谷物类来满足的,特     

7种鸭源细菌的分离与16S rDNA测序鉴定

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌.根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株.以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、铜绿假单胞杆菌、施氏假单胞菌、浅绿气球菌和麦氏棒杆菌.前3种为鸭的常见分离菌,其余的较为少见.因此在鸭病控制过程中应注意可能存在一些不常见细菌的混合感染.     

不同过瘤胃淀粉日粮对泌乳奶牛消化代谢的影响

以3头体况良好,安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳前期奶牛为试验动物,在日粮精粗比为55∶45的前提条件下,采用3×3完全拉丁方试验设计,研究了3种不同过瘤胃淀粉日粮对泌乳奶牛消化代谢的影响。研究结果表明:3组不同日粮对营养物质的采食、排泄以及消化利用有着一定的规律性。3组不同日粮之间的采食量和消化率无明显差异(P>0.05);低过瘤胃淀粉日粮组的粪NDF排出量明显高于其他2组(P<0.05),其他2组之间差异不显著(P>0.05),粪中其他营养物质的排出量3组之间没有差异(P>0.05)。与对照组相比,其他2组均使尿氮排出量降低,其中高过瘤胃淀粉日粮组达到了显著水平(P<0.05),并且高过瘤胃淀粉日粮的氮沉积量和可消化氮转化为沉积氮的效率也明显高于其他2组(P<0.05),其他2组之间差异不显著。     

牦牛肠道与粪便乳酸菌的分离鉴定及PCR-16SrDNA鉴定

以取自四川省不同地区的牦牛粪便、肠道内空物为材料，用MRS琼脂双层培养基进行厌氧培养，分离到50株乳酸菌，经生化鉴定为嗜热链球菌（2株）、乳酸乳球菌（1株）、保加利亚乳杆菌（5株）、嗜粪乳杆菌（10株）、嗜酸乳杆菌（8株）、乳酸乳杆菌（9株）、肠乳杆菌（10株）、弯曲乳杆菌（5株）。采用乳酸菌16 SrDNA通用引物，对分离的8种菌的16S rDNA-段可变区序列进行扩增，均得到大小约470bp的产物；扩增产物经纯化、测序后与GenBank中标准菌株的核甘酸序列比较，同源性均大于97．5％，同源性分析与生化试验的结果是一致的。证实，牦牛肠道和粪便的乳酸菌较为丰富，且乳杆菌的数量较多，这可能与牦牛复杂的生长环境有关。     

奶牛瘤胃液中浸麻类芽孢杆菌的分离鉴定

采用平板划线分离法从健康奶牛瘤胃液中分离得到1株细菌Y-1,体外模拟瘤胃环境增殖Y-1,进行形态学观察、生化反应和16S rDNA基因同源性比较,并对其进行系统发育树的构建等系统鉴定。结果表明,该细菌为浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),本研究还对瘤胃液中存在该菌的原因做了分析。     

荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。     

Identification and differentiation of canine Mycoplasma isolates by 16S-23S rDNA PCR-RFLP

Conventional serological methods for the identification of canine mycoplasma isolates depend on the availability of a panel of species-specific diagnostic antisera and are not always reliable in terms of specificity. To enable simultaneous identification of field isolates, PCR-RFLP analysis of the 16S-23S rRNA intergenic spacer region was used to characterize the type strains of the 12 currently described canine mycoplasmas of the Genus Mycoplasma which represent the "classic" non-hemotropic species. The use of 16S-23S rDNA PCR in the first step of this analysis revealed specific size differences of amplicons which allowed to classify these 12 canine Mycoplasma species into three groups. Depending on the length of the amplicon, subsequent RFLP analysis of PCR products using two restriction endonucleases in a single digest (ApoI/DdeI or TaqI/VspI) generated unique banding patterns. For further evaluation of the 16S-23S rDNA PCR-RFLP assay system as identification and differentiation tool, a total of 262 field isolates collected from the canine genital tract were tested. PCR-RFLP results for 251 field isolates correlated with traditional serological test results. The remaining 11 isolates had an RFLP pattern distinct from the type strains included in this study and were identified by 16S rDNA sequencing as closely related to M. sp. HRC689. The PCR-RFLP assay established in this study enabled a rapid, accurate and easily performed identification and differentiation of all 12 currently described non-hemotropic canine Mycoplasma species.     

16SrRNA/rDNA序列分析在瘤胃微生物区系研究中的应用

随着rRNA为主的分子生物学技术在瘤胃微生态研究中的不断应用与发展,动物瘤胃内环境微生物区系研究进入了一个新阶段,为动物营养学研究技术的发展提供了新的可靠的方法和手段。笔者综述了rRNA／rDNA序列分析技术应用于瘤胃微生物区系研究中的理论依据,以及该项技术在瘤胃微生物区系分析中的应用现状和前景。     

藏鸡副鸡嗜血杆菌的分离及16S rDNA序列分析

四川省某藏鸡场藏鸡发生以鼻腔与窦发炎、颜面肿胀、流鼻涕和打喷嚏为主要特征的疾病,通过对送检病鸡病原的分离纯化、生化鉴定、16 S rDNA基因的克隆和序列分析诊断为副鸡嗜血杆菌感染,将该株副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA序列与GenBank中15株巴氏杆菌科菌株进行同源性分析发现,与6株副鸡嗜血杆菌同源性较高,为94.2%～97.2%,与其它菌株16 S rDNA基因的同源性较低。另外,药敏试验表明,本菌株对菌必治、阿莫西林、庆大霉素、头孢氨噻肟和阿奇霉素等药物敏感。     

乳白香青分泌吲哚乙酸内生细菌的16S rDNA鉴定

对乳白香青2株分泌吲哚乙酸（IAA）的内生细菌的16S rDNA基因片段进行扩增、测序,并与GenBank中的4条相似序列进行比对分析,构建系统发育树。研究结果表明,2菌株分泌IAA的能力均较强,其IAA的产量分别为62.03和36.50μg/mL。形态学鉴定表明,RA5菌体为杆状,大小为（2.22-4.50）μm×（1.00-1.22）μm,革兰氏阳性;RC5菌体杆状,大小（1.59-2.98）μm×（0.62-1.04）μm,革兰氏阴性。系统学分析初步确定RA5为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,RC5为芽孢杆菌属（Bacil-lus）的成员。     

Effect of Fructooligosaccharide on the Structure and Diversity of Rumen Bacterial Community in Dairy Cow by 16S rDNA Sequencing Technology

This experiment was aimed to study the effect of fructooligosaccharides on the structure and diversity of rumen bacterial community in dairy cows by 16S rDNA sequencing technology.Four lactating dairy cows with similar lactation stages and the same parity were randomly divided into two groups using two-phase cross design method.The cows in control group were fed with basal diet and that in test group were fed with the basal diet with 60 g/(d·head) fructooligosaccharides.The experiment was designed through 2×2 cross-over test with 21 d in each stage (14 d for pre-experiment and 7 d for test) and 14 d transitional period of cross test.The rumen fluid samples were collected at 0 (before feeding),2,4,6,9 and 12 h after feeding by cattle catheter.Each phase was collected continuously for 3 days,and the structure and diversity of rumen bacterial community were measured by 16S rDNA sequencing technology.The results of Alpha diversity indexes (Simpson,Shannon),richness indexes (Chao,Ace) and Beta diversity profile showed that the addition of fruitooligosaccharide decreased the bacterial diversity in the rumen of dairy cows.And the results of 16S rDNA sequencing showed that according to the analysis at phylum level,Bacteroidetes,Firmicutes and Proteobacteria accounted for more than 95% of the total bacterial population in cow rumen of two groups.The addition of fructooligosaccharides significantly decreased the abundance of Bacteria_NA (P < 0.05),and the abundance of Synergistetes showed an increasing trend (P=0.075).According to the analysis at genus level,fructooligosaccharides significantly increased the abundance of the Pseudomonas (P < 0.05),extremely significantly increased the abundance of Bacteroides (P < 0.01),while the abundance of Dehalobacterium significantly decreased (P < 0.05).Compared with the control group,the abundance of Ruminococcus,Butyrivibrio,Succiniclasticum and Lachnospiraceae_NA in test group was increased by 80.0%,7.5%,127.9% and 20.0%,respectively,but these differences were not significant (P > 0.05).Under the test conditions,the addition of fructooligosaccharides had a certain effect on the diversity and structure of rumen bacterial flora in dairy cows,which significantly increased the abundance of Pseudomonas which unfermented sugar,extremely significantly increased the abundance of Bacteroides which used carbohydrates as a source of fermentation,had an accelerating effect on the abundance of rumen fiber degrading bacteria.     

不同牧草来源饲粮对奶牛瘤胃液中细菌群落结构多样性的影响

本试验旨在研究不同牧草来源饲粮对奶牛瘤胃细菌群落结构多样性的影响。选用8头荷斯坦奶牛[体重(632±12)kg;泌乳天数(135±16)d],采用4×4拉丁方设计,每组2头。分别以燕麦草、羊草、稻草和苜蓿为牧草来源,给奶牛饲喂以玉米青贮为基础、等能等氮且中性洗涤纤维(NDF)和非纤维型碳水化物(NFC)含量相同的4种饲粮;每期试验21 d,前14 d为预试期。结果表明:1)瘤胃中拟杆菌门、硬壁菌门、螺旋体门和纤维杆菌门为优势菌门;普雷沃氏菌属、丁酸弧菌属、纤维杆菌属和密螺旋体属为优势菌属。2)在属水平上,相同牧草饲喂的奶牛瘤胃液中细菌相似性更高,燕麦草组、稻草组和苜蓿组细菌的遗传距离更接近。3)在97%相似性水平下,4组共产生9 329个操作分类单元(OTU),它们共享4 120个OTU,占瘤胃液细菌总OTU数目的 44.16%。综合得出,当饲粮等能等氮且NDF和NFC含量相同时,不同牧草饲喂的奶牛瘤胃液中的细菌群落结构多样性存在一定的相似性。     

副鸡嗜血杆菌16 S rDNA PCR检测方法的建立

根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、禽流感病毒(H9)、鸡喉气管炎病毒及葡萄球菌等9种病原体的扩增结果均为阴性。该PCR敏感性结果表明,本方法可以检测到10pg的副鸡嗜血杆菌DNA模板。采用引物XZIC1和XZIC2,对分别用副鸡嗜血杆菌ctcc253、ctcc255、ctcc257、ctcc269株感染SPF鸡的临床病料DNA进行PCR扩增,均可扩增出单一的282bp的片段。