一株沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定与生物学特性研究

以1株多重耐药沙门菌(SA209)为宿主菌,从安阳市某规模化养殖场污水样本中分离出1株沙门菌裂解性噬菌体,命名为SA-1。采用点滴法和双平板法分离、鉴定及纯化了SA-1,并对其效价、最佳感染复数、酸碱稳定性、热稳定性、一步生长曲线等生物学特性进行了研究。结果表明:SA-1的初始效价为1.15×10^{(10 )}PFU/mL;最佳感染复数为0.001;对酸碱的耐受性较强,在pH 3.0～11.0范围内活性稳定;在40～50℃温度内活性稳定;其感染宿主菌的潜伏期为10 min,裂解期为20 min,之后进入稳定期,平均裂解量为108 PFU/cell; SA-1的核酸类型为DNA。     

一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20 μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD₆₀₀值变化测定其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1, 噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1-2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为dsDNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10-100 kD,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围（31-317 kb）;生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏菌时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;该噬菌体的裂解活性在28℃时最高,在28-50℃均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在pH 3-8的范围内均有较强的裂解活性,当pH值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0-9 min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。【结论】分离到了裂解性的青枯雷尔氏菌噬菌体,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科,经过测定其各项生物学特性可知其潜伏期较短,裂解能力较强,具有很好的杀菌效果,且其裂解活性持续时间长,并能在不同温度、不同酸碱性的环境内有较强的适应能力,具有开发为抗青枯雷尔氏菌菌剂的潜力。     

兔源大肠埃希菌噬菌体分离鉴定与生物学特性研究

对浙江省某兔场腹泻病兔进行病原分离鉴定,经革兰氏染色和PCR鉴定,分离出致病性大肠埃希菌1株,命名为ZJE1株。ZJE1株对链霉素、环丙沙星敏感。以ZJE1株为宿主菌,分离纯化出噬菌体4株,分别命名为ZRP2、ZRP3、ZRP4和ZRP5,并对其生物学特性、形态与结构特征进行研究。结果显示,4株噬菌体分离株均由六角形的头部、可收缩的尾鞘和尾管组成,均属于肌尾噬菌体科。采用双层平板法测定噬菌体分离株的宿主谱、最佳感染复数、pH稳定性、热稳定性和一步生长曲线。结果显示,ZRP2、ZRP3、ZRP4和ZRP5具有宿主特异性,在37~55 ℃的条件下可保持良好活性。ZRP2、ZRP3在pH值7的条件下可保持良好活性,ZRP4、ZRP5在pH值5~7的条件下可保持良好活性。ZRP2、ZRP3、ZRP5的潜伏期为11~19 min,均能在体外裂解ZJE1株。研究成果可为应用噬菌体治疗兔大肠埃希菌病提供研究基础与数据支持。     

肠炎沙门菌噬菌体vB_SalP_QS的生物学特性及治疗小鼠沙门菌肠道感染的研究

为探索针对耐药沙门菌的噬菌体治疗方法,以沙门菌SE-21为宿主菌,从污水中分离得到一株烈性噬菌体并命名为vB_SalP_QS。在鉴定vB_SalP_QS生物学特性的基础上,对vB_SalP_QS和vB_SalP_SE29混合噬菌体治疗由沙门菌SE-21引起小鼠肠炎的治疗效果进行评价。结果表明：1）电镜观察可见该噬菌体属于有尾病毒目（Caudovirales）,其效价为8×10⁸ PFU/mL。2）vB_SalP_QS的最佳感染复数（MOI）为0.01,潜伏期为40 min,裂解期为50 min。温度为4~60 ℃具有较好的活性,在pH 4~pH 10范围内非常稳定。平板点滴法试验表明vB_SalP_QS可以裂解17株沙门菌,裂解率为44.7%。3）噬菌体vB_SalP_QS的全基因组测序分析显示,噬菌体vB_SalP_QS全长42 293 bp,GC含量为49%,共含有72个开放阅读框,且不含有溶源性、毒力因子及整合酶基因。4）小鼠体内治疗试验显示,宿主菌SE-21对小鼠最小致死量为5×10⁸ CFU/mL,感染小鼠经vB_SalP_QS （100 μL 1×10⁷ PFU/mL）和vB_SalP_SE29 （100 μL 1×10⁷ PFU/mL）混合治疗后存活率为100%,单独用vB_SalP_QS治疗组 （200 μL 1×10⁷ PFU/mL）的小鼠存活率为80%,单独用vB_SalP_SE29治疗组（200 μL 1×10⁷ PFU/mL）的小鼠存活率为70%,对照组全部死亡。5）病理组织观察表明,混合噬菌体可以有效杀灭沙门菌SE-21的同时,还能更好地保护小鼠肠绒毛,可显著提高感染SE-21的小鼠存活率。综上,噬菌体vB_SalP_QS具有良好的酸碱稳定性、热稳定性以及安全性,混合噬菌体联合治疗效果优于噬菌体单一治疗。本研究为噬菌体制剂治疗沙门菌感染提供了重要依据,也为混合噬菌体鸡尾酒疗法的临床应用奠定基础。     

5株乳酸菌的分离鉴定与生物学特性研究

从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究.结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为粪肠球菌,RVI、RST为屎肠球菌.其中RS菌株具有较好的耐酸性、一定的胆盐耐受力,对温度敏感;RB、RPT、RST、RO菌株对模拟肠液具有较强的耐受力,45-55℃处理30 min不影响其生长;5个菌株对大肠杆菌O<,157>和沙门氏菌的抑菌率均达到98%-100%,可作为优良的益生菌候选菌.     

生物制品公司周边环境中2株大肠杆菌噬菌体的分离鉴定

为了检测生物制品公司周边环境中噬菌体的种类及含量,以大肠杆菌(CMCC44102)为宿主菌,对生物制品公司污水处理厂污水样本中的噬菌体进行了分离纯化,并对纯化样本的一般生物学特性进行了鉴定。实验分离获得了2株噬菌体ΦL和ΦS,ΦL噬菌斑直径为1~2mm,ΦS噬菌斑直径为0.1~0.3mm。2株噬菌体在电镜下形态极为相似,均可见明显头部和尾部结构,头部呈正多面体,直径约为33nm;尾部较短,长约21nm,可见爪刺样结构。ΦL与ΦS的一般生物学特性大多相似,前者效价为2.129×10~(10) PFU/mL,后者为2.5645×10~(10) PFU/mL;2株噬菌体的最佳感染复数均为10;在37℃及以下温度均具有良好的稳定性;且均对宿主菌,即大肠杆菌(CMCC44102)具有高度属特异性。一步生长曲线结果表明,ΦL的潜伏期和爆发期均显著短于ΦS,说明ΦL生长能力强于ΦS。上述结果表明,生物制品公司周边环境中存在大量噬菌体,并对一些重要工程菌具有高度特异性,应高度关注并防止其对生物产品质量产生影响。     

广西猪源沙门菌的分离·鉴定和耐药性研究

[目的]了解广西地区猪源沙门菌的流行情况、耐药现状及致病力情况。[方法]从广西不同地区11个规模猪场采集99份病料,进行细菌的分离、菌体形态特征观察以及生化鉴定,对分离菌进行常用抗生素药物敏感试验,最后对分离株进行小鼠致病性试验。[结果]从99份病料里分离到21株沙门菌,分离率21%。药敏试验表明,分离菌株对阿米卡星、头孢噻肟、氨曲南、左氟沙星具有较高的敏感性,对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明等产生较高的耐药性。致病性试验表明9株分离菌株可导致小白鼠死亡,致死率为43%。[结论]分离菌株存在较严重的耐药现象及较强的致病性。该研究为该地区有效控制沙门菌病的发生以及兽医临床上的合理用药提供可靠的理论依据。     

15株NDV地方株的分离鉴定与生物学特性

从1998~2002年河南省洛阳地区代表性新城疫发病禽群中分离鉴定了15株新城疫病毒(NDV),并对其生物学特性进行了研究。结果表明,15株NDV均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制特性;对鸡胚的致病作用可被新城疫阳性血清所抑制;对鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT),1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉内接种的致病指数(IVPI)的测定证实,LD-6-01和LR-2-00株是弱毒株,其余均为强毒株;弱毒株的血凝素热稳定性较好,属慢速血凝解脱型;强毒株的血凝素热稳定性差,属快速或中速血凝解脱型;所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大。对HI抗体为6log2的12日龄雏鸡攻毒试验结果表明,15个分离株中2个弱毒株可得到100%保护;13个强毒株中,LG-1-99,LR-1-98,LD-4-01和LD-3-00得到了70%~90%的保护,而其他9个分离株(LD-1-98,LD-2-99,LD-5-01,LD-7-02,LR-3-02,LW-1-02,LG-2-00,LA-1-99和LE-1-01)基本上得不到保护(0~20%),但所有得不到保护的试验组鸡的发病死亡时间均明显向后推迟。     

羔羊源沙门菌的分离鉴定与药敏试验

为了解某地区规模化养殖场及散养户中引起腹泻死亡羔羊的沙门菌流行情况。采集2022～2023年规模化养殖场及散养等腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等病料组织123份,采用细菌分离培养、形态学观察及生化鉴定试验对采集的123份病料组织进行沙门菌的分离鉴定,并采用K-B药敏纸片法对分离的菌株的进行耐药性分析。结果显示：从2022～2023年规模化养殖场及散养户中腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等123份病料组织中分离得到78株沙门菌,其分离率为63.4%(78/123)。分离的78株沙门菌对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、新霉素、庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药性较高,耐药率分别为100.0%、97.4%、94.9%、83.3%、79.5%、66.7%;78株沙门菌对头孢噻呋、头孢噻肟、多西环素氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素、林可霉素等8种药物的耐药率为7.7%～29.5%之间,可以在临床中推广与应用。     

稀有放线菌噬菌体ΦSCU20的分离及其生物学特性的研究

以稀有放线菌小单孢菌40027菌株为指示菌,从土壤中分离得到1株新噬菌体,命名为ΦSCU20。在测试的9株放线菌菌株中,仅能感染小单孢菌40027菌株和A-M-01菌株。电镜观察显示噬菌体ΦSCU20由多面体的头部和尾部组成。噬菌体ΦSCU20生物学特性研究表明,噬菌体ΦSCU20形成噬菌斑时培养基中适宜的Ca2+和Mg2+浓度分别为8 mmol/L和20 mmol/L;噬菌体ΦSCU20在储存液中适宜的pH值为8;噬菌体ΦSCU20不耐高温,经40℃保温30 min后,其活力降低到48.65%,经60℃保温30 min后,则完全失活;噬菌体ΦSCU20基因组特性研究表明,该噬菌体的基因组为双链DNA,基因组大小约为65 kb。     

一株海洋弧菌噬菌体--NP13的生物学特性研究

１９９６年夏季,从大连星海湾海滨浴场采集的海水样品中,以河流弧菌Ⅱ（Ｖｉｂｒｉｏ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ－Ⅱ）为批示菌,从中分离出一株噬菌体－ＮＰ１３。对ＮＰ１３的形态进行了电子显微镜观察分析。并对其生物学特性进行了初步的研究。结果表明：ＮＰ１３在５０℃、３０ｍｉｎ和６０℃、３０ｍｉｎ下的存活率各约为９５％和４５％,并在ｐＨ５～１１之间均具有很高的稳定性。     

羊源链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究

从豫西某羊场单纯性流产羊的胎儿与羊水中分离到一株球菌，将该菌人工感染试验动物，证实为致病菌。通过对该细菌的形态特征、培养特性、生化特性及致病特性等进一步检测，证明该分离菌为羊链球菌。同时对该细菌的耐药性进行了检测，结果表明，该菌对庆大霉素、卡那霉素高敏，而对青霉素产生了极强的耐药性。     

1株鹌鹑源鸡白痢沙门菌的分离鉴定及致病性初探

为查明某养殖场鹌鹑大量死亡的原因,采集病死鹌鹑的脏器进行病原的分离鉴定,测定疑似细菌的耐药情况,并进行动物回归试验.结果表明:病死鹌鹑剖检病变主要表现为肝脏肿大呈土黄色,肾脏肿大;分离菌株在麦康凯培养基上呈无色、半透明菌落;能发酵赖氨酸和β-半乳糖苷;采用选择性培养基培养和多重PCR(mPCR)试验确定其为鸡白痢沙门菌;该菌对苯唑西林等6种抗菌药耐药,呈现多重耐药性;气囊接种鹌鹑的半数致死量(LD50)为9.5×105 cfu.这一研究说明鹌鹑的死亡是由鸡白痢沙门菌引起的,为鹌鹑的种群防控净化提供了理论依据.     

2株山西IBV分离株的生物学特性研究

[目的]控制地方鸡传染性支气管炎病的流行。[方法]通过IBV-21、IBV-22半数感染量(EID50)试验,鸡胚矮小化试验,干扰NDV LaSota复制试验,鸡胚气管环试验测定2毒株生物学特性。[结果]试验结果显示IBV-21的EID50为5×10-4.616·mL-1、IBV-22为5×10-6.5·mL-1;接毒胚明显病变,2株毒对鸡胚均有矮小化作用,对NDV LaSota有明显干扰,对鸡胚气管环试验病变明显,RT-PCR的方法扩增2分离株的S1基因的特异条带大小约为293bp。[结论]该生物学特性显示分离的2株病毒对鸡胚有明显致病作用且2毒株不是现存疫苗毒,为地方IBV疫苗研发奠定基础。     

一株野生地生亚侧耳的分离鉴定及其生物学特性

从西藏农牧学院校园采集到一株野生亚侧耳(编号为HGHZ02),为了使该菌种得到更好的开发和利用,对其进行了鉴定和生物学特性研究。通过形态学和ITS序列聚类分析,鉴定菌株HGHZ02与勺状亚侧耳(Hohenbuehelia petaloides)的相似度达到100%,但通过形态学鉴定与地生亚侧耳形态特征最相似,因此将菌株HGHZ02鉴定为地生亚侧耳(Hohenbuehelia geogenia)。菌株HGHZ02菌丝最适生长碳源为麦芽糖,最适生长氮源为麦芽浸粉,最适温度为25℃,最适pH为pH 7.0,最适无机盐为磷酸氢二钾。正交试验结果表明,菌株HGHZ02最佳生长因子组合为麦芽糖25.0 g/L、麦芽浸粉3.0 g/L、pH 7.0和温度26℃。     

1株产色素毛壳菌的分离鉴定及其生物学特性

为筛选出能够产生色素的真菌,采用组织分离法从核桃枝干上分离鉴定出1株产天然红色素的毛壳菌属真菌YLHT−2A,通过形态学和ITS分子方法对菌株进行鉴定,并对菌株YLHT−2A的生物学特性进行研究。结果表明：菌株YLHT−2A鉴定为金色毛壳（Chaetomium aureum）;该菌株最佳培养基为PDA培养基,最佳培养温度是30 ℃,最佳生长光照条件是24 h全黑暗,最佳生长pH为10。     

闽北地区鸡源肠炎沙门菌的分离鉴定与致病性分析

为了解福建闽北地区鸡源肠炎沙门菌(SE)的生物学特性及致病性,从该地区肉鸡规模化养殖场鸡群采集疑似病例,通过细菌分离培养、生化特征检测和PCR鉴定进行SE的分离鉴定,并对分离菌进行耐药表型检测和动物感染致病性研究。分离菌耐药表型检测结果显示,经分离鉴定得到的11株鸡源SE,对氨基糖胺类和β-内酰胺类耐药比较普遍,且多重耐药菌株占比高达81.81%;致病性检测结果显示,攻毒组鸡只在感染后24 h开始出现死亡现象,3～6 d为死亡高峰期;剖检结果显示,攻毒组鸡只肝脏淤血肿大,肠道组织充血、出血,肠壁变薄;病理切片观察显示,攻毒组鸡只肝脏和肠道组织出现大量炎性细胞浸润、细胞坏死的情况;细胞因子表达水平的检测结果显示,SE感染诱导鸡只肝脏和肠道组织促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α的表达水平极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)升高,而盲肠组织紧密连接蛋白ZO-1和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)下降。表明本地区鸡群感染的沙门菌血清型以SE为主,具有较强的致病力,分离株对氨基糖胺类和β-内酰胺...     

小鹅瘟病毒YZ-0703株的分离鉴定及生物学特性研究

 从扬州郊区某鹅场死亡的、具有小鹅瘟典型病变的雏鹅肝、脾、肠病料组织中分离到一株病毒。经过试验鉴定,该毒株能与小鹅瘟阳性血清发生沉淀反应,通过电镜可以观察到典型的细小病毒样粒子;人工感染雏鹅,可引起发病和死亡,并与自然病例有相似的临床症状和病理变化。该毒株的鹅胚半数致死量（ELD50）为106.160.2 mL,最小致死量病毒致死鹅胚的平均时间(MDT)为93.6 h;结果表明,该野外分离病毒为小鹅瘟强毒株,命名为YZ-0703株。     

新城疫病毒地方株分离鉴定及部分生物学特性研究

从某养鸡场发病率为90％、病死率为80％的鸡群中分离到一株病毒。通过血凝(HA)试验、血凝抑制 (H1)试验、鸡胚中和试验及回归试验初步鉴定为鸡新城疫病毒。继而进行了鸡胚半数感染量(EID50)、最小致 死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)测定等生物学特性研究和对不同动物红 细胞的凝集试验,证明该分离株属新城疫强毒力毒株,命名为YL株。     

油茶叶斑病菌的分离、鉴定及生物学特性研究

对中国热带农业科学院油茶研究中心油茶资源圃采集到的油茶叶斑病叶片进行病原菌分离、鉴定,并研究其生物学特性。通过对病原菌培养特性、形态特征的观察及rDNA的转录间隔区(ITS)序列测定,与Genbank中同源性较高的菌株进行序列对比,最后将菌株20-1确定为可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)。生物学特性研究表明,20-1菌丝在PDA培养基上生长最快,菌丝生长的最适宜温度是20～35℃,pH值及光照对菌丝生长的影响均不大,果糖为最佳碳源,硝酸钠为最佳氮源。