利用mRNA差异显示技术克隆恶疫霉侵染诱导表达的草莓基因

为了解草莓与恶疫霉互作的分子机制,以接种后3、5和7 d的感病草莓品种‘FDP821’的冠部为材料,利用mRNA差异显示技术研究‘FDP821’与恶疫霉亲和互作前后基因表达的差异,获得78条差异表达的cDNA片段,通过分析从中分离出恶疫霉侵染诱导表达的10个草莓基因cDNA片段。BLASTX在线分析表明,这些草莓基因的功能涉及呼吸作用、衰老和核苷运输与代谢等。为阐明草莓与恶疫霉互作的分子机制提供了重要的线索。     

草莓果腐病病原疫霉种的鉴定

草莓果腐病是烟台地区草莓烂果的重要原因之一。通过对草莓果腐病病原菌的形态、培养性状、致病性及生理生化特性等方面的研究 ,查明烟台地区草莓果腐病病原菌为恶疫霉 (Phytophthoracacto rum)。     

宝珠梨疫腐病病原菌研究

 宝珠梨疫腐病是云南省的一种新记录病害,其病原菌为恶疫霉Phytophthora cactorum (Lebert et Cohn) Schrot.适宜恶疫霉分离培养的培养基是番茄汁培养基、V8汁培养基和PDA培养基。适宜恶疫霉生长的pH值范围在3～10之间,最适pH值为5～6,适宜生长的温度范围为在10～30℃之间,最适生长的温度为20～25℃. 恶疫霉对果糖、麦芽糖、蔗糖等碳源的利用好于其它碳源,对酵母膏、天门冬酰胺、牛肉膏等氮源的利用好于其它氮源。     

营养条件对同宗配合疫霉菌卵孢子产生量的影响

以Ｖ６Ｃ培养基中分别加入β－谷甾醇、卵磷脂、天冬氨酸均可刺激恶疫霉抗甲霜灵突变株产生较多的卵孢子。基于上述结果确定的ＳＬＡ培养基，可以极显著的提高所测定的恶疫霉、大雄疫霉、橡胶疫霉野生型菌株和恶疫霉抗甲霜灵突变株的卵孢子产量，ＳＬＡ培养基配方为：β－谷甾醇２ｍｇ，卵磷脂５０ｍｇ，天冬氨酸１ｍｇ，Ｖ６Ｃ培养基１００ｍｌ。     

新疆草莓采后主要致腐病原真菌的鉴定及正己醇处理对其抑制作用

以新疆乌鲁木齐市所产"达塞莱克特"草莓为材料,对草莓采后腐烂病原菌进行了分离、纯化、鉴定,通过不同浓度的正己醇原液对主要病原菌的抑菌试验,探索出能控制草莓采后病害的适应性好及效果明显的一种处理浓度.研究结果表明,引起草莓采后腐烂的病原菌主要有黑根霉(Rhizopus stolonifer Vuill)、青霉属(Penicillium sp)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.ex Fr)和疫霉属 (Phytophthora sp)4种病原真菌,并且0.1%浓度的正己醇能够完全抑制4种病原真菌的生长.     

龙眼基腐病的症状及病原鉴定

描述龙眼(Dimocarpus longan Lour)基腐病的症状,遵循柯赫法则获得致病菌株,通过对致病菌株的形态学测定,将引起龙眼基腐病的主要病原菌鉴定为恶疫霉[Phytophthora cartorum(Cebert&Cohn)Schroter]。龙眼作为恶疫霉的寄主,在国内外属首次报道。帚梗柱孢霉(Cylimdrocladium sp.)的致病力较弱,是龙眼基腐病的次要病原菌。     

壳寡糖抑制辣椒疫霉的生长发育和侵染

色菌界的疫霉菌所引发的作物疫病是农业生产上的毁灭性病害，严重威胁粮食安全和农业可持续发展。为探明壳寡糖是否可用于作物疫病的绿色防控，分析壳寡糖对辣椒疫霉的抑菌活性及作用机制。在壳寡糖终浓度为0、10、30、50、100、300、500 mg/L的PDA平板上接种辣椒疫霉、恶疫霉、瓜类疫霉、寄生疫霉和荔枝霜疫霉，测定菌丝生长情况；在壳寡糖终浓度为0、10、30、50、100 mg/L的10%V8培养液中培养辣椒疫霉菌丝，观察菌丝形态变化；添加0、10、30、50、100 mg/L壳寡糖，观察对辣椒疫霉游动孢子囊的产生，以及游动孢子释放、游动和萌发的影响；对本氏烟喷施浓度为0、10、30、50、100、1 000 mg/L的壳寡糖后接种辣椒疫霉，观察病害发生情况。结果表明，壳寡糖能直接抑制辣椒疫霉和其他4种卵菌(恶疫霉、瓜类疫霉、寄生疫霉和荔枝霜疫霉)的菌丝生长，但抑菌效果在种间存在差异，当浓度为100 mg/L时对辣椒疫霉的生长抑制率达到了52.50%。自50 mg/L浓度起，壳寡糖对辣椒疫霉的菌丝形态，游动孢子囊形成，以及游动孢子的释放、游动和萌发均有强烈的抑制作用，当浓度升高时抑制效...     

壳聚糖对辣椒疫霉病菌和水稻恶苗病菌的抑制作用

用平板抑菌法测定了壳聚糖对辣椒疫霉病菌(Phytophoracapsici)和水稻恶苗病菌(Fusariummoniliforme)的抑制作用。结果表明,壳聚糖稀释250～500倍对辣椒疫霉病菌菌丝的抑制效果达59.1%～91.7%,而对水稻恶苗病菌菌丝的抑制效果只有14.6%～68.4%。     

利用PCR技术特异性检测人参恶疫霉菌等6种疫霉菌

为了建立能同时检测人参恶疫霉菌（Phytophthora cactorum）等6种疫霉菌的快速检测方法,以期为病害的发生预测和早期诊断技术提供依据。通过比较基因组学分析,根据恶疫霉菌等疫霉菌属的6个种共有基因设计引物,通过PCR方法筛选特异性引物,并对引物的特异性、灵敏度和应用可行性进行验证。结果表明：筛选到了1对用于检测疫霉属6种病菌的常规PCR特异性引物YB-00394F/YB-00394R,采用优化的PCR扩增体系和反应条件进行扩增,筛选到的特异引物分别从疫霉属的6个种中扩增出386 bp大小的条带,而其他非疫霉属真菌无扩增条带。常规PCR法对人参恶疫霉菌基因组DNA检测的灵敏度为100 fg/μL,应用PCR方法成功快速的在62份植物样本和95份土壤样本中检测到了目标疫霉病菌。建立的常规PCR方法可以快速灵敏地检测6种疫霉属的真菌。     

疫霉有性生殖生物学特性的研究

对槐生疫霉(Phytophthora robinicola Lu,Xu & Fang),掘氏疫霉(P.drechsleri Tucker)、樟疫霉(P.cinnamomi Rands)和烟草疫霉(P.nicotianae Breda de Haan)有性生殖生物学特性进行研究,结果表明,异宗配合疫霉卵孢子的形成能力因配对菌株的不同而有明显差异,一般种内菌株的亲和性大于种间菌株的亲和性,而不同组种问菌株的亲和性最差。此外,疫霉的有性生殖还受温度、光照、pH、培养基和甾醇等因子的影响。     

华东、东北地区疫霉种的分布及交配型

1984～1988年采集了华东、东北的20种植物疫病标本,共获得85个疫霉菌株,11个疫霉种。樟疫霉、掘氏疫霉、隐地疫霉、棕榈疫霉、苎麻疫霉、簇囊疫霉。蜜色疫霉等7种分布在华东地区;辣椒疫霉、恶疫霉分布在东北地区;烟草疫霉。柑桔褐腐疫霉在华东和东北均有分布。分离到的17个樟疫霉菌株,有11个属 A_2交配型,在南京地区占绝对优势。分离到的26个烟草疫霉菌株,A_1交配型11个,A_2交配型15个,属均等优势,但 A_2交配型主要分布在南京、上海,A_1交配型主要分布在大连。研究表明,存在多种疫霉菌侵染同一种寄主植物引起相似症状的复杂性,研究中应予注意。     

菠萝心腐病原疫霉种的鉴定

 1997～2000年,从广州及其周边地区的菠萝心腐植株上分离得到疫霉菌8株,鉴定出3个种,即柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)1株,烟草疫霉(P.nicotianae)5株和棕榈疫霉(P.palmivora)2株。     

陕西省猕猴桃疫霉病的诊断及病原鉴定

从西安霸桥，长安，户县，杨陵，周至，眉县等地采集猕猴桃疫霉病病株，经分离，纯化，结果认为：陕西省猕猴桃疫霉病的病原菌主要为鞭毛菌亚门卵菌纲，疫霉属的恶疫霉菌，猕猴桃为该菌在国内的新记录寄主。同时还分析了陕西关中地区几种常见疫霉菌与恶疫霉菌的区别。     

广州地区茄疫病的发生及疫霉种鉴定

 1987～1999年,从广州地区茄的果实、茎、叶及根上分离得到疫霉菌,根据形态特征、培养性状及生理特性等方面研究结果,鉴定出4个种,其中以辣椒疫霉Phytophthora capsici Leon较为普遍,烟草疫霉P.nicotianae Van Breda de Haan次之, 掘氏疫霉P.drechsleri Tucker较少出现,致病疫霉P.infestans (Montagne) de Bary 仅见于春季;此外,种群分布与前作及不同季节有关。     

根部内生真菌—寄生疫霉—拟南芥互作模式体系的构建与鉴定

为构建根部内生真菌—寄生疫霉—拟南芥三方互作模式研究体系，以影响马铃薯晚疫病害发生的潜在内生真菌雪球微座孢(Microdochium bolleyi)为例，利用WGA-Alexa Fluor^○R488染色和带有GFP标记的寄生疫霉(Phytophthora parasitica)转化菌株，通过荧光显微镜观察分析M.bolleyi侵染拟南芥根部以及M.bolleyi与寄生疫霉和拟南芥根部三方互作的细胞学特征；利用皿内平板拮抗测试初步分析内生真菌M.bolleyi对致病疫霉(Phytophthora infestans)的抑制效果，并进一步利用皿内拟南芥与真菌M.bolleyi和寄生疫霉三方互作体系，鉴定分析真菌M.bolleyi对植物与寄生疫霉亲和互作的影响。结果表明，真菌M.bolleyi可成功侵染并定殖于根组织，而未引发植物细胞坏死现象，说明M.bolleyi具有典型的内生真菌特征；相比于对照预处理，真菌M.bolleyi预处理能够抑制寄生疫霉在拟南芥根部的定殖和扩展，初步揭示真菌M.bolleyi在植物与疫霉菌互作中的影响作用；真菌M.bolleyi不仅对致病...     

大豆疫霉的分子检测

利用核糖体内转录间隔区(internaltranscribedspacer,ITS)序列通用引物ITS1/ITS4分别获得了大豆疫霉(Phytophthorasojae)和辣椒疫霉(P.capsici)的ITS序列,通过获得序列设计了大豆疫霉的特异性引物PS1和PS2,并建立了分子检测方法。该方法对大豆疫霉(P.sojae)菌丝体和土壤中卵孢子检测的灵敏度分别为10-5ng/μL和每克土壤0.05个卵孢子。     

陕西省猕猴桃疫霉病的诊断及病原鉴定

从西安霸桥、长安、户县、杨陵、周至、眉县等地采集猕猴桃疫霉病病株,经分离、纯化,结果认为：陕西省猕猴桃疫霉病的病原菌主要为鞭毛菌亚门卵菌纲,疫霉属的恶疫霉菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｃｔｏｒｕｍ（ＬｅｂｅｔＣｏｈｎ）Ｓｃｈｏｒｔ．）,猕猴桃为该菌在国内的新记录寄主。同时还分析了陕西关中地区几种常见疫霉菌与恶疫霉菌的区别。     

木霉菌对烟草疫霉的拮抗作用

通过对峙培养试验测定木霉菌(Trichodermaspp.)对烟草疫霉菌(Phytophthora parasiticavar.nicotianae)的抑制作用,筛选出对烟草疫霉菌具有拮抗作用的绿色木霉(T.viride)菌株TG050609.平板对峙培养试验结果表明:该木霉菌对烟草疫霉菌菌落生长的抑制率为29.12%,且能寄生于烟草疫霉;其挥发性次生代谢产物和发酵滤液对烟草疫霉也有明显的抑制作用.盆栽防治试验结果表明,该木霉菌对烟草黑胫病的防治效果达到56.53%,优于58%甲霜灵锰锌WP.     

恶霉灵--木质素两性表面活性剂改性膨润土缓释剂的制备及性能

农药缓释剂是减少环境污染的有效策略,为开发成本低廉且具有释放速度调节能力的农药缓释剂,同时提高木质素产品的附加值,以木质素两性表面活性剂(二甲基-正丁基-磺化木质素基氯化铵(DBSLAC))为改性剂、钠基膨润土为原料,通过与膨润土层间的金属离子进行离子交换,制备改性膨润土。以恶霉灵为药物释放的对象、改性膨润土为释放的主要载体,利用浸渍吸附的方法制备出恶霉灵缓释剂,研究其缓释性能,并通过FTIR表征其结构,采用XRD分析改性后膨润土的底面间距。结果表明:恶霉灵在有机膨润土上的吸附量随着DBSLAC的增加先增大后减小;当DBSLAC相当于膨润土可交换阳离子总量(CEC)的1.2倍时,制备的1.2 CEC改性膨润土(L-1.2Bt)吸附恶霉灵的效果最佳;与未改性膨润土相比,L-1.2Bt对恶霉灵的吸附效果增强。制备恶霉灵缓释剂的最佳工艺条件为L-1.2Bt用量0.02 g、吸附时间8 h、恶霉灵浓度500 mg/L、pH值为2,该条件下制备的恶霉灵缓释剂对恶霉灵的最大吸附量为406 mg/g。另外,药水比例和温度对恶霉灵缓释剂的缓释快慢有一定影响。      

贮藏柑桔上疫霉种的鉴定

1998年至2000年,从广州地区的贮藏柑桔病果上分离得到7株疫霉菌,鉴定出3个种,其中,柑桔褐腐疫霉Phytophthora citrophthora (Smith et Smith) Leon 4株,柑桔生疫霉P. citricola Saw 2株, 烟草疫霉P. nicotianae Bread de Haan 1株;建议在柑桔贮藏保鲜时,适当地将百菌清或酰苯胺类杀菌剂与常用的苯并咪唑类杀菌剂混合使用来处理果实,以控制疫霉菌的为害.