苹果叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

 为探索适用于苹果叶片蛋白质组学研究的样品制备方法,比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法（TCA）、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法和Tris-HCl提取法等3种总蛋白质的提取方法。制备的样品经双向电泳分离采用银染显色。结果3种方法分别得到450、374和1032个蛋白质点。认为Tris-HCl提取法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大。     

4种金柑叶片蛋白质提取方法比较分析

【目的】采用4种不同方法进行金柑叶片蛋白质提取的相关研究,摸索出一套适合金柑叶片蛋白质的提取方法,也为其他近缘植物高质量蛋白质的提取提供科学参考依据。【方法】选择‘桂金柑一号’为供试材料,分别采用Tris-HCl提取法、尿素提取法、DTT/丙酮提取法和TCA/丙酮提取法提取叶片组织蛋白质,分析比较获得的蛋白质产率、单向电泳图和双向电泳图。【结果】不同方法的提取效果各异,Tris-HCl提取法提取的蛋白质产率、单向电泳以及双向电泳结果较理想,单双向电泳图辨识度高,蛋白点数丰富,蛋白点整齐且少有纵横纹现象。【结论】Tris-HCl提取法能够兼顾产率和质量,在4种方法中综合提取效果最好,是适用于金柑叶片蛋白质提取的理想方法。     

不同方法提取昆虫蛋白质效果比较

本试验以黄粉虫为试验材料,对昆虫蛋白质的提取方法进行筛选。采用的提取方法共4种,分别为碱提蛋白法、盐提蛋白法、胰蛋白酶提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。经过试验数据分析,得出最佳提取方法为胰蛋白酶提蛋白法,碱提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法次之,盐提蛋白法效果最差。     

几种提取马铃薯块茎蛋白质方法的比较研究

为了寻找一种适合于提取马铃薯块茎蛋白质的方法,以常用的5种方法从马铃薯块茎中提取蛋白质,用Brad-ford法测定其中蛋白质的含量,再以SDS-PAGE电泳进行分析,在此基础上对提取过程中所用Tris-HCl提取液浓度进行了优化。结果表明,利用直接提取法所获得的马铃薯块茎蛋白质,不仅含量最高（蛋白质干重为5.54mg）,而且电泳后得到的蛋白条带数量最多（达到15条）,蛋白条带清晰可见;磷酸缓冲液法次之（4.06mg）;酚提取法最差（0.14mg）。此外,以使用浓度为1.5mol/L Tris-HCl的提取液得到的电泳结果最好,条带最多且最清晰。直接提取法提取效率高、操作简便,是适合于提取马铃薯块茎蛋白质的实用方法。     

不同方法及溶剂提取水飞蓟蛋白质比较研究

以蛋白质提取率为指标,从2种常用的水飞蓟蛋白质提取方法中筛选出碱提酸沉法为最佳方法;并在基于该法的基础上,对所用提取溶剂进行了筛选,结果为0.05 mol/L的Tris-HCl溶液(pH=8)提取水飞蓟蛋白质的效果最好。     

不同方法提取车前草蛋白质效果比较

以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,固液比为1:10。     

文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立

以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。     

红海榄根部总蛋白质提取方法的改进和双向电泳体系的建立

分别采用TCA-丙酮沉淀法、酚法、尿素法、周涵韬法和笔者建立的酚改良法,提取红海榄根部总蛋白质,并进行了SDS-PAGE分析和双向电泳体系的优化.结果表明,酚改良法提取红海榄根部总蛋白质的纯度最高,质量最好,为建立双向电泳分析体系提供了较为理想的蛋白样品,获得了良好的双向电泳图谱.该结果为盐生植物,尤其是盐生木本植物,建立了一套可靠的蛋白提取和双向电泳方法.     

洋虫成虫蛋白质化学提取方法的比较

洋虫成虫蛋白质提取方法及主要工艺指标筛选研究结果表明:3种方法中碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为Tris-HCl提蛋白法,盐提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数1.0%、温度80℃、时间60min、固液体积比为1∶15时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法:盐液质量分数1.0%、温度20℃、时间2h、固液体积比为1∶10时蛋白质得率有最大值;Tris-HCl提蛋白法:Tris-HCl液pH值8.1、抽提温度10℃、抽提时间30min、固液体积比1∶10时蛋白质得率有最大值。     

柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白质Western blot分析

利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性.     

不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立

以不结球白菜品种‘矮脚黄’的雌蕊为材料,从蛋白质提取、IEF程序、IPG胶条pH范围和染色方法等方面进行比较,利用Tris-HCl提取方法,使用pH 4～7 IPG胶条和改进的等电聚焦程序,改良银染方法,建立了适用于不结球白菜雌蕊蛋白质的双向电泳技术体系,并使用该体系对开花前2 d的花蕾雌蕊和开花2 d后的雌蕊蛋白质进行比较分析,获得187个差异蛋白点。     

白桦木质部蛋白提取方法的建立1）

以白桦（ Betula platyphylla Suks．）木质部为试验材料,分别采用TCA—丙酮提取、酚提取和试剂盒提取3种方法提取白桦木质部总蛋白。利用试剂盒定量和聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳技术比较3种提取方法的蛋白质提取效率、提取质量。同时对酚提取法进行改良,建立适用于白桦木质部蛋白的提取方法。研究结果表明,改良的酚提取法提取的白桦木质部蛋白提取量最大,电泳条带清晰,丰富,质量较高。2－DE电泳得到的蛋白凝胶背景干净,蛋白质点清晰。因此,改良的酚提取法是较适合于白桦木质部蛋白的提取方法。     

苹果矮化砧木1年生枝解剖结构

以Y-1苹果矮化砧木为试材,运用常规石蜡切片法制片,通过显微镜观察辨析其1年生枝条各组织的解剖结构,为更加深入精确地研究苹果矮化砧木枝条解剖结构与矮化性的关系提供理论依据与参考。结果表明,苹果矮化砧木Y-1 1年生枝的大体结构包括周皮、皮层、维管系统、髓和髓射线,其中木质部和韧皮部有初生结构和次生结构,由外到内依次为：木栓层、木栓形成层、栓内层、皮层、初生韧皮部、次生韧皮部、形成层、次生木质部、初生木质部、髓部,韧皮射线、木射线、髓射线贯穿其中。初生韧皮部和次生韧皮部组织界线不明显;在显微结构下,与矮化关系密切的导管容易辨别,管胞难以辨别,筛管、伴胞可以辨别,但具有输导作用的导管、筛管需用更精细和先进的技术方法进行分辨研究。今后应运用更先进的技术对苹果矮化砧木1年生枝的各种组织解剖结构与乔化砧木进行更准确精细的比较,以找出更多与矮化有关的组织特征。     

几种提取液对苹果成熟叶片总RNA提取质量的影响

[目的]筛选一种快速有效地提取高质量的苹果成熟叶片总RNA的提取液。[方法]以红富士苹果成熟叶片为材料,用3种不同的提取液提取苹果成熟叶片的总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-RCR检测RNA质量。[结果]3种试剂中2种可以提取出总RNA。[结论]用RNAiso-mate for Plant Tissu和RNAiso Plus搭配使用和RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue单独使用均可提取出质量较好的RNA,前者质量优于后者。     

着色与非着色苹果品种中磷酸化蛋白质的鉴定与分析

【目的】苹果着色是一个重要的质量性状,构建苹果磷酸化蛋白质组并进行鉴定与分析,了解在苹果着色过程中的蛋白质磷酸化,为进一步阐明苹果着色机理提供参考。【方法】以着色‘嘎拉’和非着色‘金冠’两个品种苹果果皮为试材提取总蛋白,用TiO₂富集磷酸化肽段,对富集到的磷酸化肽段进行高效液相色谱分离,利用质谱鉴定磷酸化肽段,采用Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4（thermo）软件进行蛋白质查库鉴定,使用的数据库为Uniprot_Maloideae.fasta。对鉴定到的磷酸化肽段和蛋白质进行分析,找出着色与非着色苹果品种中有差异的磷酸化蛋白质及其修饰位点。【结果】在着色苹果品种中鉴定到1 323个蛋白质、3 339个肽段和225个磷酸化肽段,发现磷酸化蛋白质约200-225种;在非着色苹果品种中鉴定到569个蛋白质、1 152个肽段和128个磷酸化肽段,发现磷酸化蛋白质约117-128种。比较分析表明,43个磷酸化肽段仅在非着色苹果品种中发现,139个磷酸化肽段仅在着色苹果品种中发现,在着色苹果品种中有更多的蛋白质发生了磷酸化,其中质膜H⁺-ATPase在两个苏氨酸位点发生磷酸化,过敏原蛋白和两个蛋白激酶在丝氨酸位点发生磷酸化,3个转录因子、1个钾转运蛋白和1个受体激酶都发生磷酸化。在两个苹果品种鉴定出的蛋白质中,发生蛋白质磷酸化的位点主要是丝氨酸,其次是苏氨酸,在酪氨酸位点发生蛋白质磷酸化很少。蛋白质WD40和花青苷合成途径中的相关酶蛋白C4H、4CL、CHS、CHI、F3′H、FLS、LDOX和UFGT在着色过程中未发生磷酸化。在着色和非着色苹果品种中都存在MYBR转录因子,并且都发生了蛋白质磷酸化。【结论】在着色苹果品种中产生了一些特有的磷酸化蛋白质,其中包括已知与着色相关的质膜H⁺-ATPase,苹果着色可能受到蛋白质磷酸化的影响。     

戊唑醇在苹果和土壤中的残留及消解规律研究

[目的]建立GPC-GC/MS测定苹果和土壤中戊唑醇残留的方法。[方法]采用GPC-GC/MS测定苹果和土壤中戊唑醇残留,并研究戊唑醇在苹果和土壤上的残留消解动态。[结果]通过优化程序升温条件和选择合适的定量离子、定性离子,确定了最优的气相色谱及质谱条件:初始温度82℃保持5 min,然后以8℃/min程序升温至300℃,保持4.2 min;PTV进样口温度:初始温度120℃保持5 min,然后以100℃/min程序升温至250℃,保持31.7 min。离子源温度为200℃;接口温度为250℃。在优化的气相色谱及质谱条件下,苹果中残留的戊唑醇和杂质能够得到很好的分离、定性及定量,线性关系良好,相关系数为0.999。从提取溶剂种类和吸附剂种类2个方面对Qu ECh ERS方法进行优化,最终确定乙腈为提取液,用N-丙基乙二胺(PSA)为萃取净化吸附剂,经涡旋、离心、氮吹浓缩,用乙酸乙酯定容。利用在线GPC技术进一步净化样品,同时利用PTV大体积进样和进样口程序升温方式提高了检测灵敏度。方法的回收率为75%~109%,相对标准偏差为3.1%~9.4%。通过田间动态试验得到戊唑醇的消解动态方程,其在苹果上的半衰期为13.9 d。[结论]该方法检出限低、精密度高、满足农药残留分析要求,可用于检测苹果和土壤中戊唑醇残留。     

水稻根部蛋白质组样品制备的方法研究

为了选择适用于水稻根部蛋白质组分析的样品制备方法,以水稻苗期幼嫩根尖为材料,采用TCA/丙酮沉淀法、Tris法、尿素/硫脲法对水稻根部总蛋白质进行提取并比对,通过Bradford法、SDS PAGE电泳技术对蛋白质含量和种类进行分析。结果显示,Tris法提取出的水稻根部蛋白质含量和种类明显少于其他2种方法;尿素/硫脲法和TCA/丙酮沉淀法提取的蛋白质种类和含量都较多,其中,尿素/硫脲法的蛋白质图谱中蛋白条带多,染色深而且很清晰,尤其适用于较低分子量蛋白质的提取,TCA/丙酮沉淀法则适于高分子量蛋白质的提取。因此,进行水稻根部总蛋白质组分析时,可选用尿素/硫脲法。