黄瓜内生放线菌Hhs.015发酵液抑菌活性成分的研究

为了明确放线菌Hhs.015发酵液中的抑菌活性成分,试验采用硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离手段,以苹果树腐烂病菌为靶标菌进行活性跟踪,对发酵液中抑菌活性成分进行提取、分离和纯化,得到2种活性物质。采用ESI-MS、NMR等对活性物质进行结构解析,确定化合物为苯乙酸和染料木素。对苯乙酸和染料木素分别进行抑菌活性测定,结果表明,苯乙酸对苹果树腐烂病菌、小麦全蚀病菌和小麦纹枯病菌具有明显抑制作用,其EC_(50)分别为57.21,166.92和238.23μg/mL,。就对苹果树腐烂病菌菌丝生长的抑制作用而言,苯乙酸(EC_(50)=57.21μg/mL)优于市售药剂70%甲基硫菌灵可湿性粉剂(EC_(50)=154.39μg/mL),因此与阳性对照相比,苯乙酸尚具有一定的开发应用前景。染料木素对玉米大斑病菌和番茄早疫病菌具有抑制作用,其EC_(50)分别为522.40和311.53μg/mL,。利用HPLC方法测定了苯乙酸在发酵过程中的含量变化,发现发酵5 d时发酵液中苯乙酸含量较高。以上结果明确了放线菌Hhs.015发酵液中的部分抑菌活性物质及其抑菌效果,为后续研究提供了参考。     

植物内生放线菌Hhs.015T对油菜菌核病的防治效果

为有效地防治油菜菌核病,通过试验筛选得到一株植物内生放线菌Hhs.015^T,可显著抑制病原菌菌丝生长和菌核萌发。将Hhs.015^T的菌悬液和无菌上清液分别于接种前1 d、接种同时和接种后1 d 3个时期喷施油菜叶片和茎秆。结果表明,Hhs.015^T菌悬液和无菌上清液对油菜菌核病的防效之间不存在显著性差异,而不同喷施时期的防治效果则以接种同时喷施叶片的防效最好,菌悬液和无菌上清液防效分别可达91.06%和85.22%。大田试验中,于初花期喷施Hhs.015^T发酵液的防效可达41.27%,稀释后防治效果逐步降低。通过扫描电镜观察发现,Hhs.015^T对油菜菌核病菌菌丝生长具有明显抑制作用,并引起菌丝原生质体外渗、顶端膨大等现象;在菌丝侵染叶片时,能明显减少菌丝量,减缓侵染垫的形成,从而抑制菌丝的入侵。可见,植物内生放线菌Hhs.015^T具有较好生防潜力,可用于油菜菌核病的防治工作。     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

小蓟内生菌的分离鉴定与活性检测

从小蓟(Cirsium segetum)的根、茎中分离到一株细菌(XJb06.1)和两株真菌(XJf06.1,XJf06.2),经鉴定依次为球菌(Coccus)、毛霉科毛霉属(Mucoraceae Actinomucor)、丛梗孢科曲霉属(Monitiaceae Aspergil-lus).同时对所得3株菌抑菌活性进行检测.结果显示:XJb06.1对供试细菌和真菌均有抑菌活性,对供试细菌的活性物质主要在其代谢物中;XJf06.1和XJf06.2的发酵液提取物和菌丝体提取物对3种供试病原真菌均有抑菌活性,且总体上都是菌丝体提取物对病原真菌的抑制作用强于发酵液,其中)XJf06.1对苹果腐烂病原菌的抑菌活性最强,抑菌率达到了86.1%.     

鹅掌楸内生菌分离纯化及其抗菌活性初步研究

从鹅掌楸的茎、叶中分离出内生菌5株,以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）为供试菌,用杯碟法分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：鹅掌楸内生菌对4种供试菌有一定的押菌活性,不同组织中内生菌的抑菌活性存在差异,其中J1、Y3对供试菌具有普遍抑茼作用。     

拮抗放线菌PM-1鉴定及活性成分初步研究

菌株PM-1经形态学鉴定属于链霉菌灰褐类群,活性物质经过萃取、纸层析、薄板层析分析,该物质偏酸性,具有较强的极性,极易溶解于甲醛和甲醇.     

小檗内生放线菌H21的鉴定及抑菌活性成分分析

【目的】从药用植物小檗（Berberis thunbergii）中筛选抗菌活性内生放线菌,对活性菌株的分类地位及抑菌活性进行研究,分离并鉴定候选菌株发酵液中活性成分的化学结构及其抑菌活性,为农用杀菌剂的创制提供依据。【方法】采用选择性培养基从小檗叶片分离内生放线菌,16S rDNA法进行菌株鉴定;采用管碟法测定发酵液对烟草青枯病菌 （Ralstonia solanacearum）等7种供试菌的抗细菌活性,采用抑制菌丝生长速率法测定发酵液对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）等7种植物致病菌的抗真菌活性;依次采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析及反相高效液相色谱（HPLC）等技术分离纯化活性组分;采用核磁共振波谱（NMR）和质谱（MS）技术对分离到的活性成分进行结构鉴定;采用微量肉汤稀释法测定化合物对烟草青枯病菌等7种细菌的最低抑菌浓度,抑制孢子萌发法和菌丝生长速率法测定化合物对番茄灰霉病菌的抗菌活性。【结果】分离到一株活性菌株H21,该菌株经16S rDNA序列分析鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.）;除铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）外,H21菌株发酵液对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠埃希氏菌（Escherichia coli）等多种病原细菌有明显的抑菌活性;H21发酵液对番茄灰霉病菌表现出较强的抑制菌丝生长作用,对其他供试病原真菌无明显的抑菌活性;从H21菌株发酵液中分离鉴定了3个化合物,分别为N-乙酰基-2-(4-羟苯基)乙胺、环-（L-亮氨酸-L-精氨酸）和二硫吡咯类抗生素-全霉素;全霉素为广谱抗生素,其对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为0.156、0.313、0.078、0.313、0.156和0.313 µg·mL^-1;对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑菌中浓度（IC₅₀）分别为13.56和7.89 µg·mL^-1。【结论】小檗内生菌放线菌H21可能是一种新的全霉素产生菌,其对植物致病细菌烟草青枯病菌和猕猴桃溃疡病菌有抗菌活性,全霉素对于开发针对致病细菌的农用杀菌剂具有重要的参考价值。     

植物内生菌活性成分研究进展

植物内生菌是一种新的微生物资源,近年来通过内生菌途径得到的活性物质不仅种类繁多,而且有许多未开发的新化舍物,其中一些化合物在抗菌、抗肿瘤、抗病毒等方面有较高的活性,特别是新近筛选出对心血管疾病、艾滋病病毒显示活性的内生菌,引起广大科学工作者的重视。介绍了植物内生菌的生物多样性、产活性物质的内生菌种类、活性筛选策略。     

产抗菌活性物质植物内生菌的研究进展

植物内生菌是一种新的巨大的微生物资源,其产生的抗菌活性物质具有潜在的应用价值。笔者对植物内生菌及其产生的抗菌物质的发展现状,植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌抗菌物质的研究进展进行了综述,并讨论了植物内生菌抗菌物质的发展方向。     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

金银花内生菌EJH-1抗菌作用发酵培养基响应面法优化

首先采用P lackett-Burm an设计法,对影响金银花内生菌EJH 1抗菌作用发酵的9个相关因素进行了筛选。结果表明,对发酵液抗菌活性具有显著影响的因子是谷氨酸钠和KH2PO4。然后,采用响应曲面法(Response Surface M ethod-ology,RSM)(中心组合设计)对影响抗菌物质发酵的谷氨酸钠和KH2PO4最佳水平及其交互作用进行了研究与探讨。通过模型方程3 D图及其等高线图研究发现,谷氨酸钠和KH2PO4分别在5.12 g.L-1和2.13 g.L-1的条件下,可获得抑菌圈直径的最大预期值20.27 mm。验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间吻合较好。优化后的培养基使抗菌活性抑菌圈直径从起始Landy培养基的18.21 mm提高到20.27 mm。     

东莞与邻近地区土沉香居群的叶形态 和遗传多样性分析

利用ISSR 技术分析了土沉香也Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg.页4 居群的遗传多样性及遗传分化。应用9 条 引物从4 个居群共221 份样品中共扩增出105 个位点,其中多态性位点为104 个,多态位点百分率（PPB%）为 99.05%。等位基因数（Na）和有效等位基因数（Ne）分别为1.9905 和1.5854;Nei爷s 基因多样性指数（H）为0.3390, Shannon 信息指数（I）为0.5054,表明土沉香种内存在较丰富的遗传多样性。土沉香4 个居群总的遗传变异（Ht）为 0.3236,居群内的遗传变异（Hs）为0.2500,居群间的遗传分化系数（Gst）为0.2274,基因流（Nm）为1.6983。UPGMA 聚 类分析结果显示,电白居群和大岭山居群优先聚类,然后再与清溪居群聚类,而广西居群与其余3 个居群明显分离, 显示出较大的遗传分化;电白居群的大叶类群的分化大于小叶类群;东莞大岭山小叶类群与电白居群遗传相似性较 高,而大岭山大叶类群与清溪居群的遗传相似性较高。基于该研究结果,认为东莞大岭山居群部分来自清溪自然居 群,部分与电白居群来源相同,它们均来源于海南。     

杨凌糖丝菌Hhs.015拮抗苹果树腐烂病菌转录组分析及抗菌机制探究

杨凌糖丝菌Hhs.015是一株稀有放线菌,能够广谱高效地拮抗病原真菌.为了研究其抗菌机理,对Hhs.015拮抗苹果树腐烂病菌Valsa mali的过程进行转录组分析.鉴定到533个差异表达基因,其中310个基因上调表达,223个基因下调表达.在此过程中,杨凌糖丝菌Hhs.015的信号传递、能量供应、细胞壁合成等功能受到...     

猫儿屎内生真菌分离鉴定及抑菌活性研究

以新鲜猫儿屎为材料,采用组织分离法从其茎、叶、果实中分离内生真菌,采用形态学方法进行初步鉴定;采用滤纸片法测定猫儿屎内生真菌次生代谢产物的抑菌活性.从猫儿屎的茎、叶和果实中共分离出91株内生真菌,分别属于6目7科15属;曲霉属为优势种属,占总量的32％;91株内生真菌具有不同程度的抑菌活性,菌种DS37、DS58、DL06和DL14的抑菌活性较强.结果表明,猫儿屎内生真菌种类具有多样性,次生代谢产物具有广泛的抑菌活性.     

放线菌株D35的分离鉴定及其抗植物病原真菌活性

从湖南壶瓶山国家自然保护区土样中分离放线菌株,经平板对峙培养初筛和发酵过滤液抑菌试验,得到一个较好的菌株D35,其发酵液经5倍稀释对稻瘟病菌、柑橘炭疽病菌和烟草黑胫病菌的菌丝生长抑制率分别为47.6%、80.3%和54.2%.经培养性状观察,生理生化测定,并结合16S rDNA序列分析,初步鉴定D35为三泽链霉菌(Streptomyces misawanensis).     

XS904菌株发酵条件的优化及其杀虫活性物质的理化特性

从浙江象山港海涂泥样中分离的海洋放线菌XS904菌株发酵液具有较强的杀虫活性。文章以XS904菌株发酵提取物的杀虫活性为指标，对该菌株的发酵条件如培养基装量、培养基初始pH值、发酵温度及发酵时间等进行优化，同时对具有杀虫活性的发酵产物的部分理化性质进行研究。结果表明：利用黄豆粉培养基液体发酵时，在培养基装量为25m1，初始pH7．5，温度30℃的条件下，XS904菌株通过5d发酵后得到的产物的杀虫活性最高；该杀虫活性成分极性较强，具有较好的pH值稳定性和热稳定性。利用Diaion HP2MGL大孔吸附树脂柱层析进行初步纯化，杀虫活性物质主要集中于乙醇和水的体积比为4：6的洗脱液中。     

鬼针草抑菌物质提取及抑菌活性研究

采用正交试验法优化鬼针草抑菌活性成分的提取条件并研究其抑菌活性.结果表明,抑菌活性成分提取的最佳条件:95%乙醇在70℃下提取1次(2 h).鬼针草醇提物抑菌谱较宽,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、水稻纹枯和荔枝疫霉的抑制效果较好,对大肠杆菌、稻瘟菌无抑制效果.对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为12.5、6.25 mg·m L-1,对水稻纹枯、荔枝疫霉的抑菌率为60.4%、31.6%.鬼针草醇提物的抑菌活性具有较好的热稳定性,对紫外光照射稳定,p H 4-8时抑菌效果稳定.