猪肾传代细胞系IB-RS-2的研究

IB-RS-2传代细胞现已广泛地用于病毒分离,疾病诊断,病毒抗原的生产和疫苗制造等方面,整个细胞群体在传代培养过程中,有些细胞的遗传性可能发生变     

鸡新城疫病毒Ⅰ系在不同细胞上增殖特性的研究

为了在疫苗生产过程中实现应用传代细胞系大规模增殖培养鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),试验将NDVⅠ系分别接种至BHK-21、Vero与DF-1细胞系中,并对F1～F3代不同细胞培养物的凝集价、细胞半数感染量(TCID_(50))与鸡胚半数感染量(EID_(50))进行测定,研究NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞上的增殖特性,并确定培养NDVⅠ系的最佳细胞系。结果表明:NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞中均可增殖,并产生明显的细胞病变;F1～F3代细胞培养物随着传代次数的增加,凝集价(DF-1细胞除外)、TCID_(50)与ELD_(50)下降;用BHK-21细胞培养的病毒毒力显著高于另两种细胞培养物。说明在三种传代细胞系中,BHK-21细胞较DF-1与Vero细胞更适合于NDVⅠ系的生长。     

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID_(50))的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID_(50)绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID_(50)、鸡胚半数感染量(EID_(50))与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10~(6.375) EID_(50),细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID_(50)值为10~(7.0)/0.1 mL,EID_(50)为10~(7.5)/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。     

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID₅₀)的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID₅₀绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID₅₀、鸡胚半数感染量(EID₅₀)与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^6.375 EID₅₀,细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID₅₀值为10^7.0/0.1 mL,EID₅₀为10^7.5/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。     

新城疫病毒在不同的细胞上增殖特性的研究

研究新城疫病毒（Ｎｅｗｓｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）可,弱毒株在不同的传代细胞的生物学特性。Ｆ４８Ｅ８强毒株在ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ中都能增殖并产生细胞病变,而Ｖ４生弱毒株不能在ＢＨＫ和Ｖｅｒｏ中增殖,当ＭＥＭ含１０ｕｇ／ｍＬ胰蛋白酶时,ＮＤＶ弱毒株在Ｖｅｒｏ中能较好地复制,将Ｖ４株在Ｖｅｒｏ中传代培养后,Ｖｅｒｏ中传代的Ｖ４毒株的ＨＡ较低,但毒力增强,ＢＨＫ中传代的Ｖ４毒     

猪流行性腹泻病毒适应Vero传代细胞试验

在细胞培养液中加胰酶,使猪流行性腹泻病毒成功地适应于Ｖｅｒｏ传代细胞,第６代开始培养液中不含胰酶,仍可稳定出现易于判定致细胞病变作用,第８代毒价达８．０／０．１ｍｌ。     

猪伪狂犬病病毒在不同细胞上的增殖研究

为摸索最适合猪伪狂犬病病毒增殖的传代细胞,分别将猪伪狂犬病病毒按同一接种剂量接种PK-15、ST、Vero、CEF细胞,接毒后定时观察细胞病变情况,并进行TCID50测定,选择一种最合适的传代细胞用于猪伪狂犬病病毒的增殖。     

鸡新城疫病毒细胞苗的研究 概况

对鸡新城疫(ND)的研究已有60余年的历史,迄今尚未完全解决本病的控制,ND仍是各国养禽业的主要威胁之一。目前在各种综合防制措施中,免疫预防最为关键,也是本病研究中的热点。用于免疫的疫苗多为鸡胚苗。由于疫苗的广泛使用,使得鸡蛋中母源抗体水平普遍上升,以鸡胚接种制苗就会因母源抗体而影响效价。此外鸡胚还有可     

马立克氏疫苗病毒在鸡传代细胞上的培养工艺

为探索马立克氏病（Marek＇s disease,MD）疫苗病毒在DF-1细胞系上的最佳培养工艺以及由此方法制备的马立克氏病疫苗对鸡的保护效力,通过进行培养基和血清选择、病毒在DF-1细胞上接种稀释度和接种方式选择以及滴度测定,并制备以DF-1细胞为基质的CVI988和FC-126病毒疫苗,按中华人民共和国兽用生物制品规程（2000）检验合格后与其他商品苗进行保护效率对比试验。结果表明,试验成功探索了CVI988和FC-126病毒在DF-1细胞系上的培养工艺,以DF-1细胞为基质制备的疫苗也取得了和其他商品苗保护率相当的良好效果,因此推断DF-1细胞可以作为马立克氏病疫苗病毒的传代细胞培养候选基质。     

猪流行性腹泻病毒在微载体培养Vero细胞上的增殖试验

为了探索猪流行性腹泻病毒(PEDV)在微载体培养Vero细胞上的增殖效果,采用2 L生物反应器进行微载体培养Vero细胞和PEDV繁殖,并摸索细胞生长和病毒繁殖的最佳条件,检测病毒滴度,与方瓶培养的病毒滴度进行比较。结果显示:当微载体为5 g,种子细胞数约3.05×107个,采用灌注式培养,Vero细胞经72 h长满单层,细胞数约为3.02×109个,此时用滴度为104.45TCID50/m L的PEDV 1 m L感染Vero细胞,培养96 h,微载体上80%细胞脱落时收毒,培养的PEDV具有较高的病毒滴度。相同病毒在微载体系统与方瓶上进行同步传代,经检测病毒滴度均有提高,但在微载体系统上培养的PEDV最高滴度可达到106.05TCID50/m L,明显高于方瓶培养。本试验为研究PEDV能更好适应Vero细胞,提高PEDV产量提供技术支持。     

犬瘟热病毒强毒株在Vero-SLAM细胞上传代后的基因突变分析

为了了解犬瘟热病毒强毒株全基因组序列在Vero-SLAM细胞上传代培养后的突变情况,本试验利用犬瘟热病毒强毒分离株HeBei株第12代细胞毒,通过RT-PCR方法分段扩增犬瘟热病毒全基因,对扩增出的各个片段进行克隆和鉴定,并应用SeqMan程序将所测得的序列进行拼接成Hebei株全长cDNA序列。结果表明,全基因与原始序列相比有24处碱基突变,总突变率为0.15%,其中3处为非编号码区的突变,其余21处在编码区,碱基突变率最高的蛋白基因为F(0.36%),最低为N(无突变)。氨基酸突变率分别为N蛋白0.00%;P蛋白0.39%;M蛋白0.30%;F蛋白0.60%;H蛋白0.50%;L蛋白0.18%。表明犬瘟热病毒强毒株经Vero-SLAM细胞传代培养后基因突变主要发生在F蛋白基因上。     

板蓝根和黄芪提取液对鸡新城疫病毒在鸡胚上增殖的影响

为探讨板蓝根和黄芪提取液对新城疫病毒（NDV）的作用,通过分别测定将药液和病毒感作后接种于9日龄鸡胚、先接种药液再接种病毒和先接种病毒再接种药液3种不同的方式对NDV血凝效价的影响．研究了不同浓度板蓝根和黄芪提取液对NDV在鸡胚上增殖的影响。试验结果表明：不同浓度提取液在中和作用、阻断作用、抑制作用三个方面对NDV均有一定的效果．且药液抑制NDV感染力的作用强弱与药物的浓度和药物与病毒的作用方式均有关系。     

犬呼肠病毒3型在BHK-21细胞上增殖的研究

采用酶标ＳＰＡ法进行了犬呼肠３ 型病毒在ＢＨＫ２１ 细胞上定位的研究。结果表明：接毒后６ ｈ 即可在胞浆见到絮状阳性反应,２４ ｈ 后呈强阳性着染;Ｈ．Ｅ．染色在胞浆内可见强嗜酸性着染或嗜酸性包涵体,提示可能是病毒感染引起的特征性病变,感染后细胞病变发展较快,６０ ｈ 细胞大部脱落;病毒血凝滴度结果也证实了细胞病变与病毒增殖有关。     

中西药抗鸡新城疫病毒的体外试验研究

应用细胞培养的方法观辑了40味中药和4种西药抗鸡新城疫病毒的体外活性。结果表明，40味中药中15味有一定的治疗效果，药物选择指数在2．29—13．3之间；18味有一定的预防效果，药物选择指数在2．21—69．4之间；4种西药中仅利巴韦林有治疗和预防效果，药物选择指数分别为433．3和343．7。     

同胚增殖鸡新城疫-传染性支气管炎病毒效果的研究

本试验将鸡新城疫病毒LaSota株、传染性支气管炎病毒M41强毒株按不同倍数稀释后,同胚接种10日龄易感鸡胚,接种后72、96 h分别收获病毒液,通过鸡胚半数感染量(EID50)测定病毒含量。结果表明:72、96 h收获的病毒液病毒含量差异不明显,均能达到配苗要求,但72h病毒液收量最多。本试验为生产高质量鸡新城疫-传染性支气管炎二联灭活疫苗、降低成本提供了一定参考。     

ICHV在MDCK细胞上增殖的研究

采用免疫组化ＢＡ法进行了犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）在ＭＤＣＫ细胞上定位的研究．结果表明，接毒后１０小时可见细小阳性反应颗粒出现于肿胀的病变细胞核中．ＨＥ染色所见包涵体形态与临床发病犬肝实质细胞包涵体形态相似，提示可能是ＩＣＨＶ感染细胞所引起的特征性变化．同时测定的病毒血凝滴度结果表明，包涵体的形成与病毒增殖有一定关系，８４～９６小时收毒较为适宜．