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大肠杆菌是引发肠道疾病的一种主要致病菌,常引起犊牛、羔羊痢、仔猪痢和猪水肿病等,严重威胁动物健康,阻碍了畜牧业的发展,每年造成数以亿计经济损失。治疗该病的常规方法是使用各种抗生素,但随着大量耐药菌株的出现,治疗效果已不够理想。据报道目前许多国家25%的肺炎链球菌已 相似文献
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随着全球细菌耐药问题的日益严重,新型抗菌剂的研发迫在眉睫。噬菌体可以高效和专一地裂解细菌,因此逐渐重新受到人们的重视。参与裂解细菌的噬菌体蛋白系统(裂解系统)依据宿主菌类型不同,可以分为革兰氏阳性菌噬菌体的“穿孔素-裂解酶”系统和革兰氏阴性菌噬菌体的“穿孔素-裂解酶-穿膜蛋白”系统。穿孔素是一类疏水性的跨膜蛋白,起到破坏细菌内膜和调节子代噬菌体释放的作用。裂解酶是大多数烈性噬菌体所产生的蛋白,具有破坏宿主菌肽聚糖的活性和高度特异性。穿膜蛋白是革兰氏阴性菌噬菌体特有的裂解宿主菌辅助蛋白,可以促使宿主菌细胞膜与肽聚糖融合,导致细菌裂解。文章描述了噬菌体裂解系统的结构及其作用,综述了噬菌体裂解系统的相关研究进展,以期为应用噬菌体及其裂解酶防治致病菌的研究提供参考。研究发现,目前有关噬菌体裂解系统的研究主要集中在裂解酶,对穿孔素和穿膜蛋白的研究较少。 相似文献
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大肠杆菌是引发肠道疾病的主要致病菌,严重危害人类健康和畜牧业生产。近几年80%大肠杆菌已对家禽临床上常用的抗生素产生较强的耐药性,且多重耐药菌株普遍。目前,噬菌体治疗细菌性疾病受到了人们的关注,与抗生素相比, 相似文献
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为了筛选宽裂解谱禽源沙门氏菌噬菌体并分析其裂解性能,本试验首先对分离自不同年份、不同地区、不同宿主来源的238株禽源沙门氏菌(C01~C238株)进行药物敏感性检测和血清型鉴定,筛选出耐药率大于60.00%的抗生素;然后采用双层平板法测定50株沙门氏菌噬菌体(NP01~NP50)对238株禽源沙门氏菌的裂解谱并统计裂解率;最后选择裂解率最高的噬菌体,进一步统计其对筛选到的抗生素耐药的沙门氏菌菌株的裂解率及对不同分离年份、分离地区、宿主来源及血清型的沙门氏菌菌株的裂解率。结果表明:238株沙门氏菌对青霉素、阿莫西林、红霉素、利福平、复方新诺明的耐药率较高,均大于60.00%;其中对红霉素的耐药率最高,为88.24%;对头孢噻肟、氧氟沙星、庆大霉素、四环素的敏感率较高,为64.71%~86.13%。在238株被检沙门氏菌中,肠炎沙门氏菌有128株,鸡白痢沙门氏菌有95株,鼠伤寒沙门氏菌有6株,伤寒沙门氏菌有2株,甲型副伤寒沙门氏菌有1株,未定型沙门氏菌有6株。在50株沙门氏菌噬菌体中,有14株对238株沙门氏菌的裂解率在80.00%以上,有17株裂解率在20.00%以下;NP17的裂解率最... 相似文献
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为探索应用于治疗奶牛乳腺炎的噬菌体及裂解酶,从上海某奶牛场污水样品中分离、纯化金黄色葡萄球菌的裂解性噬菌体,分析其生物学特性.采用双层琼脂平板法分离、纯化噬菌体,观察噬菌斑特征;通过电镜观察噬菌体形态特征;测定其裂菌谱、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性,并原核表达相关的裂解酶.结果显示:本研究分离、纯化得到一株噬... 相似文献
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噬菌体作抗生素替代物用于动物生产,已被逐步认可和积极评价。将噬菌体应用于抗菌,主要是应用其裂解作用。为更科学地研发和应用噬菌体,本文综述了应用较普遍的dsDNA噬菌体近年来相关裂解机制的研究。目前发现,绝大多数dsDNA噬菌体均采用"穿孔素-内溶素"裂解系统,其主要由穿孔素和内溶素组成,分别破坏细菌细胞膜和肽聚糖层,致使细菌被裂解;而对革兰阴性菌的裂解,还需膜融合蛋白的参与。此外,还存在一种"针穿孔素-SAR内溶素"裂解系统,其主要由针穿孔素、信号锚定释放内溶素和膜融合蛋白组成,作用机制与上述裂解系统存在明显差异。本文为开发和应用噬菌体及其裂解相关蛋白提供了理论基础。 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(10):37-40
根据猪丹毒杆菌噬菌体基因测序结果,设计针对裂解酶(Ely)的特异性扩增引物,PCR扩增获得Ely产物,PCR产物经酶切后克隆入表达载体p ET-28a(+),获得重组质粒p ET-28a(+)-Ely,并转化至大肠杆菌BL21(Rosetta)中。以1mmol/L IPTG在28℃诱导8 h,SDSPAGE结果表明,蛋白在上清中高效表达;通过Ni2+-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,其纯度在90%以上;以100、10和1μg/m L的终浓度作用于猪丹毒杆菌培养物,每隔1 h进行一次菌落计数,直至7 h,结果表明该裂解酶在体外可以有效裂解猪丹毒杆菌,并呈一定的时间和剂量依赖性。该研究将为治疗耐药性猪丹毒杆菌感染提供新的思路。 相似文献
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以药敏试验筛选出的多重耐药猪霍乱沙门菌为宿主,经双层琼脂纯化法从健康猪粪便中获得裂解性噬菌体SP3383。电镜观察发现该噬菌体为长尾病毒科成员;酶切分析表明其基因组为大于47.4 kb的双链DNA,可被限制性内切酶Nco I和BamH I酶切;生物学特性研究表明SP3383对温度和酸碱环境耐受力较好;最佳感染复数为0.1,潜伏期约为30 min,爆发期约60 min,平均爆发量为48 PFU/cell。本研究可为应用噬菌体治疗耐药猪霍乱沙门菌感染提供参考。 相似文献
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通过生物信息学软件对噬菌体vB_EcoM-Bp7裂解酶基因的密码子用法及偏性分析。利用Mobyle中的CodonW 1.4.4及cusp程序计算密码子偏性的各种指标,并对7个噬菌体裂解酶基因序列中的总GC含量、密码子第1、2位GC含量平均值和第3位的GC含量进行分析,利用MegAlign软件对7株噬菌体裂解酶进行氨基酸序列分析,构建系统发育树。结果表明,除噬菌体phi68外,Bp7裂解酶基因与其他5株噬菌体的裂解酶基因密码子使用模式基本一致。偏爱使用以A或U为结尾的密码子;除了AUG(Met)和UGG(Trp)外,还确定了Bp7裂解酶使用的12种高频密码子;偏性比较发现,Bp7裂解酶基因密码子偏性与IME08最相近,与JS98次之;进化分析及聚类分析均表明Bp7裂解酶基因与IME08亲缘关系最近。分析结果将为进一步研究噬菌体Bp7的进化奠定基础。 相似文献
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随着细菌耐药情况的日益严重,人们开始寻找抗生素的代替物,噬菌体内溶酶(endolysin)和穿孔素(holin)受到了关注。其中内溶酶展现了良好的抑菌潜力,与抗生素和噬菌体制剂相比有着一定的优点。而内溶酶的作用特点决定了其在抑制革兰阴性菌时需要穿孔素的协同,因此有研究利用基因工程把内溶酶和穿孔素进行重组来解决这一问题。此外,在噬菌体-细菌相互作用的研究中,已有研究表明噬菌体基因参与调控细菌间的通讯系统,内溶酶和穿孔素正是其中重要的调控因素。本文通过对噬菌体与噬菌体制剂的研究进展、内溶酶和穿孔素抗革兰阴性菌的研究进展及其应用进行了综述,以期为未来有关噬菌体裂解酶的研究提供思路。 相似文献
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金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK的表达及其多克隆抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b—lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。 相似文献
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将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b-lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。 相似文献