三种水稻基因组DNA快速提取方法的比较

用分子标记辅助选择进行精细定位和遗传改良时,首先就需要大批量提取植物DNA,作为PCR反应的模板。水稻基因组DNA常用的简易提取方法有碱处理法和高温水煮法等,本文改进了常规的CTAB方法,提出另一种简便的高质量DNA提取方法,称“简化法”,并比较了这三种方法提取的DNA在数量、质量上的差异,以及作为PCR模板时扩增效果,确定了在精细定位和遗传改良时“简化法”是一种较优的方法。     

外源DNA导入水稻后代变异性的SSR分析

采用花粉管通道法,将高粱DNA导入水稻,获得了34个稳定的变异品系,从60对SSR引物中筛选出17对,对供体高粱、受体水稻及其外源DNA导入后代稳定材料进行了SSR分析,结果表明,高粱DNA导入水稻可以引起广泛的变异,在分子水平上产生了遗传多样性,聚类分析可将其分为五类,各类有其特有的遗传变异性。接受外源DNA三个片断,两个片断及一个片断的株系分别被聚成一类,与其他类的遗传差异分别为0.467,0.389及0.347,变异程度依次递减;未接受外源DNA两个片断的株系被聚成另一类。因此,接受外源DNA片断的多寡是水稻后代稳定品系变异程度的基础,也是它们分类的标准。     

黄瓜授粉后外源基因直接导入技术研究

以黄瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）栽培品种津研四号为受体,以质粒ｐＢＩ１２１为供体进行授粉后外源ＤＮＡ直接导入技术的研究,建立起高效的黄瓜子房注射转化系统,获得了不同的转基因植株。试验表明,子房注射法的坐果率和结种率最低,但其转化率最高;黄瓜授粉后１２ｈ注入外源基因的转化率最高;外源ＤＮＡ溶液的浓度、ｐＨ值及ＤＮＡ溶液注射体积是影响黄瓜坐果结实及基因转化率的重要因素。ＧＵＳ组织化学染色结果以及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ印迹杂交表明,标记基因ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因均转化到黄瓜植株中。     

一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法

本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法.该方法只需将少量(4～6 mg)植物叶片、适量(200μL)TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入1个2 mL离心管,在多功能组织细胞研磨器中振动5 min破碎组织后,直接取1μL DNA溶液作为PCR的模板.本方法具有简单快速、操作效率高、成本低、扩增效果好等优点,特别适合于大量样品的基因型检测.     

一种适用于棉花种子的DNA快速提取方法

对已报道的小麦、玉米等作物基因组DNA快速提取方法进行改良,首次在棉花上进行了尝试。以棉花种子为材料,用SDS法、NaOH法和简化法提取基因组DNA。结果表明,3种方法提取的DNA条带均较为清晰,完整性好,PCR扩增效果明显,结果稳定可靠。但DNA简化提取法整个提取过程操作简单、花费时间少、成本低,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。相比常规的以棉花叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低试验成本的同时大大提高了工作效率。     

一种应用PCR缓冲液快速制备水稻DNA模板的方法

本研究介绍一种应用PCR缓冲液快速制备水稻DNA模板的方法。操作方法如下:取少量水稻叶片,用剪刀剪碎后移至200μL离心管或96孔PCR板中,在每个样品中加入50μL 0.5倍的PCR扩增缓冲液,置于PCR基因扩增仪上在95℃条件下煮12 min,取出,无需离心,所得提取液直接作为DNA模板用于PCR扩增。结果表明,该方法所制备的水稻DNA模板在PCR扩增中稳定、准确,其效果与用常规SDS法提取的相当,且这种DNA模板可在短期内保存而不影响扩增效率。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,适合推广应用。     

水稻外源基因导入研究的现状及其在育种中的应用

1引言 水稻是世界上最重要的农作物之一,全球有近一半的人口以水稻作为主粮.水稻育种一直是各国育种学家最重视的研究课题.目前,水稻育种实践中仍主要采用杂交育种等常规育种手段.但是近20a来,随着生物技术的迅速发展,各国育种学家愈来愈广泛地采用基因工程等现代生物技术于水稻育种研究中,试图将一些控制优良性状的外源基因导入水稻,从而培育出高产、优质、抗性强的水稻新品种.     

一种棉花DNA快速提取方法

本研究以棉花子叶为材料,探索一种适用棉花批量SSR-PCR分析的DNA快速提取方法。本方法只需要两次加液,两次高温水煮即可完成。紫外检测结果表明,所得DNA浓度较好,纯度较差,含有较多蛋白质。但SSR分析结果显示,可以扩增出相应的带型,且清晰易辨,准确可靠。相比常规CTAB法,具有操作简便,成本低,效率高,且无毒,无污染的优点,适用于大量棉花样品的SSR-PCR分析。     

改进的TPS法:一种棉花叶片DNA快速提取方法

分子标记辅助选择需要大批量的DNA样品,快速提取DNA的方法是提高选择效率的关键。研究比较多种植物DNA的提取方法,通过优化改进,建立了适于棉花叶片基因组微量快速提取的新方法。该方法增加缓冲液预处理及在TPS缓冲液中添加PVP40,采用PCR板批量取样、微型手电钻磨样,省去了蛋白抽提、DNA沉淀、洗涤、风干、溶解等步骤,免去氯仿和异戊醇的使用。本方法具有低成本、快速、高通量、操作简单等特点,而且能确保提取的棉花DNA的浓度和纯度达到要求,满足大批量样本SSR分子标记辅助育种工作的需要。     

分子标记结合田间观察快速鉴定外源DNA导入玉米的变异后代

本研究通过花粉管通道导入技术将甜高粱总DNA导入优良玉米自交系4112和8902中,并应用RAPD标记技术从导入后代中筛选出变异后代。从306个RAPD引物中筛选出79个引物对供受体及导入后代进行鉴定,其中10个随机引物在供、受体和导入后代间有多态性。对D1和D2代进行田间茎秆糖分调查,并对D2代室内考种,发现糖分含量和穗长、穗重、轴粗、穗粒重等穗部性状都发生了明显变异。结合分子鉴定结果,最终获得了一批变异材料。     

导入外源DNA小麦蛋白质变异性的研究

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析外源蜿豆花ＤＮＡ直接导入小麦体的种子蛋白质,结果表明：变异系小麦种子蛋白质组分出出现广泛变化,小偃６号和超大穗小麦分别增加４７ＫＤ,７１ＫＤ和９０ＫＤ,８５ＫＤ蛋白质新组分,蛋白质含量也相应增加约２２％和３１％,“中国春”小麦却出现了９２ＫＤ,８２ＫＤ蛋白质组分消失现象,其蛋白质含量也稍有降低,这此变异现象在后代中亦然表达,因此基因直接转移技术是优质分子育种和品质改良的新途径。     

水稻SSR分析快速提取总DNA法

为满足水稻SSR分析需要大规模DNA样品的要求,以水稻幼苗叶片为材料,采用改良的CTAB法提取水稻基因组DNA.经质量和纯度检测结果显示：改进的方法程序简单,药品用量少,省时省力,且提取DNA的OD260/OD280均在1.8～1.9之间,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增条带清晰、无污染、无降解.表明该方法适用于SSR分析的水稻基因组DNA的提取,所得DNA的质量和纯度完全满足试验要求.     

利用等位基因特异扩增快速检测水稻香味基因

水稻香味受隐性基因控制, 杂合材料不表现出香味, 因此在香稻选育中需要寻找一种快速、简便的香味基因检测方法。本试验通过等位基因特异扩增(ASA)方法对9个香稻和3个非香稻品种 (品系), 以及3个香稻/非香稻组合的F1的香味基因, 进行快速检测。结果显示, 纯合非香稻可获得长度为585和355 bp的两条带, 纯合香稻可获得长度为577和257 bp的两条带, 杂种F1可获得长度为355、257和580 bp左右的3条带。供试材料的分子检测结果与香味基因型完全相符, 所用方法快速有效, 可应用于香稻育种实践。     

水稻外源DNA导入系的创建及主要性状分析

通过花粉管通道法将稗草总体DNA和玉米总体DNA导入水稻受体R122中,获得的D1代变异频率分别高达1．487％和3．81％。对稳定的3个玉米DNA导入系和4个稗草DNA导入系研究表明,与受体R122相比,导入系在株型、株高、生育期、分蘖力、着粒密度、粒形、稃尖颜色、稻瘟病抗性、稻米品质、恢复力和耐储藏性等生物学性状方面发生了广泛的变异。同时讨论了外源DNA导入水稻的变异频率和在水稻育种中的应用前景。     

一种基于PCR的水稻SNP标记检测方法

旨在找到一种简便的SNP检测方法用于水稻种性鉴定及遗传多样性分析,本研究以245份长江中下游主推杂交水稻品种及亲本为研究材料,从1319个SNP位点中筛选出124对多态性高的位点,建立SNP的高效检测体系。选用其中的1个标记sf0141821553和SSR的标记RM7120来检测水稻的纯度,分别利用Caps-AccI标记和SNP-sf0601764762扩增亲本及杂交后代Wx的基因型,两者结果完全一致。用124对位点对245份杂交水稻进行遗传多样性分析,聚类分析显示,245个品种间的遗传相似系数在0.64～0.97之间。以遗传相似系数0.64为阈值,可以将245个水稻品种分为2个类群,这2个类群分别在遗传相似系数为0.712和0.667处又可以分为2个亚群。结果表明材料间存在明显的群体结构,能精确区分待测品种的基因型以及品种间的遗传差异。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来实现SNP标记的检测,方法简便且不需要大型仪器设备和昂贵的试剂,便于实验室开展水稻品种的鉴定工作。     

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。     

动物饲料中植物源性外源转基因成分的检测

针对宠物饲料、奶牛饲料和浓缩饲料等不同类型饲料的特点,采取相应的不同DNA提取方法,通过对组成饲料的所有作物成分相应内源基因的检测,确定待测饲料样品的作物组成成分,并建立了各类饲料中转基因成分的检测技术。有针对性地论述了饲料检测中可能出现的问题、技术难点和关键技术,为实际检验工作提供可借鉴的建议。     

外源激素对水稻中胚轴伸长的影响

国际水稻研究所的研究表明,水稻直播法优于栽培法,直播法不仅省工、省水,而且免除了稻农弯腰躬背之累,减轻劳动强度,还使水稻幼苗未遭拔秧引起的损伤,前期生长条件好,营养生长快,比移栽稻成熟早,即使在缺水情况下,其单产也高于移栽稻[1].但出苗难是目前制约直播稻发展的国际性难题之一.直播大田出苗率与中胚轴长度密切相关[2].目前所用的一些半矮秆品种,直播时由于中胚轴较短,苗难于出土[3,4],中胚轴长的品种适于直播,其种子发芽后,中胚轴明显伸长,顶土能力强,且直播后能通过较长时间淹水以控制杂草萌发,保持较高出苗率;另外在大干旱年份(如1994年夏),可深播以利于种子吸取必要的水分[9],其中胚轴伸长使苗出土,仍保持较高出苗率.过去,对于这个问题的解决是从栽培方法着手,而关于外源激素对品种中胚轴伸长的影响研究甚少.激素在植物的生长和发育过程中起着重要的调控作用,它能诱导种子休眠,抑制种子萌发和胚芽鞘的伸长,促进幼胚合成蛋白并且能对多种环境胁迫做出反应等[5～8].本文探究外源激素对水稻中胚轴伸长的影响,将有利于水稻直播技术在我国的进一步发展.