RP-HPLC法测定复方银黄灌注液中黄芩苷的含量

采用RP-HPLC法测定复方银黄灌注液中黄芩苷的含量,以控制该制剂的质量.用C18烷基键合硅胶柱分离黄芩苷,以甲醇-水-冰醋酸(57:43:0.1)为流动相,检测波长280 nm.黄芩苷在16～81μG/mL浓度范围内呈线性关系(r=0.999 7,n=5);平均回收率为99.13%,RSD=1.03%(n=6).本法简便、快速,可用于该产品的质量控制.     

黄芩水煎液中黄芩苷的HPLC测定及其抗内毒素作用

通过HPLC法分析黄芩水煎液中黄芩苷含量,采用显色基质法鲎试验进行相关单体成分的抗内毒素定量测定。结果表明,黄芩水煎液中含量最多的单体成分为黄芩苷,显色基质法鲎试验结果表明,不同浓度(50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL)的黄芩苷溶液对内毒素的破坏率分别为45.08%、54.39%、57.45%、61.78%和82.80%,其破坏率呈浓度依赖性,可知黄芩水煎液中含量最多的成分黄芩苷具有灭活内毒素的作用。     

丹翘灌注液中连翘苷的含量测定

目的：建立丹翘灌注液中连翘苷的反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定方法.方法：采用SunfireC18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）,流速：1.0 mL/min;双波长吸光度检测器,检测波长：277 nm;柱温：30℃.结果：连翘苷在0.442-3.978 mg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 7）,平均回收率为99.75％,RSD为0.4％.结论：该法灵敏、简便、快速、准确,是测定丹翘灌注液中连翘苷的理想方法,可用于该制剂的质量控制.     

HPLC和原子吸收光谱法测定黄芩苷锌含量的比较研究

为了比较黄芩苷锌含量测定的不同方法,建立更加简单、快速的含量测定方法,分别采用高效液相色谱法法和原子吸收光谱法对黄芩苷锌原料药的含量测定进行研究。结果表明,HPLC测定黄芩苷锌线性范围为10.0~200.0 μg/mL,相关系数r=0.9999,精密度(RSD=0.08%)良好;原子吸收光谱法线性范围为0~2.0 μg/mL,相关系数r=0.9983,精密度(RSD=0.13%)良好,但前处理过程过于复杂,耗时太长。因此更推荐HPLC法。     

RP-HPLC法测定普抗合剂中黄芩苷的含量

建立了测定普抗合剂中黄芩苷含量的反相高效液相色谱法。采用Symmetry C18分析柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.006%磷酸(50∶50);流速1.0 mL/m in;色谱柱温度25℃;检测波长278 nm;进样体积10μL;外标法计算含量。结果表明,黄芩苷进样量在0.412~4.12μg范围内,其色谱峰面积与进样量间有良好的线性关系,r=0.999 5,n=5,回收率为99.48%,RSD=1.07%(n=5)。该方法可用于控制普抗合剂中黄芩苷含量。     

HPLC方法同步测定四黄止痢复方中黄芩苷和小檗碱的含量

本实验旨在建立HPLC同步测定四黄止痢复方中黄芩苷和小檗碱的方法,四黄止痢复方中草药经甲醇提取,以甲醇-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,C18色谱柱分离,278 nm波长检测。结果表明:在0.01～0.12 mg/L浓度呈良好的线性关系,加样回收率分别为(98.058±0.897)%、(98.401±0.882)%;重复性良好,相对标准偏差<1%。因此本法适用于四黄止痢复方中黄芩苷和小檗碱含量测定。     

复方杨黄灌注液对畜禽几种常见病原菌的体外抑菌作用观察

复方杨黄灌注液是兰州畜牧与兽药研究所研制的用于治疗奶牛乳房炎的中药制剂.采用杯碟法复方杨黄灌注液进行了对畜禽几种常见病原菌的抑菌试验,结果表明有良好的抑制作用.     

HPLC法同时测定芩黄颗粒中黄芩苷和甘草酸的含量

建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定芩黄颗粒中黄芩苷和甘草酸的含量。采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为252 nm,流速为1.0 mL/min。结果显示,黄芩苷和甘草酸的进样浓度分别在61.84～618.4、8.256～82.56μg/mL(R²=0.9999,0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;精密度、重复性和稳定性试验的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为100.0%、99.2%,回收率的RSD分别为1.0%、0.6%(n=6)。本方法操作简便、准确,可用于芩黄颗粒中黄芩苷和甘草酸含量的同时测定。     

HPLC法测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量

为了建立HPLC法测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量方法,在CLC-ODSC18柱上,以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相,检测波长280 nm,以外标法定量测定了黄芩苷-β-环糊精包合物黄芩苷的含量.结果:线性范围为20.0～80.0μg/ml,回归方程为Y=9753.1X 1546,r=0.9993(n=5),平均加样回收率为99.37%(n=5),精密度试验RSD为0.30%(n=6).本方法准确、可靠、重现性好,可作为黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量测定方法.     

HPLC法测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量

建立了用HPLC测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷含量的方法.色谱柱为CLC-ODS C18柱,以甲醇-水-磷酸(47∶ 53∶ 0.2)为流动相,检测波长280 nm,外标法定量.检测的线性范围为20.0～80.0 μg/mL,回归方程为y=9 753.1 x 1 546, r=0.999 3(n=5),平均加样回收率为99.37%(n=5),RSD为0.67%(n=6).本方法准确、可靠、重现性好,可作为黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量测定方法.     

卵黄抗体的使用方法

鸡卵黄抗体是利用免疫学理论研究生产的具有特异性的诊断、治疗和预防作用的生物制剂。根据抗原性,还可生产二联抗体,又称双抗,用于法氏囊、新城疫的治疗。特别是在动物源性食品安全倍受关注的现在,选用卵黄抗体无药物残留,无三致,是保证动物源性食品安全的新药。1作用范围将新城疫Ⅰ系苗、法氏囊强毒苗连续注射产蛋鸡3次,逐次加大次免疫量,3周后收集母鸡所产的蛋,无菌采取蛋黄,加生理盐水稀释成1押20混悬液,测定效价,加入抑菌剂,分装,-18℃冷冻保存。当进入机体后,卵黄抗体在酶的催化下具有抗感染、抗病毒的作用,具有高度可变性,能千变万化…     

猪链球菌高免卵黄液的研制试验

猪链球菌病由链球菌引起,是危害养猪生产的主要传染病之一,病猪和带菌猪是本病的主要传染源。通过对病猪注射猪链球菌高免卵黄液可明显遏止病情恶化,高免卵黄液注射后3d,试验猪抗体水平明显提高,连续观察15d,受试猪精神状态良好,未见不适症状或死亡,预防保护率达100%。     

磺胺类药物广谱性多克隆抗体的制备

基于磺胺类药物(Sulfonamides,SAs)公共母环(对氨基苯磺酰胺)结构,合成了两种具有该结构的半抗原∶2-(对氨基苯磺酸氨基)-4-噻唑乙酸(TS)和对氨基苯磺酰胺基苯甲酸(SS).采用碳二亚胺法合成了免疫原和包被原,分别免疫10只新西兰大白兔,制备广谱性磺胺类药物抗体.应用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清的灵敏度和特异性,发现所有兔子对TS-BSA和SS-BSA均产生较高效价和特异性.其中SS-1号和TS-6号兔的血清灵敏度最好,效价分别为1∶80 000和1∶160 000,对10种磺胺类药物均有不同程度的识别能力.SS-BSA组IC50为257.9～6 590.9 ng/mL,而TS-BSA组IC50为12.9～586.1 ng/mL.结果表明,具有磺胺母环结构的半抗原TS和SS,可以应用于广谱性磺胺类抗体的制备.通过10只兔子免疫试验证明,应用SS获得的血清具有较高的簇特异性、相似的亲和性,优于TS.     

恩诺沙星抗体的制备与鉴定

恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）又名乙基环丙沙星，为第一个畜禽专用的氟喹诺酮类药物，1983年由德国拜耳公司首先研制成功，国内产品于1994年投放市场。该药广谱抗菌，对霉形体和革兰氏阴性菌效力强，对革兰氏阳性及厌氧菌效果稍弱；内服及肌肉注射吸收迅速，且在体内代谢为同样具有抗菌活性的环丙沙星，代谢物生成与消除缓慢、分布广泛，是养殖户治疗畜禽疾病的常用药之一。     

兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG HRP酶标抗体     

抗猪IgG单克隆抗体的制备与应用

采用辛酸一硫酸铵盐析和SuperdexTM-200 凝胶层析分离纯化猪血清IgG,免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得8株稳定分泌抗猪IgG 单克隆抗体的杂交瘤细胞.Ig 亚类分析表明,所制备单克隆抗体的轻链亚类均为K,重链除6H3为IgG2b外,其余7株均属于IgG1.Western blot分析显示,5株单克隆抗体识别猪IgG轻链,3株单克隆抗体识别猪IgG重链.以蛋白G亲和层析纯化单克隆抗体7H1腹水,用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,结果显示,HRP 标记抗猪IgG单克隆抗体对纯化猪IgG的工作浓度达1:12 800.将HRP标记鼠抗猪IgG单克隆抗体与HRP标记羊抗猪IgG多克隆抗体应用于猪血清圆环病毒抗体检测,二者符合率为95.12%,其ELISA和Westem blot的工作浓度为1:2 000和1:10000,表明HRP标记抗猪IgG单克隆抗体具有高度的敏感性.本研究制备的酶标抗猪IgG单克隆抗体为猪病的免疫诊断试剂研究和猪细胞生物学研究提供了一种基础工具.     

抗双氯青霉素单克隆抗体的制备与初步鉴定

采用碳化二亚胺法,将双氯青霉素(dicloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆,获得1株可稳定分泌McAb的杂交瘤细胞5D4-C9-C8;间接ELISA方法测定,其细胞上清抗体效价为1∶300,腹水效价为1∶3.5×105,为IgG1,与其结构类似物邻氯青霉素、苯唑青霉素的交叉反应率分别为17.6%和26.1%,与苄青霉素、羟氨苄青霉素和氨苄青霉素均无交叉反应性。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。为进一步研制检测双氯青霉素的ELISA试剂盒奠定了基础。     

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立

选择一种新型载体阳离子化牛血清白蛋白（CBSA）与半抗原盐酸克伦特罗（CL）进行偶联．鉴定后作为免疫原免疫Balb／C小鼠，同时以卵清白蛋白（OVA）与CL偶联制备筛选抗原。应用杂交瘤细胞融合技术筛选后获得了1株稳定分泌抗CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2H5。抗体的亚类为IgM，腹水及细胞上清间接ELISA效价分别为1：20480和1：320，通过竞争阻断实验证明其具有良好的特异性及敏感性，将半抗原经酶标后应用竞争ELISA方法初步建立了CL的检测方法，检测限可达1ng／mL，为进一步制备CL残留检测试剂盒打下了基础。     

相思子毒素-α单克隆抗体的制备与鉴定

用含1%甲醛的磷酸盐缓冲液对相思子毒素-a(abrin-a)减毒处理制备类毒素,以类毒素为免疫抗原分4次免疫3只BALB/c小鼠.采用聚乙二醇(PEG)法,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选分泌抗abrin-a的单克隆抗体(MeAb)杂交瘤细胞株.将阳性细胞株接种BAI.B/c小鼠制备McAb腹水,根据亚类鉴定结果,分别采用蛋白A或蛋白G亲和层析柱纯化腹水,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测McAb特异性,Western-blot法分析McAb抗原识别位点.结果获得1G5、3C2和4G1共3株McAb杂交瘤细胞株,均为抗abrin-a的特异性McAb,与相思子凝集素、蓖麻毒素(ricin)和蓖麻凝集素均无交叉反应,其中4G1为特异性结合abrin-a A链的MCAb,1G5和3C2两株为特异性结合abrin-a B链的MCAb;制备的MCAb可用于abrin-a含量的检测.