蜡梅CpAGL6基因启动子的克隆及功能初步分析

利用hiTAIL-PCR法,从蜡梅（Chimonanthus praecox）基因组中克隆到花发育相关基因CpAGL6翻译起始位点上游1 266 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,该启动子序列中存在启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box及多个与植物非生物胁迫相关的响应元件。为进一步分析CpAGL6启动子的功能,构建该基因启动子与GUS基因融合的植物表达载体,并用农杆菌介导法转化烟草。对转基因烟草进行GUS组织化学染色及GUS酶活性定量检测,结果显示,CpAGL6基因启动子能够驱动GUS基因在转基因烟草的叶、茎、花中表达,并且在不同花期表达强度存在差异,在根中几乎不表达。转基因植株经黑暗、赤霉素和4 ℃低温处理后,GUS酶活性均有所增加。结果表明,CpAGL6启动子主要驱动GUS报告基因在花器官和绿色器官组织中表达,推测其在抵抗非生物胁迫中具有重要作用。     

桃PpPGIP1 启动子的分离与功能分析

 通过染色体步移法分离桃[Prunus persica（L.）Batch]PpPGIP1 上游启动子序列,利用生物信息学方法对其功能进行初步预测;构建该启动子植物表达载体并通过农杆菌介导法转化烟草,研究不同激素诱导条件下GUS 蛋白瞬时表达情况;并利用实时荧光定量RT-PCR 技术分析了PpPGIP1 在水杨酸（SA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、脱落酸（ABA）和1–氨基环丙烷–1–羧酸（ACC）诱导下的表达特性,获得了长度为1 018 bp 的桃PpPGIP1 启动子序列。该序列与梅和中国李PGIP 启动子序列的同源性分别为90%和89%;该启动子序列含有SA、MeJA、ABA 和ETH 诱导调控相关的抗病与胁迫顺式作用元件;ABA 和ACC 可以诱导PpPGIP1 启动子调控GUS 基因的表达;实时荧光定量RT-PCR 分析结果表明：SA、MeJA、ABA 和ACC 都可以诱导桃叶片中PpPGIP1 的表达。PpPGIP1 可能参与SA、MeJA、ABA 和ETH的信号转导,在桃抵抗病原菌和逆境胁迫方面起着非常重要的作用。     

菠萝AcSERK1启动子的克隆及其初步活性分析

【目的】探讨Ac SERK1启动子的活性,为进一步研究Ac SERK1转录调控的分子机制提供依据。【方法】利用hi TAIL-PCR法从菠萝基因组DNA中分离Ac SERK1启动子序列,并利用Plant Care和PLACE分析该序列的顺式作用元件。将启动子与GUS融合,农杆菌真空渗透法浸染烟草叶片后,光照处理、暗处理和0.5 mg·L~(-1)2,4-D处理36 h后利用组织化学染色法检测GUS活性。【结果】克隆了Ac SERK1上游2097bp启动子序列,命名为P_(Ac SERK1)。预测结果显示,该序列除含有TATA-box、CAAT-box等真核生物启动子核心元件外,还含有生长素、赤霉素和茉莉酸甲酯等激素响应元件,高温和低温胁迫响应元件以及光响应元件。瞬时表达结果表明,在光和2,4-D的诱导下P_(Ac SERK1)具有启动基因表达的功能。【结论】分离获得了Ac SERK1启动子序列且该启动子在光和2,4-D诱导下能驱动GUS的表达。     

柑橘CsHB1启动子的克隆及功能分析

以‘伏令夏橙’叶片基因组DNA为模板,克隆了CsHB1启动子5′端转录起始位点上游分别为1 741 bp和1 613 bp的区域序列。序列分析表明这两个启动子区序列相似度为90.7%,存在141 bp的差异片段,该差异片段中含有2个Box4元件。通过PlantCare数据库对启动子序列的顺式作用元件进行预测,结果表明CsHB1的不同启动子序列含有多种响应元件,如胚乳特异性元件、分生组织表达元件、光反应元件、热应激反应元件、MYB结合位点等。为进一步分析CsHB1启动子的功能,构建该基因启动子与GUS基因融合的植物表达载体prCsHB1::GUS,并用农杆菌介导法转化拟南芥,获得prCs HB1-1::GUS拟南芥纯合材料13株和prCs HB1-2::GUS拟南芥纯合材料10株。对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色鉴定,结果表明两类启动子表达载体已成功转入拟南芥中并进行了表达,其表达部位主要集中于愈伤组织和花药中,而在种荚、叶片及幼苗中未检测到GUS蛋白的表达。     

银杏查尔酮合成酶基因启动子（GbCHSP）调控元件及功能分析

通过染色体步移方法从银杏（Ginkgo biloba L.）基因组中克隆到查尔酮合成酶基因（CHS）翻译起始位点上游1 711 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,该启动子片段中存在多个顺式作用元件,包括紫外/蓝光响应单元、植物激素响应单元、真菌诱导元件、MYB结合位点、TATA-box和CAAT-box等。亚克隆了CHS转录起始位点上游1 402 bp序列,将其与GUS基因构建融合表达载体pBI121 + CHSP,以pBI121-35S作为负对照,通过农杆菌（LBA4404）介导法分别转入烟草。结果表明,银杏CHS启动子序列能驱动GUS基因在烟草中的表达,表达具有组织特异性。GbCHSP的功能研究将有助于揭示银杏叶黄酮的积累与GbCHS基因表达的分子机理。     

番木瓜诱导型基因CpPGIP2启动子的克隆与分析

【目的】获得诱导型基因Cp PGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜Cp PGIP2基因c DNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2 000 bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木瓜叶片DNA为模板克隆该启动子,并进行生物信息学分析。将3个启动子片段替换p CAMBIA1301载体中的Ca MV 35S启动子,构建缺失启动子表达载体,以GUS瞬时表达检测缺失启动子表达活性。【结果】获得了Cp PGIP2起始密码子上游长为1 981 bp的调控序列,经分析该序列含有真菌、脱落酸、赤霉素、光照等多种响应元件,为诱导型启动子。构建了1个启动子全长表达载体和2个5’端缺失启动子表达载体,分别命名为p D0-1981、p D1-1204和p D2-261。启动子在番木瓜果肉中的瞬时表达显示,长度为1 204 bp的启动子表达活性最强。并且,该启动子在根、茎、叶、果肉和愈伤组织中均有不同程度的表达,在近外果皮的果肉处和根部表达最明显。【结论】本研究获得了Cp PGIP2启动子序列,确定了表达活性最强的启动子长度,初步分析了启动子的表达模式和顺式作用元件,为进一步深入研究Cp PGIP2基因功能以及将该启动子应用于植物基因工程育种奠定了基础。     

海南杜鹃热诱导基因RhRCA1启动子的克隆与功能分析

为了阐述RhRCA1基因的调控机制,以海南杜鹃(Rhododendron hainanense)3年生扦插苗为材料,分析Rh CA1高温响应和组织表达特性;并克隆获得RhR CA1的启动子序列,将该启动子分别驱动荧光素酶报告基因在烟草中瞬时表达、GUS报告基因在拟南芥中稳定表达,分析该启动子活性、组织特异性和热诱导性....     

圆叶葡萄‘Noble’的芪合成酶STS启动子的功能分析

【目的】分析圆叶葡萄‘Noble’的芪合成酶(stilbene synthetase,STS)基因上游调控序列的顺式作用元件及其功能,为研究白藜芦醇在葡萄抗病机制中的作用提供理论基础。【方法】在前期通过染色体步移法分离得到圆叶葡萄‘Noble’芪合成酶Mr STS基因上游调控序列的基础上,利用Plant CARE在线启动子预测工具对其顺式作用元件进行初步预测,构建该启动子5’端侧翼序列缺失表达载体,启动报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达,并通过农杆菌介导法真空瞬时转化离体葡萄叶片,研究激素和霜霉菌诱导条件下GFP蛋白的活性差异。【结果】PlantCARE在线预测结果表明,Mr STS基因上游调控序列含有启动子的特定结构,如TATA-box、CAAT-box,另外也含有一些与逆境相关的顺式作用元件,如ABA响应元件ABRE、Me JA响应元件CGTCA-motif、赤霉素响应元件P-box、激发子响应元件Box-W1和胁迫响应元件TC-rich repeats等;不同诱导条件下,5’端侧翼序列缺失表达载体启动GFP蛋白的活性存在显著差异。【结论】Mr STS基因上游调控序列含有启动子核心区域和与逆境相关的顺式作用元件,并受ABA、Me JA和霜霉菌的诱导。     

甜樱桃砧木PcMPK3基因启动子的克隆及对病原菌感染的响应

【目的】探明PcMPK3基因的表达调控规律。【方法】利用染色体步移技术从甜樱桃矮化砧木Gisela 6中克隆PcMPK3基因的启动子序列PcMPK3pro。利用Neural Network Promotor Prediction、softberry、PLACE和PlantCARE网站在线预测PcMPK3基因的基础启动子、转录起始位点和顺式作用元件。将PcMPK3pro定向替换植物表达载体pBI121-SN1的CaMV35S组成型启动子,构建重组表达载体pBI-PcMPK3pro:GUS,瞬时转化烟草叶片。【结果】结果表明,PcMPK3pro含有启动子核心元件TATA-box和CAAT-box等多种响应胁迫的顺式作用元件。受病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000,Pst DC3000)侵染,PcMPK3pro能驱动GUS报告基因表达且GUS酶活性显著提高。【结论】推测PcMPK3基因参与植物响应病原菌感染的胁迫过程。     

菠萝AcSERK15’上游区(-499/+258bp)转录活性的研究

【目的】探究Ac SERK1启动子的功能,有助于了解Ac SERK1的表达调控模式。【方法】以‘神湾’菠萝(Ananas comosus L.‘Shenwan’)为材料,将Ac SERK1启动子缺失序列与GUS融合,构建植物表达载体,并导入根瘤农杆菌GV3101中。利用农杆菌真空渗透法侵染烟草叶片,并检测GUS活性;利用浸染法转化菠萝胚性愈伤组织获得转基因植株,分析光照、2,4-D和4℃等处理后的GUS表达量。【结果】构建2个Ac SERK1启动子植物缺失表达载体,分别命名为p(-30/+258 bp)和p(-499/+258 bp)。烟草瞬时表达结果显示p(-499/+258 bp)表现出强的GUS活性,p(-30/+258 bp)表现出微弱的GUS活性。q RT-PCR结果表明,光照处理后,GUS表达量降低。相反的,2,4-D和4℃处理转基因菠萝植株后GUS表达量均显著增加。【结论】Ac SERK1启动子-499/-30 bp区段内含有光、生长素和低温响应元件。     

Interaction between hHBrk1 and WAVE1 protein

AIM: To identify the binding sites between hHBrk1 and WAVE1 protein.METHODS: PCR was applied to clone the WAVE1 gene and its truncated domains from human fetal brain library. The gene fragments were sub-cloned into eukaryotic expression vector. Co-immunoprecipitation assay was used to identify the binding sites between hHBrk1 and WAVE1.RESULTS: The sequences of WAVE1 and the truncated domains were successfully amplified and sub-cloned into pCMV-HA vector. An HA tag was added to the fused protein at N-terminal. The interaction between hHBrk1 and the Scar homology domain(SHD) of WAVE1 was identified by co-immunoprecipitation. We also observed that WAVE1 bound to the heptad repeat(HR) domain of hHBrk1, and the site-directed mutations at HR domain abolished the interaction between hHBrk1 and WAVE1.CONCLUSION: hHBrk1 may play an important role in migration of tumor cells through binding to SHD of WAVE1 protein.     

四季秋海棠与球根秋海棠远缘杂种———樱桃海棠

 用粉红色的四季秋海棠为母本与红色的球根秋海棠进行远缘杂交, 获得了F₁代杂种。由F₁代中筛选出了3个高度重瓣、花朵如串串樱桃垂吊的樱桃海棠品系。其花朵硕大、色彩艳丽, 既有母本适应性强、花期长、繁殖栽培容易和不易倒伏等特性, 又因根茎部明显膨大,增强了抗寒性。     

早熟黄瓜新品种沂蒙1号的选育

母本YM-98-11来源于农家品种当地油皮黄瓜,父本YJ-99-6是笔者对1997年从日本引进的13个黄瓜品系进行筛选得到的优良株系。其杂种一代沂蒙1号,瓜长棒形,瓜把短,无棱无瘤,刺小且稀少,皮薄光滑油亮;瓜长20cm左右,横径4cm;肉质密,口感好,特别适合生食。抗枯萎病能力强,对霜霉病、白粉病的抗性和对照当地油皮相当。667m2产量在5000kg以上。适合鲁南地区春季保护地早熟栽培和春季露地栽培。     

分蘖洋葱新品种珠葱1号的选育

分蘖洋葱新品种珠葱1号是以雄性不育系MB01-79A为母本,自交系WMF01-06C为父本杂交育成的一代杂种。较耐低温,适于中、短日照条件下生长,生育期130～140d(天),与当地农家品种相比,其褪绿期延后达10d(天)左右;田间烂葱率低;皮紫红色,质地较硬,收口性好;单株分蘖数2～4个、单个鳞茎平均直径3.5cm、高3.8cm、质量15g;平均每667m2产量为2400kg左右,适宜在黑龙江、吉林和内蒙古等地栽培。     

胡萝卜新品种天红1号的选育

天红 1号胡萝卜是以雄性不育系HLBcms0 0 1号胡萝卜为母本 ,以HLBm0 0 1号胡萝卜为父本杂交而成的全红型一代杂种。植株生长势强 ,株高 5 1.78cm ,叶丛直立 ,深绿 ,有 8～ 11片叶 ;肉质根整齐 ,圆柱形 ,根尖圆形 ,根长 17.2 4cm ,根粗 3.12cm ,根质量 12 2 .8g,根表皮、韧皮部和髓部均为桔红色 ,可溶性固形物含量为 10 .17%,胡萝卜素含量为 113.0mg·kg-1,质脆 ,味甜 ,口感好 ,适于鲜食和加工 ;生长期 10 0～ 10 5d(天 ) ,平均每 6 6 7m2 产量34 38kg。目前已在天津、山西、河南等地示范推广。     

西葫芦新品种晋园1号的选育

晋园1号是以B214-6-2为母本,Q212-3-3-6为父本配制而成的杂交一代新品种。该品种早熟,矮秧型,节间短,宜密植。前期产量高。第1朵雌花节位5节左右,雌花多,瓜码密,坐瓜能力强,瓜条膨大快。瓜条长棒形,瓜皮白绿色,瓜棱明显,种腔小,品质好,适宜保护地栽培。平均产量可达7 000 kg/667 m2。     

黄瓜新品种"吉杂迷你一号"的选育

"吉杂迷你一号"黄瓜是以欧引4-1-1-1-1为母本,以自交系S1-1-4-2为父本配制而成的华南型黄瓜一代杂种.植株生长势强,以主蔓结瓜为主,全株雌性,节成性强,结瓜数多,果实商品性状优良,短棒状,果长14～16 cm,单瓜重50～80 g,果腔小,果皮深绿色,有光泽,品质好,无刺无棱基本无果粉,果型整齐一致,品质好,肉质细脆,微甜有香气,1 hm2产量10万kg.适宜春、秋大棚和日光温室栽培.     

早熟茄子新品种蓉杂茄1号的选育

蓉 杂茄１ 号是 用地方品 种单株系 选的优 良自交系８５０１ 作 母本，８６０３ 作 父本配制 的早熟茄 子 一 代 杂 种 ， 果 实 长 棒 形 、深 紫 色、光 泽 度 好。 单 果 质 量 约 ２６５ ｇ ， 平 均 产 量 ３ ５００ ｋｇ ·（６６７ ｍ ２） － １ ，较 抗病，适 合于长江 流域栽培 。     

华南型黄瓜新品种春华1号的选育

春华1号的母本8072是从广东引进品种粤早2号后代中分离选育而成的适宜春秋露地栽培的优良自交系,父本73-1-3是从辽宁绥中县引进旱黄瓜品种(代号8273)中分离选育出的优良自交系。春华1号植株生长势强,叶深绿色,主蔓结瓜为主,雌花节率90 %左右。瓜条短圆筒形,瓜皮浅绿色,瓜条顺直,表面光滑无棱沟,刺瘤白色、小且稀少,平均瓜长17.4 cm,横径3.3 cm,3心室。瓜把长1.7 cm,小于瓜长的1/7。肉厚占横径的61.2 %。田间对霜霉病和细菌性角斑病的抗性优于鲁黄瓜3号。商品性好,风味品质优良。平均单瓜质量137.5 g,每667 m2产量6 000 kg左右。