环境条件对1株假交替单胞菌脱氮效果的影响

从对虾养殖池中分离得到1株具有高效脱氨氮能力的菌株(2906),根据菌株2906的16S rRNA序列分析,该菌与假交替单胞菌属Pseudoalteromonas tetraodonis的亲缘关系最近,命名为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)2906。利用不同C/N、pH、盐度的脱氮培养基,分析了环境条件对该菌株脱氮效率的影响,研究了葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、丁二酸钠、柠檬酸钠、乳糖和可溶性淀粉等不同碳源对菌株2906脱氮效果的影响。结果显示,菌株2906在C/N为15~20、pH为7~8、盐度为5~15时,具有良好的脱氨氮效果。应用柠檬酸钠为碳源,氨氮去除率达100%。在脱氮培养过程中,细菌生长与脱氮效率呈强相关性(相关系数R=0.94)。采用浸泡攻毒方法测试了该菌对幼虾的生物安全性,结果显示,该菌对幼虾的LC50为2.8?107 CFU/ml,表明该菌对对虾不具致病力。研究结果可为该菌的开发利用提供技术支持。     

一株高效脱氮菌株的分离鉴定及应用潜力分析

为了获得对虾养殖池塘中高效去除亚硝态氮和氨氮的菌株,采用富集培养分离的方法,从养殖水体中筛选得到1株去除亚硝态氮和氨氮的菌株,培养24 h后的去除率分别为96.17%和88.27%,编号为O-11。基于形态学、分子生物学及生理生化鉴定结果,明确了该菌株基本生物学特征以及可能的分类地位。分离菌株在20~30℃时有利于亚硝态氮的去除,而温度为20~35℃时对氨氮的去除效果较好;分离菌株在盐度小于30的环境中对亚硝态氮的去除能力受盐度变化的影响不大;在碱性环境中分离菌株对氨氮的去除能力较高。安全性检验可知,在菌浓度为10~5~10~8 cfu/mL的菌株O-11对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是安全的,且在菌浓度为10~5 cfu/mL时能显著提高对虾的存活率,促进对虾生长。这说明,分离菌株O-11在水产养殖水体中有害氮脱除方面具有潜在的应用价值。     

1株好氧反硝化芽孢杆菌的脱氮特性研究

以具有较强反硝化能力的芽孢杆菌D5为出发菌株,研究了其牛长及好氧脱氮特性.研究结果表明,在高浓度的亚硝酸盐环境下其仍具有相当强的反硝化能力,且碳源为乙酸钠时脱氮能力最强.当碳源浓度0.2 mol/L、温度36℃、初始pH 7.0、溶氧5～7 mg/L时具有最佳的反硝化活性.和已报道的反硝化细菌相比,其具有更强的耐氧能力,同时也具有较高的反硝化速率.     

罗非鱼循环水养殖系统中一株肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其脱氮性能研究

实验从山东德州市一罗非鱼(Oreochromis niloticus)养殖场循环水养殖系统的脱氮池中分离到一株具有高效脱氮特性的菌株(编号DZYC02),分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、丁二酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠为碳源,研究了碳源种类对菌株DZYC02脱氨氮效果的影响;同时以蔗糖为碳源、NH4Cl为氮源,研究了不同碳氮比、初始pH及盐度对该菌株脱氮效果的影响。结果显示:菌株DZYC02在以柠檬酸钠为碳源、C∶N≥15、pH 5~7、盐度0~15的条件下具有良好的脱氮效果,24 h内对浓度为20 mg/L的NH+4的去除率达100%,48 h内对浓度为20 mg/L的NO-2去除率高达100%;将该菌采用浸泡方式感染斑马鱼(Danio rerio)进行生物安全试验,结果显示菌株DZYC02对斑马鱼表现出较好的安全特性。分别用Biolog细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行鉴定,结果显示菌株DZYC02为一株肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)。     

一株致病性异育银鲫源维氏气单胞菌的分离鉴定

从急性患病异育银鲫Carassius auratus gibelio肝胰脏中分离到一株优势菌。对该菌株进行了显微和超微结构观察、生理生化表型鉴定、16S rRNA和毒力基因分析及人工感染实验。结果显示:分离菌呈短杆状、两头钝圆、端生鞭毛,为革兰氏阴性菌;发酵葡萄糖产酸,氧化酶、触酶试验阳性,高盐浓度不生长;16S rRNA序列与气单胞菌属Aeromonas的基因相似性为98%以上,系统发育分析进一步表明该菌为维氏气单胞菌A.veronii,在该菌中可检测到肠毒素基因,且回接感染能导致健康银鲫发病,表明该菌具有致病性。     

一株鳖源致病性气单胞菌的分离与鉴定

对典型病症为体表腹甲严重斑块状充血、甚至出血,体表某些部位出现溃疡,严重的会口鼻充血、流血,内脏肝、脾、肾肿大的病鳖进行了病原菌鉴定分析。从肝脏中分离菌株ARC090812,经VITEK-32全自动细菌鉴定仪鉴定,结果为嗜水气单胞菌。药敏实验显示分离菌株对庆大霉素、丁胺卡那霉素等药物敏感,对恩诺沙星及强力霉素中度敏感。致病性实验表明,半数致死量LD50为7.87×108CFU/mL。     

一株引起香鱼出血症的嗜水气单胞菌的鉴定

从发生出血症的香鱼体腔液分离到一高致病性的菌株(ayu-ah0201),经人工侵染试验证实该菌能引起香鱼出血症.对该菌的形态、生理生化及16S rDNA序列分析结果表明,其为革兰氏阴性,短杆状,极生鞭毛.对蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷、氧化酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶呈阳性,鸟氨酸脱羧酶呈阴性.可利用葡萄糖产酸产气.在以该菌16S rDNA序列和GenBank数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树,表明分离菌ayu-ah0201与嗜水气单胞菌聚在一簇,与嗜水气单胞菌核苷酸序列同源性最高,为99.6%～99.7%,与其他相关气单胞菌属成员的核苷酸序列同源性小于98.9%.结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜水气单胞菌.     

一株海洋石油降解菌的特性分析及固定化研究

从辽东湾沿岸受石油污染的沉积物中筛选得到一株石油降解菌株BHB-16,对该菌进行了形态以及16SrDNA系统发育分析,初步确定该菌株为Lutibacterium菌属。应用沸石和珊瑚石作为载体进行该菌株的固定化研究,确定当沸石作为载体时,固定化的最佳条件为:菌株接种量为0.6mL,培养时间28h,载体投加量为10mL;选用珊瑚石为载体时,固定化的最佳条件为:菌株接种量为0.6mL,培养时间29h,载体投加量为12mL;此外,用沸石和珊瑚石固定后的菌株,其对于柴油的降解率相对于游离菌分别提高了14.4%和29.6%,初步选用珊瑚石作为载体进行菌株的固定化使其具有更好的石油降解能力。     

一株海洋产电菌产碱性蛋白酶的初步研究

从浙江省舟山海域潮间带中得到一株产电细菌M2,经过16SrRNA分子鉴定及生理生化试验,初步鉴定该菌为Shewanella属细菌,并命名为Shewanellasp.M2。菌株M2在脱脂奶平板上能产生明显且较大的水解透明圈,通过Folin-酚法进行酶活测定,初始蛋白酶酶活为110U/mL,对其进行紫外诱变处理,最终得到酶活为205U/mL的突变株,酶活提高了86.4%,传代试验结果显示该菌株具有较好的遗传稳定性能。     

VP10—一株海洋噬菌体的分离及特性研究

以河流弧菌-Ⅱ(Vibrio fluvialis-Ⅱ)为指示菌,从大连沿海水域中分离到了一株海洋噬菌体-VP10.电镜分析表明,VP10具有典型的廿面体头部及带尾鞘的尾部,为蝌蚪形噬菌体.此外,还进行VP10的热稳定性、pH稳定性及紫外照射稳定性等生物学特征的初步研究.     

四株嗜水气单胞菌的比较鉴定

从鲫鱼肌肉和脏器先后分离到四株嗜水气单胞菌Ｄｙ、ｘＡ、ｘＡ５和ｘＡ６。与南京农业大学惠赠的嗜水气单胞菌Ｊ—１株进行了系统的比较鉴定。结果表明：１．五株细菌在培养特性、生化特性和药敏特性方面,除在分解水杨素和蔗糖能力以及新生霉素和新霉素敏感性等指标外,其他均基本一致;２．Ｄｙ、ｘＡ５和ｘＡ６同Ｊ—１一样能致死小白鼠和鲢鱼,而ｘＡ却不能;３．在与兔抗Ｊ—１抗血清的凝集反应中,Ｄｙ、ｘＡ５和ｘＡ６呈强阳性反应,而ｘＡ呈弱反应。这些结果表明,从不同地区分离的四株气单胞菌在致病性和抗原结构方面均存在差异。     

一株海洋红酵母的鉴定及其培养基的优化

通过菌落形态、培养特征和生理生化特征的测定,初步确定海洋红酵母HN-3为红酵母属的胶红酵母。比较不同的碳源、氮源、酵母膏质量分数和海水盐度对该酵母生长的影响,优化其培养基。试验结果表明,最佳培养基为2%葡萄糖、1.5%蛋白胨、1%酵母膏,盐度30。在该培养条件下,酵母菌HN-3的产菌量达到4.80×107cfu/mL,比初始发酵条件下的产菌量(4.20×107cfu/mL)提高了14.3%。     

一株产淀粉酶海洋放线菌菌株的选育及发酵条件的研究

为筛选到海洋来源的淀粉酶,采用Yoo改良法测酶活,对从浙江舟山群岛海域潮间带海泥样中筛选到的一株玫瑰暗黄链霉菌A46进行选育,通过紫外线和DES诱变处理,得到一株酶活为105.6 U/m L的突变株,该突变株酶活提高213.3%,经过10次传代,酶活仅下降3.6%,是一株性状稳定的优良菌株。在单因素实验的基础上应用Plackett-Burman实验设计和响应面分析方法(RSA)对该菌株的发酵条件进行系统优化,得到优化发酵条件:培养温度33℃、接种量2.25%、盐度23.4、初始p H值为8、转速200 r/min、装瓶量为20%、淀粉含量为0.5%、培养时间为72 h。研究表明,在此条件下的酶活为125.8 U/m L,酶活比优化前提高了19.1%。     

嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila无毒活性株免疫技术研究

用１／１０－１／１００浓度的无毒活性株肉汤原液０．１－０．２ｍｌ／尾注射接种链、镛、鲤、鲫、鳊等鱼种，强毒株攻击时保护力在９０％以上，与全细胞灭活苗无显著差异；用２－３％浓度的无毒活性株肉汤原液在有增渗增效剂的溶液中浸泡接种鲢、镛、鳊等鱼种，强毒株攻地保护力也都在７０％以上，与注射接种差异不显著。 互     

嗜水气单胞菌BSK－10株的优化培养条件研究

用正交试验研究了嗜水气单胞菌BSK－10株的优化培养条件。结果表明：葡萄糖、甘油对BSK－10株有显著的促生长作用;各种无机离子中,HPO4^2-,Fe^2 ,Ca^2 ,(NH4)2SO4,Mg^2 ,Zn^2 ,Mn^2 对BSK^-10生长有显著促进作用,而Cu^2 ,Co^2 则表现为抑制作用;Na2HPO4与各种离子间存在交互作用,Fe^2 ,Mg^2 ,Zn^2 ,Mn^2 的促生长作用在Na2HPO4的存在时表现得极为明显,而（NH4）2SO4,Mn^2 在Na2HPO4存在时有轻微抑制作用;葡萄糖对不同来源的鱼类嗜水气单胞菌致菌株有不同的效应。BSK－10的生长动态研究表明,不同温度下BSK－10株达到对数生长及最大菌量的时间不同,以30℃为最佳。     

1株嗜水气单胞菌的拮抗菌鉴定及其特性研究

从池塘养殖的团头鲂(Megalobrama amblycephala)肠道中分离筛选出15株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)拮抗菌,其中菌株S24在平板贴片试验中对供试的嗜水气单胞菌菌株具有稳定和较高的拮抗作用。综合形态学观察、生理生化指标检测及分子序列(16S rDNA,gyrB)分析,将菌株S24确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。拮抗菌S24和嗜水气单胞菌(菌株43)的共凝集率为(36.0%±4.3%)。共培养试验可见拮抗菌S24能明显抑制嗜水气单胞菌43的增殖;共培养18 h时,嗜水气单胞菌43的细胞数量达到最低。试验结果表明,拮抗菌株S24适宜作为潜在防治嗜水气单胞菌病的益生菌。     

一株去除亚硝态氮细菌分离鉴定及特性研究

自对虾养殖后期池水中分离纯化出一株高效去除亚硝态氮的细菌,进行了菌体的亚显微形态观察和16SrDNA同源序列分析,并探讨了起始pH、温度和碳氮比对该菌株去除亚硝态氮效果的影响。结果表明,分离菌株在初始亚硝态氮质量浓度为55.51mg/L的异养硝化培养基中培养12h后,亚硝态氮去除率达到98.69%;根据形态学特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,确定该菌株为脱氮海洋单胞菌,菌株去除亚硝态氮的最适宜条件为:初始pH 9,温度35℃,碳氮比16。     

一株从草鱼中分离的嗜水气单胞菌的病原学及基因组特征

为确定南昌地区某渔场草鱼出血性败血症的病原体及病原特征,从患病草鱼的肝脏病灶中分离出一株致病菌A1310。对分离菌进行了形态特征、理化特性等表型生物学检验、人工感染实验及对抗菌药物的敏感性实验,并对其进行了全基因组测序、基于多序列位点分型(multilocus sequence typing,MLST)的系统进化分析及毒力基因分析。结果显示,生理生化鉴定证明该菌为嗜水气单胞菌,当浓度达1.0×10⁶ CFU/mL时,对草鱼有致病性;对供试20种抗菌药物中的青霉素等7种耐药,对卡那霉素等5种敏感;A1310株基因组框架序列共包含96个与毒力和防御相关基因,其中多药耐药性外排泵基因占大多数,约为22%;与美国斑点叉尾鮰分离株(S15-242、S15-458、S15-591、S15-700)聚类为同一进化分支;比较基因组分析发现,A1310具有一个删减版的Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS),基因数量为标准Ⅵ型分泌系统的80%,缺少vgrG和vca0109基因的部分片段。综上所述,来源于草鱼的嗜水气单胞菌菌株A1310,与美国斑点叉尾鮰分离株具有亲缘关系,含有多个已报道的嗜水气单胞菌的毒力基因。本研究不仅丰富了嗜水气单胞菌的生物学性状内容,也为嗜水气单胞菌的有效检验、防治和深入研究提供一定的参考,对草鱼的疾病防控具有一定意义。     

一株异养硝化-好氧反硝化菌株的分离鉴定及其对养殖废水的脱氮效果

养殖废水排放严重制约海水养殖业健康发展,为了筛选出适用于养殖废水高效脱氮的菌株,利用BTB培养基从对虾育苗尾水沉淀池塘底泥和海水养殖废水处理池中分离纯化得到5株好氧反硝化菌株。经异养硝化能力试验研究发现5种菌株均具有一定的硝化能力,其中WM2菌株氨氮去除效果显著,去除率达到76.3%,经形态学鉴定、16S rDNA基因序列分析和系统发育树构建分析,鉴定其为革兰氏阴性菌,属于海生杆菌(Marinobacterium)属,海生杆菌属作为脱氮细菌研究在以往的研究中鲜有报道。将菌株WM2接种到实际的半滑舌鳎工厂化养殖废水中,处理48 h后的氨氮去除率达到89.38%、硝态氮去除率为88.77%、亚硝态氮去除率为99.66%,脱氮效果显著。因此本研究筛选出的菌株WM2作为新型异养硝化-好氧反硝化细菌对养殖废水脱氮具有良好的应用潜力。