辣椒根际促生菌筛选鉴定及其促生效应初探

为筛选辣椒根际促生菌(PGPR)及其促生效应,以齐齐哈尔龙江县辣椒根际土壤为材料,采用稀释平板法筛选PGPR,通过16S rRNA序列分析鉴定其菌种,研究其分泌IAA、GA、 铁载体、 溶磷的能力,并采用血平板对菌株的溶血性进行评价.通过浸种和盆栽试验,验证促生菌株对辣椒种子萌发和幼苗的促生作用.结果表明,从辣椒根际土...     

辣椒枯萎病拮抗木霉菌的筛选及鉴定

【目的】探明辣椒根际土壤中对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）有拮抗作用的微生物,筛选可抑制辣椒枯萎病的生防菌,为绿色防控辣椒连作导致的枯萎病提供有效的生防微生物资源。【方法】采用平板稀释法分离辣椒不同生长阶段的根际土壤中的微生物,再通过平板对峙法筛选拮抗菌株并鉴定拮抗菌发酵液抑菌活性,结合形态学和分子生物学方法鉴定拮抗菌株种类。【结果】从辣椒根际土壤中共分离出真菌50株,其中5株木霉菌株对尖孢镰刀菌有拮抗作用,对峙培养抑菌率为60.47%～78.04%,LJ06020803菌株的抑菌率最高,为78.04%,其不含菌体的发酵液抑菌率为40.92%;根据LJ06020803菌株形态学特征和系统发育树鉴定其为哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）。【结论】菌株LJ06020803为哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）,对辣椒枯萎病病原菌有很好的拮抗效果,可作为一种生防资源用于防治辣椒枯萎病。     

基质高温消毒对戈壁日光温室辣椒根际微生物的影响

试验研究了利用燃煤式基质热水消毒机对基质进行高温热水消毒对戈壁日光温室辣椒根际基质微生物含量的影响。通过对高温热水消毒处理后戈壁温室辣椒根际基质微生物数量的测定,对辣椒不同生育期根际细菌、真菌、放线菌数量以及细菌与真菌比值进行对比分析。结果表明:基质高温热水消毒处理使辣椒根际基质中细菌数显著提高,开花期、结果期均高于CK,放线菌数量较对照显著提高。到结果盛期,细菌和放线菌较对照分别高19.36%、21.33%,真菌数量有所下降,但与对照差异不显著。基质高温热水消毒处理可以显著增加种植尤其是连作基质中微生物总量,起到显著改善基质生态结构的作用,有助于基质由真菌型向细菌型转化。     

大棚辣椒和小白菜根际土壤微生物的研究

通过稀释涂布平板法对大棚辣椒和小白菜根际土壤中的细菌、真菌和放线菌进行分离、培养、计数和初步鉴定。结果表明:两种蔬菜根际土壤中放线菌数量呈显著性差异,细菌和真菌数量差异性不显著;两种蔬菜根际土壤中均为细菌数量最多,放线菌次之,真菌最少。     

大棚辣椒和小白菜根际土壤微生物的研究

通过稀释涂布平板法对大棚辣椒和小白菜根际土壤中的细菌、真菌和放线菌进行分离、培养、计数和初步鉴定。结果表明：两种蔬菜根际土壤中放线菌数量呈显著性差异,细菌和真菌数量差异性不显著;两种蔬菜根际土壤中均为细菌数量最多,放线菌次之,真菌最少。     

草坪草立枯丝核菌病细菌防治的研究

采用平板稀释法从健康的草地早熟禾根际土壤及根表分离、纯化获得280株细菌,利用平板筛选及盆栽试验,得到3株对立枯丝核菌具有较强拮抗活性的细菌,暂定名为G10、C26和T41。     

草地早熟禾褐斑病拮抗细菌的筛选及鉴定

从健康的草地早熟禾根际土壤及根面分离、纯化获得280株细菌,采用平板筛选及盆栽试验,得到1株对草地早熟禾褐斑病菌具有较强拮抗活性的细菌。根据个体形态和群体形态特征、生理生化特征,鉴定该株细菌属于芽孢杆菌(Bacillus)。     

油茶根际溶磷菌3-Y-08的筛选与鉴定

采用传统的微生物分离培养法,对油茶根际溶磷菌进行分离,筛选出6株溶磷细菌.利用透明圈法对油茶根际土壤中具有溶磷能力的细菌进行初筛;采用钼锑抗比色法测定发酵液的可溶性磷含量,对解磷菌株进行复筛,得出菌株3-Y-08的溶磷活性最强.根据进行菌落形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列和系统发育分析等研究,初步鉴定菌株3-Y-08为巨大芽孢杆菌.     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的分离鉴定及防效试验

在辣椒疫病为害较严重田块采集健康植株，从其根际土壤中分离筛选出具有抗疫霉菌活性的细菌菌株Pa608。通过菌落形态特征以及分子水平同源性鉴定，测定其生理生化指标和胞外产酶特性，确定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)；采用平板对峙法测试其抗菌谱，盆栽试验确定防效后应用于温室辣椒田测试温室防效，发现该菌株对灰霉菌、稻梨孢菌、疫霉菌、炭疽杆菌具有较好的拮抗作用，当菌液浓度为1.0×10⁹ cfu/mL、盆施3 mL对辣椒疫病的盆栽防效达88.00%；菌液稀释10倍、株施50 mL的温室防效达74.96%。     

一株淮山炭疽病拮抗放线菌的分离及初步鉴定

[目的]从海南药用植物根际分离得到对淮山炭疽病具有拮抗活性的放线菌菌株,并对其分类地位进行鉴定。[方法]采用HV培养基从盾叶鸡蛋花根际土壤分离放线菌菌株;通过平板对峙培养和发酵代谢产物抑菌试验筛选活性放线菌;根据形态特征,结合16SrRNA基因序列分析鉴定活性放线菌的分类地位。[结果]从盾叶鸡蛋花的根际土壤分离到12株放线菌,筛选到1株对淮山炭疽病菌具有良好拮抗活性的菌株51173,菌株51173鉴定为链霉菌属Streptomyces violaceusniger16S rRNA gene clade中的成员。[结论]放线菌菌株51173在淮山炭疽病菌的生物防治中将具有很好的开发应用前景。     

一株抗辣椒疫霉的根际细菌CRJ-9的筛选、鉴定及防治效果研究

为了发掘出抗辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的根际细菌,丰富我国有益微生物菌种资源库。本试验从高发病试验田采集健康辣椒根际土壤样品30份,经过稀释涂布、划线培养、病原菌定向筛选后得到对辣椒疫霉有明显拮抗活性且具有良好广谱抑菌能力的根际细菌CRJ-9。试验结果显示:CRJ-9发酵液的抑菌带宽度为(20.83±0.62)mm,抑制率可达到90%左右。利用16S rDNA联合gyrB基因序列鉴定CRJ-9为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过温室盆栽试验,结果显示在施药7和14d后,CRJ-9发酵液对辣椒疫病的相对防治效果分别为81.28%和79.91%,与烯酰吗啉的防治效果差异不显著,说明解淀粉芽孢杆菌CRJ-9能够有效控制辣椒疫病的发生和蔓延,具有极大的应用潜能。     

吉林白城与内蒙古开鲁辣椒白皮病病原鉴定及生防菌筛选

【目的】明确吉林白城和内蒙古开鲁辣椒白皮病病原，并从辣椒根际土壤中筛选对该病原菌具有良好防效的生防菌，为辣椒白皮病的诊断和绿色防控提供参考。【方法】从吉林白城和内蒙古开鲁辣椒产区，采集表现“白皮”症状的辣椒果实及其根际土壤样品，采用组织分离法分离纯化病原菌，果实接种法验证分离病原菌的致病性，通过形态学结合ITS-ACT-TUB-CHS-GAPDH-HIS3多基因联合法对分离的致病菌进行鉴定。利用逐级稀释法分离辣椒根际土壤样品中的放线菌，用离体结合活体测定法筛选对分离病原菌有显著拮抗活性的生防菌，并采用形态学、培养特性和分子序列相结合的方法对筛选的生防菌株进行鉴定。【结果】从吉林白城和内蒙古开鲁辣椒样品中分离得到25株真菌，其中有6株真菌在致病性测定中表现出典型的白皮病症状，分别为LJ1、LJ2、LJ3、LJ4、LJ5和KLLJ9，形态学结合多基因联合确定分离的病原菌均为斯高维尔炭疽菌（Colletotrichum scovillei）。以斯高维尔炭疽菌LJ1为供试靶标菌，从辣椒根际土壤中分离到1株拮抗放线菌SLJ2-2，其能有效抑制斯高维尔炭疽菌LJ1的感染和扩展，喷施3次SLJ2-2发酵上清液后对斯高维尔炭疽菌LJ1的抑制率达到95.53%，结合形态学、培养特性和分子生物学方法将SLJ2-2鉴定为微黄白链霉菌（Streptomyces albidoflavus）。【结论】吉林白城和内蒙古开鲁地区辣椒白皮病主要由斯高维尔炭疽菌侵染引起，从辣椒根际土壤中筛选出的微黄白链霉菌能有效抑制该病原菌的感染及其在辣椒上的扩展。     

辣椒根际链霉菌WKFF34的分离鉴定及拮抗作用

放线菌是产抗生素和生防菌的重要来源,为发现有价值的拮抗放线菌并评估其拮抗活性,采用连续稀释法,从辣椒根际土壤样品中分离筛选到一株放线菌WKFF34。使用平板对峙法、抑制菌丝生长速率法及双层平板法分别对该菌株的抑菌活性以及溶藻活性进行了生物活性评估,通过纸片法测定了该菌株对不同抗生素的药物敏感性,基于形态学特征、培养性状、生理生化特征和16S rRNA基因序列的系统发育分析,对其进行分类鉴定。研究发现,菌株WKFF34对多种供试植物病原细菌、真菌和铜绿微囊藻具有较好的拮抗作用。抗菌谱及抑菌活性复筛发现该菌株的发酵液有广谱的抑菌活性,其中对油菜菌核病原菌的抑制效果最好,抑制率达80.43%。药敏试验结果表明WKFF34对12种抗生素如四环素、复方新诺明、万古霉素、氯霉素、米诺环素、麦迪霉素、强力霉素、多粘菌素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星和氨苄西林敏感。研究发现,菌株WKFF34属于链霉菌属中有效发表种蓝微褐链霉菌(Streptomyces cyaneofuscatus)的一个菌株,鉴定为Streptomyces cyaneofuscatus WKFF34,因其具有较强的抑菌活性和溶藻活性,在作物保护和环境保护中具有潜在的应用前景。     

紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其发酵条件进行优化,为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象,以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标,利用稀释涂布法分离细菌;利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株;利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S r DNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位;利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌,从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强,且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示,其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%～77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果,将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示,其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、1%酵母浸粉和0.5%NaCl;最适发...     

新疆棉花立枯病根际拮抗细菌的筛选

为棉花立枯病生物防治提供新的生防细菌菌株,从采集的48份新疆棉苗根际土样中经分离、纯化获得优势细菌菌株189个,采用平板对峙培养法对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)进行根际拮抗细菌的筛选,并对部分抑菌活性强菌株的抑菌作用进行研究。结果表明,共获得根际拮抗细菌菌株67株;其中菌株MX-1抑菌谱广,抑菌活性强,具有几丁质酶活,其盆栽试验防治效果达59.8%;饱和度70%硫酸铵获得的抑菌物质热稳定性较好,抑菌活性最高,能够引起立枯丝核菌菌丝发生畸变,出现囊泡、甚而裂解。由此可知,菌株MX-1是一株具有良好应用潜力的防治棉花立枯病的生防菌。     

菌株YC-25的分离鉴别及其对烟草的促生作用

为获得优质根际促生细菌资源，采用平板分离技术对烟草根际土壤中的可培养细菌进行分离，通过平板拮抗试验筛选抑菌活性菌株，同时进行解磷、解钾、产吲哚乙酸（IAA）活性检测，采用盆栽试验验证菌株对烟草的促生效果，并对目标菌株进行了多相分类学鉴定。结果表明：从烟草根际土壤分离获得35株不同形态菌株，依次编号为YC-1至YC-35；平板拮抗试验筛选发现YC-25抑菌最广，同时对6种病原真菌具有较为显著的抑制作用，平均抑菌率达到48%；促生功能活性鉴别显示，YC-25还具有溶无机磷、解钾、分泌IAA和产纤维素酶能力；多相鉴定结果表明，菌株YC-25为不动杆菌属（Acinetobater）的一个种，暂命名为Acinetobater pittii YC-25；盆栽试验结果显示，YC-25处理下的烟草株高增加26.29%，茎围增加27.54%，最大叶面积增加17.26%，说明菌株YC-25对烟草的农艺性状促生效果良好，作为烟草专用微生物菌剂备选遗传资源开发前景广阔。     

多功能根际生防促生放线菌的分离鉴定及其对辣椒的益生效果

从健康辣椒根际土壤筛选具防病促生功能的菌种并应用于生物障碍土壤,可为辣椒提质增产和根腐病的防治提供优质的菌剂资源。本研究以辣椒根腐病的病原菌——腐皮镰孢菌（Fusarium solani）为靶标菌,采用平板对峙法筛选优良生防菌株,对其固氮、溶磷、解钾、分泌3-吲哚乙酸（3-indole acetic acid,IAA）、产铁载体、产纤维素酶和蛋白酶、利用酚酸类连作障碍物质等能力进行定性和定量测定。采用形态学、生理生化及16S rRNA基因序列对分离菌株进行鉴定,并采用田间原位栽培试验检测其生防和促生效果。结果表明,从设施连作抗病辣椒根际土中获得6株具有抑菌作用的放线菌,通过定性、定量测试发现菌株G-1拮抗效果最强,其对设施蔬菜5种常见病原菌均具有较好的抑制效果,抗菌谱广,且具有分泌IAA、产铁载体、产纤维素酶和蛋白酶、溶解有机磷、利用酚酸类化感物质等特性。结合形态学、生理生化及16S rRNA进化树分析结果,将其鉴定为弗氏链霉菌（Streptomyces fradiae）。田间原位栽培试验显示,G-1菌剂对辣椒根腐病具有较好的防病作用,可显著降低根腐病的病情指数,促进辣椒根系生长,且可使辣椒增产31.04%。研究表明,弗氏链霉菌G-1具有优良的防病促生功能,其固体菌剂的田间应用对辣椒根腐病具有较好的防治效果,且对辣椒具有明显的促生增产作用,可作为辣椒益生菌剂的候选菌株资源。     

具有抑菌活性的红树植物根际土壤细菌鉴定及多样性研究

为在红树植物根际土壤中挖掘具有广谱抑菌活性的细菌。以大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌作为指示菌,采用琼脂扩散法对红树植物根际土壤中分离到的细菌进行抑菌活性筛选,提取活性菌株的DNA,对其16S rRNA基因进行测序分析。试验从红树植物根际土壤中共分离702株细菌,筛选出35株具有抑菌活性的菌株,其中M27抑菌效果最好,对4种指示菌均具有抑菌作用,且抑菌圈直径均在13 mm以上。在属水平上,具有抑菌活性的菌株分属7个属,其中芽孢杆菌属为优势菌属,占有抑菌活性菌株的54.3%。试验初步揭示了红树植物根际土壤具抑菌活性细菌的多样性,为开发新型抗菌药提供理论依据。     

不同植物根际土壤有益细菌种类及其功能鉴定

【目的】从不同植物根际土壤中的细菌种类差异入手，筛选具有防治植物病害和促进植物生长的菌株，构建植物有益细菌菌库，为植物病害的生物防治提供基础。【方法】采用土壤稀释平板法从园林植物、果树、蔬菜、中草药等植物根际土壤中分离细菌，利用16S rDNA序列分析法鉴定菌株，并通过平板对峙培养法和透明圈法进行抑菌活性和生防相关物质的检测。【结果】从中国不同省市地区采集的44份植物根际土壤中分离得到531个细菌菌株，其中蔬菜根际来源的菌株最多，占61.21%,果树根际来源的菌株占20.15%、园林植物根际来源的菌株占17.33%、中药材根际来源的菌株占1.32%。分离出的细菌中芽胞杆菌属(Bacillus)为优势菌属，占41.62%;其次为假单胞菌属(Pseudomonas)和链霉菌属(Streptomyces),分别占14.50%和6.21%;泛菌属(Pantoea)和节杆菌属(Arthrobacter)较少，分别占2.64%和2.45%;其他属占33.15%。对其中的292个细菌菌株进行抑菌活性和生防相关物质的测定，结果表明具有抑制真菌活性的菌株占17.50%,抑制细菌活性的菌株占18.84%;...     

基质栽培黄瓜根际细菌多样性及促生细菌的筛选

根际微生物是筛选作物有益菌的重要来源,以往主要从土壤栽培的健康作物根际分离有益菌.但近年来栽培基质广泛使用,因此,有必要从基质栽培的作物根际筛选有益菌,为未来开发适应基质栽培的菌剂提供材料和技术支持.本研究使用高通量测序技术对基质栽培的黄瓜根际细菌进行多样性检测,使用TSB培养基从中分离细菌并结合16S rRNA进行鉴...