云南农大培育出转基因克隆猪

2012年2月初的几天，云南农业大学动物科学技术学院实验区的猪圈热闹非凡，原来，这里刚培育出了10头转基因克隆猪。这些小猪在阳光下与普通的小猪没有什么差别，研究人员将它们放进没有一点光线的小暗室后，一开紫外线灯，却发现这些小猪的猪蹄部位竟然散发出绿色的荧光……     

转抗仔猪腹泻候选基因FUT1克隆猪的效率分析及分子鉴定

产肠毒素大肠杆菌F18是引起仔猪断奶后腹泻的主要病原菌,α1-岩藻糖转移酶(FUT1)基因则是大肠杆菌F18与仔猪小肠黏膜黏附与否的重要候选基因,其有利基因型(不黏附)为AA。本研究前期利用体细胞核移植技术获得转AA型FUT1基因克隆猪15头,其中3头存活至断奶。为初步分析转基因克隆猪受胎率低、存活率低的原因以及鉴定转FUT1阳性克隆猪,本研究首先对代孕母猪的受胎率、妊娠期、产仔数以及转基因克隆仔猪初生重等进行统计分析,并利用PCR扩增产物直接测序方法对获得的15头转基因克隆猪进行分子鉴定。结果表明:相比自然生产母猪,转基因克隆代孕母猪受胎率较低、妊娠期较长、产仔率及活仔率均较低。15头转基因克隆猪中13头为FUT1转基因阳性克隆猪,1头存活至断奶。此外还发现,转基因阳性仔猪和阴性仔猪初生重差异显著(P=0.013)。研究结果为通过转基因以及克隆等技术手段生产及培育抗仔猪腹泻猪提供了数据参考。     

云南农大培育出转基因克隆猪 猪蹄会发绿色荧光

正这几天,云南农业大学动物科学技术学院实验区的猪圈热闹非凡,原来,这里刚培育出了10头转基因克隆猪。这些小猪,在阳光下与普通的小猪没有什么差别,全身呈灰白色,刚从猪圈里抓出来时,还嗷嗷叫唤个不停。随后,研究人员将它们放进没有一点光线的小暗室后,一开紫外线灯,却发现这些小猪的猪蹄部位竟然散发出绿色的荧光……     

中国首例绿色荧光转基因克隆猪产下“荧光猪崽”

东北农业大学传来消息，中国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪日前成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。     

原核注射法转基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律

应用非同位素标记染色体原位杂交技术，对9头不同世代的转OMT－PGH帮6头原代转hDAF基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律进行了研究。结果表明，4头原代转OMT－PGH基因猪外源基因分别整合在第7，13，2和8号染色体上，6头原代转hDAF基因猪外源基因分别整合在第13，6，11，2，7和7号染色体上，证实了用原核注射法转基因猪外源基因的整合是“随机”的，来自同一亲本，不同世代的5头转OMT－PGH基因猪，其外源基因均存在于第13号染色体上，与共同祖先原代转基因猪的整合位点相一致，表明转基因猪外源基因可以传递给后代，且整合位点的遗传是相对稳定的。     

体细胞核移植技术生产转基因猪在我国已发展成熟

2007年岁末，在东北农业大学，一头绿色荧光转基因克隆猪顺利产下11个“猪宝宝”，其中2头具有绿色荧光特征。有关专家称，这次试验的成功标志着中国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

转EGFP基因山羊克隆胚的发育

利用脂质体包裹含EGFP基因的质粒,并将之导入山羊乳腺上皮细胞,经G418筛选获得阳性细胞,以阳性细胞作为核供体,利用核移植技术构建转基因克隆胚。结果表明：用转基因山羊乳腺上皮细胞作为核供体,电融合法更适合构建转基因克隆胚。转基因山羊克隆胚体外培养最佳方案是用SOFaa培养液,在培养72 h后加入10%的正常山羊血清（Normal goat serum,NGS）。荧光显微镜下观察到转基因克隆胚中EGFP的表达,大部分克隆胚发育到8-16细胞以后的时期,绿色荧光蛋白才开始逐渐表达,随着发育时间的延长,绿色荧光蛋白的表达也逐渐增强。说明外源基因在胚胎早期发育阶段可以表达,EGFP可以作为报告基因来实现对外源基因整合及表达的监测。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪于2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国酋例绿色荧光蛋白转基因克隆猪2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

世界首例转基因克隆猪在英国诞生

英国的 PPLTherapeutics公司于 2 0 0 1年 4月 1 1日宣布 ,世界首例转基因克隆猪诞生 ,5头健康的克隆仔猪均含有外源标记基因。这是该公司 2 0 0 0年宣布世界首例克隆猪诞生之后又一重大成果。这次的克隆猪所不同的是 ,它们是由经过遗传修饰的体细胞核产生的。这一工作的成功进一步证明了生产基因敲除 ( knock-out)猪的可行性。这种基因敲除猪含有特异性的基因 ,可使人对猪器官产生排斥作用的免疫系统失活。 PPL公司此前曾报道过在猪细胞成功敲除靶基因 ,所用技术为该公司的专利技术 ,也就是他们生产转基因克隆绵羊丘比特 ( Cupid)和戴…     

我国又添两头“荧光猪崽”

2月17日．记者从东北农业大学获悉．我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪今年1月成功产下的11头猪崽中．又有2头猪崽被确认具有绿色荧光遗传特征．从而使这窝猪崽中“荧光猪崽”的总数由2头增加至4头。     

转pGH IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响

为了解转双基因在猪生长发育中作用及意义,选取23头健康仔猪,其中转p GH、IGF-1双基因猪4头,转p GH基因猪12头,非转基因猪7头,研究p GH、IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响。结果表明,转p GH、IGF-1双基因猪个体均重比转p GH单基因猪高2.83%,差异显著(P0.05);转双基因猪比非转基因猪高7.37%,差异显著(P0.05)。转双基因猪体重达100 kg的日龄比转单基因猪少8.93 d,差异显著(P0.05),转双基因猪比非转基因猪少12.23 d,差异显著(P0.05),转单基因猪比非转基因猪少3.30 d,差异不显著(P0.05);转双基因公猪的精液量,分别比转p GH单基因公猪与非转基因公猪提高27.61%、18.31%,差异均显著(P0.05);精子密度,三者之间差异均不显著(P0.05);转双基因公猪与非转基因猪的精子活力之间差异不显著(P0.05);转单基因公猪畸形率分别比转双基因公猪、非转基因猪高23%、18%,差异均显著(P0.05)。为进一步分析p GH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响提供参考依据,也为转基因技术的推广与应用提供有力依据。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下荧光猪崽

2008年1月7日,我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称,这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

信息采撷

<正>荧光猪产崽引起世界关注2008年1月7日,由东北农业大学刘忠华教授主持的我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪顺利产下11头小猪。科研人员通过对小猪的耳朵、尾巴和脐带     

畜牧科技信息

中德合作开展转基因克隆猪研究上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室近年与德国波恩大学ＫａｒｌＳｃｈｅｌｌａｎｄｅｒ教授实验室进行了广泛的学术交流,并于今年初启动双边国际合作项目“转基因克隆猪”,此项目已获德国科学技术部批准。转基因克隆动物技术是转基因与动物克隆技术的有机结合,它是以动物体细胞为受体,将目的基因以ＤＮＡ转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞,再以这种体细胞为核供体,进行动物克隆。该实验室去年已开始《培育转基因克隆猪关键技术的研究》课题,系由上海市自然科学基金资助,目前已有…     

英国培育出新型转基因克隆猪

曾经参与克隆出小羊多利的英国PPL医疗公司日前宣布，该公司研究人员培育出了５只新型转基因克隆猪，它们体内有一个基因被“关闭”了。这是异种器官移植研究领域的又一重要进展。PPL公司发布的新闻公报说，这５只小猪是该公司设于美国弗吉尼亚州的子公司的研究人员培育出的，它们都是雌性，出生于２００１年１２月２５日。DNA试验表明，它们体内的两个“阿尔法１（３半乳糖转移酶”（GT）基因），有一个处于被“关闭”状态。研究人员说，GT基因控制产生一种酶，这种酶使猪细胞表面产生一种糖类物质。当猪器官或细胞被移植给人体时，…     

靶向O型口蹄疫病毒shRNA转基因猪体细胞抗病毒活性研究

为研究靶向O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因shRNA转基因猪体细胞的抗病毒活性,本实验在成功培育转基因克隆猪的基础上,通过分离与培养转基因猪体细胞,对其shRNA进行PCR和Southern blot检测,并将FMDV感染体细胞中,通过细胞病变(CPE)、间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析转基因猪体细胞抗FMDV活性。结果表明,转基因猪体细胞基因组DNA中携带有靶向FMDV VP1基因的shRNA基因片段。与非转基因猪体细胞相比,接种FMDV转基因猪体细胞其出现CPE的时间延迟,细胞内病毒含量显著降低,细胞感染病毒36 h时,对细胞中FMDV VP1基因抑制效率为53.6%。表明该靶向FMDV shRNA转基因克隆猪体细胞在体外具有良好的抗病毒活性。本研究为进一步在体内评价转基因动物的抗病毒活性奠定了基础。     

PRRSV清道夫受体CD163基因的真核表达和功能鉴定

从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中提取总RNA为模板,采用RT-PCR法获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的受体CD163全基因,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HIS A上,构建出真核重组质粒pcDNA3.1-CD163,经酶切和DNA测序证明获得了CD163基因,其序列与GenBank报道序列比较,核苷酸同源性为99.37%。将测序正确的CD163基因在脂质体LipofectamineTM2000介导下转染PK-15细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了CD163在PK-15中的表达。将转染的细胞感染PRRSV后,经IFA检测转染CD163的细胞能够被PRRSV感染。     

猪TREX1基因的真核表达及其在JEV感染中的作用研究

为了明确猪TREX1在JEV感染中的作用,本研究利用PCR扩增获得猪TREX1基因的ORF,并将该基因克隆至真核表达载体p3xFlag-CMV-14中,将构建的重组真核表达质粒命名为pFlag-pTREX1,利用lipofectamine 2000将构建成功的pFlag-pTREX1重组质粒瞬时转染至293T细胞中,通...