小鼠血清抗磺胺二甲氧嘧啶抗体的研制

将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)与载体牛甲状腺球蛋白(BTG)偶联,构建SDM完全抗原SDM-BTG。用SDM-BTG免疫小鼠,诱导小鼠产生血清抗SDM抗体。ELISA检测表明:SDM-BTG免疫小鼠所产生的多克隆抗体与SDM-BSA包被抗原的结合有较强的特异性和较高的亲和力。     

磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的合成与鉴定

用重氮化方法将SDM偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通过紫外扫描(UV)、SDS-PAGE凝胶电泳试验。结果显示:BSA-SDM和OVA-SDM的UV与BSA、SDM的相比均发生了改变,出现了明显的特征峰。这表明半抗原和载体偶联成功。用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价。结果表明,获得了高效价的pAb,为SDM残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)单克隆抗体的制备及初步鉴定

用磺胺间二甲氧嘧啶人工免疫原(BSA-SDM)免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术筛选抗磺胺间二甲氧嘧啶单克隆抗体(SDMmAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备SDMmAb,并鉴定其免疫学特性;鉴定结果表明,筛选出3株杂交瘤细胞,单克隆抗体的蛋白亚型为IgG1;分子量为178.1KDa,染色体数目为76～87条。与其他7种磺胺药(SD、SMM、SMZ、SQ、ST、PST、SMT、SPD)有很高的交叉反应性,可用于推广磺胺类药物多残留快速检测试剂盒的研制应用。     

磺胺对甲氧嘧啶在鸡蛋中残留的高效液相色谱法的研究

蛋鸡在中国具有广泛的养殖市场,球虫病是蛋鸡的常发病之一,具有很大的危害性,预防和治疗球虫病成为广大养殖户的共识。磺胺对甲氧嘧啶具有抗菌谱广、药效作用时间长、渗透性强、组织分布广泛、使用方便和价格低廉等优点,在禽类上广泛用于球虫病的预防和治疗。     

构建磺胺二甲氧嘧啶完全抗原的研究

采用重氮偶合法将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联，构建SDM完全抗原，以紫外扫描光谱进行鉴定，并对重氮偶合法反应体系中SDM浓度，NaNO2浓度，及pH对SDM-BSA结合比的影响进行了观察。     

磺胺二甲氧嘧啶钠在斑点叉尾鮰体内的残留及其消除规律

在(19±1)℃水温下,以200mg/kg的剂量对斑点叉尾鮰单次口灌磺胺二甲氧嘧啶钠(SDM-Na),采用HPLC方法研究了SDM-Na在斑点叉尾鮰体内的残留及消除规律。研究结果表明,本试验的回收率在79%~93%之间,最低检测限为0.01μg/g,日间和日内精密度(RSD)均小于5%。血浆中药物代谢符合二室模型,模型为C=36.68e^-0.14t+18.12e^-0.05t-54.8e^-0.33t。主要药代动力学参数为:分布半衰期为4.85h,药峰时间为5.38h,峰值浓度为21.42μg/mL。肌肉中的药物含量在4h达到最大值17.93μg/g,肝脏中的药物含量在8h达到最大值10.43μg/g,肾脏中的药物含量在8h达到最大值11.61μg/g。在停药120h时血液、肌肉、肝脏、肾脏组织中的含量均低于国家残留标准(100μg/kg)。在本试验条件下,斑点叉尾鮰的的建议休药期应大于5d。     

黑熊血清蛋白与磺胺对甲氧嘧啶的结合率测定

本文用平衡透析法测定了黑熊血清蛋白与磺胺对甲氧嘧啶（ＳＭＤ）的结合率（ｆｂ）为４１．７７±１１．６６（５．３８～２５．８７）％．数据经Ｗｏｏｌｆ作图法处理、直线回归后，得到结合参数βｐ和Ｋｄｐ分别为：８．８５±１．７８μＭ／ｇ，６４７．２０±２４２．８４μＭ／Ｌ．黑熊的ｆｂ均随药物浓度的增高而降低，高浓度的呈现饱和现象．不同浓度间的ｆｂ差异极显著（Ｐ＜０．０１），不同个体间的ｆｂ差异极显著（Ｐ＜０．０１）．     

磺胺-6-甲氧嘧啶在肉鸡体内的药代动力学

本研究以B—M比色法和高效液相色谱(HPLC)法为定量手段,探讨了磺胺-6-甲氧嘧啶(DS-36)在肉鸡体内的药动学特征。结果表明:9～10周龄肉鸡单剂量(200mg/kg)口服DS-36混悬液后,血药浓度变化符合一级吸收一室开放模型,经非线性最小二乘拟合得如下动力学参数:t1/2Ka=1.50±0.92(hr)t1/2K=9.05±1.50(hr)t_(max)=4.39±1.40(hr)C_(max)=20.67±0.97(mg％)AUC=381.80±20.50(mg％.hr)据此求出多剂量给药参数,推荐的治疗方案为:负荷剂量D_0~*=236mg/kg,维持剂量D_0=200mg/kg给药间隔为24小时。此外,还对两种定量方法进行了比较。     

拟南芥rd29A基因启动子DNA片段的克隆、序列测定、分析

从拟南芥中分离到rd2 9A基因启动子DNA片段并克隆到 pMD 18克隆载体中 ,获得pRDP重组载体 ,将克隆测序 ,并对序列进行分析。     

GC含量丰富的人I型原胶原蛋白基因片段克隆及其序列分析

鉴于做转基因牛羊乳腺生物反应器的需要,根据GenBank中所公布的人I型原胶原蛋白基因序列设计引物,利用健康人的胎盘中提取的基因组DNA为模板,通过优化的长距离PCR,成功地克隆出GC含量丰富的人I型原胶原基因组DNA片段,序列测定与分析的结果显示中国人I型原胶原蛋白基因组DNA片段与GenBank中所公布出来的序列所对应的部分有99.5%的同源性,其中外显子部分与GenBank中的对应部分完全一致;而在内含子中,本研究克隆到的基因与GenBank中公布出来的序列有不少差异,尤其表现在内含子1和2中,其中内含子2要比GenBank中公布的基因内含子2多出14个碱基,这14个碱基具体有什么作用尚需要进一步阐明,内含子间的差异凸显了东西方人种之间基因序列的多态性。     

南瓜基因CmNAC的克隆与序列分析(英文)

[目的]克隆南瓜基因CmNAC并进行序列分析。[方法]以南瓜叶片为材料,根据甘蓝型油菜NAC1、番茄NAC和辣椒NAC保守结构域设计一对简并引物,采用RT-PCR方法扩增得出长度约为440bp大小的DNA片段,将其克隆至pMDl9-T载体上,对重组克隆进行测序,用BLAST和DNAMAN软件对核酸及氨基酸序列进行分析。[结果]所获得的南瓜NAC基因片段由442个碱基组成,编码147个氨基酸,命名为CmNAC;该基因片段具有其它植物NAC基因中存在的保守区,并且属于NAC家族中ATAF1/2亚家族。[结论]实验拟在南瓜中获得和抗逆性相关的NAC基因,为进一步研究该基因的生物学功能和植物基因工程奠定理论基础。     

人脂联素基因的克隆及序列比较分析

目的:克隆人脂联素基因,为进一步重组蛋白表达和生物活性等基础研究与临床应用奠定基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中克隆人脂联素全长基因,采用T-A克隆法重组到pMD18-T中,通过菌液PCR鉴定阳性克隆后,测序鉴定。并采用聚类分析等对其序列进行比较分析。结果:克隆人脂联素基因全长为735bp,并登录GenBank(登录号:EU420013);其编码244个氨基酸,理论分子量为26413.64Da,预测的等电点为5.42。邻接法聚类分析表明,人脂联素与已报道的其它哺乳动物的脂联素相似性达83%～96%。结论:成功地克隆了人脂联素基因全长序列,人脂联素与已报道的其它哺乳动物的脂联素序列具有很高的同源性。     

洋葱二氢黄酮醇-4-还原酶基因的分子克隆

鳞茎的皮色是洋葱的重要经济性状之一。洋葱的二氢黄酮醇-4-还原酶基因AcDFR1的开放阅读框为1158bp,编码385个氨基酸残基;具有5个内含子,均符合GT—AG规则。本研究为阐明洋葱皮色形成的分子机制以及开发分子标记奠定了基础。     

水曲柳结构域重新甲基化酶DRM基因片段的克隆及同源性分析

[目的]克隆并分析水曲柳结构域重新甲基化酶（DRM）基因片段.[方法]根据GenBank上已发表的DRM氨基酸序列,采取CODEHOP方法设计合成1对简并引物,采用RT-PCR技术对水曲柳DRM基因进行扩增,将PCR产物与pMD 18-T连接后转化至E.coli JM109感受态细胞,检测阳性克隆,测序并进行序列分析.[结果]克隆得到的DRM基因cDNA序列长802 bp,由267个氨基酸残基组成,命名为FmadrmA.序列比对表明FmadrmA与参考的12个物种的DRM在氨基酸水平上表现出较高的同源性,其与山葡萄、番茄、黄瓜、野草莓、大豆、苜蓿、玉米、烟草、拟南芥、毛果杨、水稻和乌拉尔图小麦的DRM同源性分别为61％、54％、51％、50％、60％、48％、43％、44％、37％、42％、42％和39％.系统进化树分析表明同源的DRM蛋白可大致聚为3类,而水曲柳与其他植物的亲缘关系较远.[结论]该试验成功获得了水曲柳FmadrmA基因片段,并对其进行了同源性分析,为进一步研究结构域重新甲基化酶基因及分析其表达特性奠定了基础.     

黑曲霉中国株(3.758)葡萄糖氧化酶(GOD)基因的克隆与结构分析

[目的]为充分开发黑曲霉在轻工业中的用途。[方法]以黑曲霉中国株(3.758)基因组DNA为模板,用LATaqDNA聚合酶对葡萄糖氧化酶(GOD)基因进行PCR扩增,扩增片段纯化后与pUCm-T载体连接后,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,经琼脂糖凝胶电泳法、酶切和PCR鉴定获得阳性克隆。对获得含GOD基因的克隆进行测序,分析其蛋白质氨基酸序列及限制性内切酶的图谱。[结果]经PCR扩增获得约1.8kb的片段。获得的GOD基因编码序列共1818bp,与报道的黑曲霉(ATCC9029)GOD基因序列仅有3个碱基之差。该基因序列具有多个限制性内切酶位点。黑曲霉不同菌株与中国株(3.758)GOD基因的同源性比较表明,不同黑曲霉菌株中GOD基因不同,而菌株ATCC9029与菌株NRRL-3是同一菌株。[结论]该研究获得了GOD基因的全长序列,为GOD的生物工程生产和相关植物基因工程奠定了基础。     

葡萄鲨烯合成酶基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR和RACE技术,克隆获得了葡萄鲨烯合成酶基因(SQS)的全长cDNA(1595 bp)。序列分析结果表明:该基因包含1个完整的1242 bp开放阅读框,编码413个氨基酸残基;葡萄SQS与三七(Panax notoginseng)、人参(Panaxginseng)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)的SQS分别有84%、83%、84%的一致性。     

萝卜STP13.2基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR技术克隆了萝卜（Raphanus sativus L.）STP13.2基因CDS序列,并对其进行测序和生物信息学分析。结果表明：RsSTP13.2 CDS序列全长1599 bp,编码532个氨基酸残基,分子式为C2678H4191N685O713S21。相对分子量为58.1 kD,理论等电点为9.29,脂肪指数为108.12,是稳定蛋白。RsSTP13.2蛋白包含12个跨膜结构,预测其可能定位于细胞膜;系统进化分析表明其与白芥、甘蓝型油菜和白菜等多个不同物种具有较高的同源相似性。本研究为下一步STP13.2基因的功能和表达调控机制研究奠定了基础。     

Aspergillus niger 乳糖酶基因的克隆及序列分析

利用PCR及RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)菌株DL116中克隆到了乳糖酶基因组DNA,cDNA序列(GENBANK ACCESSION No.EF103141)。序列分析表明,乳糖酶基因组DNA序列长3368bp,其中含有8个内含子,cDNA编码区长2967bp,共编码988个氨基酸,氨基酸序列中共含有12个潜在的糖基化位点。并将此基因与不同来源的乳糖酶基因进行了同源性比较。