Dot－ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ免疫抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫、再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平；带母源抗体（ＭＡｂ）的雏鸡于２１日龄首次免疫，效果良好；带ＭＡｂ的鸡胚于１８日胚龄接种ＩＢＤ弱毒苗，雏鸡出壳后可在较长时间内获得良好的保护。     

鸡肾变型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从上海地区具有肾变型临床特征的鸡群中分离到３株传染性支气管炎病毒（ＩｎｆｅｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＩＢＶ），分别取名为ＳＴ株、ＳＪ株、ＳＣ株。３株病毒通过鸡胚２～５代后，引起半数以上的健康鸡胚发育受阻，蜷缩或死亡，并随传代代次增加而强化；分离株对乙醚敏感，无血凝性，５６℃作用６０ｍｉｎ失去对鸡胚的感染力；１１日龄鸡胚ＣＥＩＤ５０为１０－５．５～１０－６．５；分别用ＳＴ、ＳＪ、和ＳＣ株的第４代培养物攻击１日龄雏鸡，４８～７２ｈ出现肾脏肿大，拉白色稀粪等特征性症状，５～７天全部死亡。ＳＴ株电镜观察病毒有典型的冠状结构，有纤突。     

鸡传染性囊病二价活疫苗最佳配比试验

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗毒株最佳配比试验，将ＢＪ８３６毒株与ＢＫ９１２毒株按病毒含量分别配成ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ５种不同配比疫苗，免疫１４日龄ＳＰＦ雏鸡，免疫后１４天进行ＩＢＤＶＩ型强毒ＣＪ８０１和变异株强毒１０８４Ａ的攻击。结果表明：ＢＪ８３６与ＢＫ９１２为ｅ配比值疫苗对ＣＪ８０１或１０８４Ａ毒株的攻击保护率达９０％以上，表现出最好的免疫攻击保护效果。该毒株配比可作为研制该二价活疫     

鸡法氏囊病野毒的分离,细胞毒的培养及鉴定

从发生法氏囊病（ＩＢＤ）的免疫肉鸡群的法氏囊病料中分离到１株病毒。该病毒致使非免疫鸡胚病变、死亡和鸡胚成纤维细胞病变。将其５代内细胞培养毒回归非免疫鸡胚和适龄鸡，复制出类似于野毒引起的鸡胚病变和典型ＩＢＤ病例，鸡的死亡率为１／３￣２／３。其５代细胞毒的灭活制剂，使非免疫鸡在接种后２１天或３２天１００％出现ＩＢＤ琼扩阳性。     

鹅副粘病毒毒力特性的研究

新城疫病毒毒力的判定标准是根据国际上规定的３项指标,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）,１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）等加以评价。将分离到的１１株鹅副粘病毒中选取了其中３株,即ＨＧ９７Ｃ５,ＹＧ９７Ｆ１１,ＹＧ９８．２Ｃ４,按照新城疫病毒毒力判定的标准方法进行了一系列致病性试验。结果为：３株鹅副粘病毒的ＭＤＴ分别为５６．７、５２．０、５     

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将ＭＧ不同菌株的培养物，经卵黄囊接种ＳＰＦ鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后３￣１３ｄ内达８２％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染ＭＧ所致，测定了ＭＧＩｃ１菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有密切关系。在ＳＰＦ源鸡体上致病力低下的二株ＭＧ菌株的鸡胚致死率为６０％￣９０％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊     

Dot—ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫，再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平，带     

TAD－3鸡传染性法氏囊病弱毒细胞疫苗的研究

将ＴＡＤ鸡传染性法氏囊病鸡胚弱毒疫苗适应于鸡胚成纤维细胞制成ＴＡＤ－３弱毒细胞疫苗，其毒价稳定在１０７·５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ以上；２８日龄雏鸡免疫接种后１４ｄ抗体琼扩（ＡＧＰ）阳性率为１００％，雏鸡接种１０５ＴＣＩＤ５０证明安全，现场使用效果理想。但不宜以大剂量的ＴＡＤ－３（≥３×１０４ＴＣＩＤ５０）和新城疫疫苗同时。服免疫接种，以免干扰新城疫的免疫效果。     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性比较

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气管环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备的ＴＯＣ测定ＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＤ５０，结果用ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制备的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较高滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＤ５０明显低。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎毒株H_（95）的研究

从某疫区的鸡腺胃病鸡群中分离到Ｈ＿（９５）毒株，在ＳＰＦ鸡胚稳定传至１５代，具有规律性死亡和典型胚胎病变特征，ＥＩＤ＿（５０）＝５×１０（－５．５）／ｍｌ。用病料和鸡胚尿囊液毒分别感染试验鸡，均引起与自然病例相同的典型病理变化。病料和Ｈ＿（９５）鸡胚尿囊毒提纯的病毒液经负染后电镜观察，均具有典型冠状病毒形态。病毒液经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝集鸡红细胞，并能破相应的抗体所抑制。采用率抗、多抗介导的间接ＥＬＩＳＡ和血凝抑制试验交叉反应表明，Ｈ＿（９５）株与ＩＢＶ行密切的血清学关系。用反转录聚合酶链反应获得了Ｈ＿（９５）毒株的免疫原（Ｓ＿１）基因，经ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印和ＩＢＶ的Ｓ探针检测均呈阳性。结果表明，从腺胃病变型鸡群分离的Ｈ＿（９５）毒株属冠状病毒科ＩＢＶ成员     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性…

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备在ＴＯＣＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＣ５０，结果用于ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较镐滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＣ５０明显低。     

IBDV对SPF鸡的致病性研究

ＩＢＤＶ对ＳＰＦ鸡的致病性研究朱瑞良，张绍学，唐珂心，牛钟相，孙蕙兰，柴家前，常卫山，徐海花（牧医系）关键词：ＳＰＦ鸡，人工接种，ＩＢＤＶＰＡＴＨＯＧＥＮＩＣＩＴＹＯＦＩＢＤＶＴＯＳＰＦＣＨＩＣＫＥＮ￥ＺｈｕＲｕｉｌｉａｎｇ；ＺｈａｎｇＳｈａｏｘｕｅ...     

肉鸡和蛋鸡早期发育阶段胰岛素样生长因子水平的比较

应用放射免疫分析法，对出雏后５日龄和１０日龄的肉鸡和蛋鸡血清中胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－１）水平进行了测定。结果表明：胚后早期发育阶段，蛋鸡的血清ＩＧＦ－１水平随体重的增加而增加，并且高于肉鸡，尤以１０日龄时更为显著（Ｐ＜０．０１）。不同品种相同日龄的雌性雏鸡间差异不显著，但雄性蛋鸡的血清ＩＧＦ－１水平却显著高于雄性肉鸡（Ｐ＜０．０１）；另外，同一品种雏鸡的血清ＩＧＦ－１水平未见有显著的性别差异（Ｐ＞０．０５）。     

鸡传染性囊病二价活疫苗安全性试验

使用ＳＰＦ鸡进行鸡传染性囊病二阶活疫苗的安全性试验，以１０倍推荐免疫剂量２００００ＴＣＩＤ５０接种７日龄ＳＰＦ雏鸡，接种后７２小时至１２０小时鸡法氏囊有轻度可逆性损伤，１６８小时恢复正常，观察期中接种鸡健活无异常，接种后２１天剖杀，试验鸡的平均囊指烽为０．８７，表明该二价活疫苗是安全的。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎毒株H95的研究

从某疫区的鸡腺胃病鸡群中分离到Ｈ９０毒株，在ＳＰＦ鸡胚稳定传至１５代，具有规律性死亡和典型胚胎病变特征，ＥＩＤ５０＝５×１０＾－５．５／ｍｌ。。用病料和鸡胚尿囊液毒分别感染试验鸡，均引起与自然病例相同的典型病理变化。病粒和Ｈ９５鸡胚尿囊毒提纯的病毒液经负染后电镜观察，均具有典型冠状病毒形态。     

斑点免疫金检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

通过胶体金标记提纯后的兔抗ＩＢＶＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物，检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）。ＤＩＧＦＡ对ＩＢＶ的最小检出量为２０．３×１０￣（－８）ｇ，在１０份自然病例样品中检出８份。鸡胚培养法以育传３～５代，出现侏儒胚者为阳性，从上述样品中检出６份。对接种ＩＢＶ的鸡胚尿囊液，ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简便、灵敏、快速、特异性强和重复性好等优点。     

TAD—3鸡传染性法氏囊病弱毒细胞疫苗的研究

将ＴＡＤ鸡传染性法氏囊病鸡胚弱毒疫苗适应于鸡胚成纤维细胞制成ＴＡＤ－３弱毒细胞疫苗，其毒价稳定在１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ以上；２８日龄雏鸡免疫接种后１４ｄ体琼扩阳性率为１００％，雏鸡接种１０＾５Ｔ ＣＩＤ５０证明安全，现场使用效果理想。但不宜以大剂量的ＴＡＤ－３和新城疫疫苗同时口服免疫接种，以免干扰新城疫的免疫效果。     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞     

鸡传染性囊病活疫苗安全和效力试验

使用ＳＰＦ雏鸡进行３批鸡传染性囊病中毒力ＢＪ８３６活疫苗的安全和效力试验。１０倍剂量接种７日龄ＳＰＦ雏鸡，在２１天观察期中接种鸡均无任何传染性囊病的特征性症状出现，健康存活，剖杀观察无异常，接种组平均囊／体比与对照组之间均无显著 差异，平均囊指数达０．９０以上，疫苗通过安检。     

禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化

３２只１日龄ＳＰＦ鸡随机分为３个试验组和１个对照组。试验组分别腹腔接种３株禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ－Ｔ、ＲＥＶ－ＤＩＡ和ＲＥＶ－Ｃ４５）,０．５ｍＬ／羽;对照组注射等量生理盐水。在不同时期检测感染鸡外周血白细胞数的动态变化。结果发现,各试验组鸡的白细胞总数和异嗜性白细胞百分率及总数均呈先升高后降低的趋势;淋巴细胞百分率先降低后升高,而淋巴细胞总数则在接种后第３天显著（Ｐ＜０．０１）高于对照组,第１０天起则显著低于对照组。各试验组间白细胞数的变化不尽相同。