多头绦虫抗原特性的研究：———绵羊免疫及感染后的细胞应答反应研究

分别用多头蚴原头节抗原、原头节排泄分泌抗原、囊壁抗原、囊液抗原对绵羊免疫注射３次,以及攻击感染多头绦虫虫卵后,运用酸性α－醋酸萘酯酶染色法及姬姆萨染色法研究了外周血液Ｔ淋巴细胞、Ｂ淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的应答反应。结果表明,绵羊感染多头绦虫虫卵后外周血液中Ｔ淋巴细胞数量增加,Ｂ淋巴细胞数量减少,感染后第５周到第６周Ｔ淋巴细胞数量达到峰值,此后开始下降,第３２周时趋于正常,淋巴细胞总数在感     

多头绦虫抗原特性的研究──应用IHA观察绵羊免疫及感染后的抗体消长规律

为了观察绵羊用多头蚴抗原免疫及感染后的抗体消长规律,为羊脑多头蚴病的免疫预防和免疫诊断提供依据,本试验应用多头蚴原头节可溶性抗原、囊壁可溶性抗原、囊液粗抗原致敏绵羊红细胞对绵羊免疫3次及虫卵攻击感染后的血清抗体进行间接血凝试验（IHA）检测。结果表明,原头节抗原免疫组、囊壁抗原免疫组、囊液抗原免疫组及原头节ES抗原免疫组在首次免疫后1周,抗体滴度迅速升高,第3次免疫后1周达到峰值,虫卵感染后开始下降,到感染后30周接近正常水平。多头蚴3种抗原对同种抗原免疫组血清检测敏感性、特异性优于其它抗原,原头节免疫组、囊壁免疫组、囊液免疫组抗体水平明显高于原头节ES抗原免疫组。     

多头绦虫抗原特性的研究：应用IHA观察绵羊免疫及感染后的抗体？…

为了观察绵羊用多头蚴抗原免疫及感染后的抗体消长规律，为羊脑多头蚴病的免疫预防和免疫诊断提供依据，本试验应用多头蚴原头节可溶性抗原，囊壁可溶性抗原，囊液粗抗原致敏绵羊红细胞对绵羊免疫３次及虫卵攻击感染后的血清抗体进行间接血凝试验检测。结果表明，原头节抗原免疫组，囊壁抗原免疫组，囊液抗原免疫组及原头节ＥＳ抗原免疫组在首次免疫后１周，抗体滴度迅速升高，第３次免疫后１周达到峰值，虫卵感染后开始下降，到感染     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节，囊壁，囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头涤虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律，结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达峰值，一直持续到试验结束，免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试     

绵羊细粒棘球蚴全血金标渗滤检测方法的建立

为建立一种快速、高效的诊断家畜细粒棘球蚴病方法,提取绵羊细粒棘球蚴包囊新鲜囊液,盐析囊液抗原,点样于硝酸纤维膜,以胶体金-驴抗羊IgG和胶体金-兔抗鼠IgG为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测绵羊与人工感染细粒棘球蚴小鼠血清和全血特异性抗体。患病绵羊阳性血清及全血检出率在90.91%~94.4%,细粒棘球蚴感染小鼠血清及全血检出率均为100%;细粒棘球蚴阴性羊血清和全血假阳性率为4.00%~4.59%;与脑多头蚴病血清交叉反应率为28.57%(2/7)。研究结果表明细粒棘球蚴全血金标渗滤法(DIGFA)可应用于绵羊棘球蚴病的诊断与检疫。     

棘球蚴病免疫诊断的新进展

一、囊状棘球蚴病(CHD,细粒棘球绦虫) 20年前,当Capron及其同事(1967)用免疫电泳从免疫了细粒棘球蚴囊液的动物血清及感染棘球蚴的病人血清中描述了一条主要沟沉淀带时,他们为囊状棘球蚴病血清学诊断的特异性的“金标准”(Gold Standard)奠定了基础。这条沉淀带,作者们把它称为“弧5”,是生发层及原头节所分泌的一种热稳定脂蛋白抗原抗体应答的结果。这一抗原是迄今为止已鉴定的细粒棘球绦虫中绦期物质中最具免疫原性、最特异的组分(Schantz等,1986;Richard等,1986)。在许多不同地区对数千病例的检测表明,在滴人血清中证实“弧5”是感染细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫或伏氏棘球绦虫任一种的直接阳性证据。在Varela—Diaz等(1978)报道感染猪囊尾蚴的病人血清中亦发生“弧5”反应之前,还没有在未     

用ELISA法观察模型小鼠原发性感染细粒棘球绦虫后特异性抗体的变化规律

分别用较高纯度的细粒棘球绦虫六钩蚴抗原和传统使用的囊液抗原对一次感染和二次感染细粒棘球绦虫六钩蚴的小鼠血清进行ELISA测定，认为寄生于不同部位的包囊刺激机体产生的抗体水平不同．同时检测早期抗体时，六钩蚴抗原比囊液抗原更具有阶段性优越性。小鼠二次感染六钩蚴后六钩蚴抗体水平得到明显加强，并推测认为一次感染产生的六钩蚴抗体可能是具有保护性的抗体。     

酶联免疫吸附试验诊断绵羊和黄牛棘球蚴病的研究

以兔抗正常绵羊血清的IgG与CNBr活化的Sepharose 4B交联作免疫吸附剂进行亲和层析,除去绵羊棘球蚴囊液(SHF)中的绵羊血清成分。用亲和层析纯化的SHF作抗原进行酶联免疫吸附试验(ELISA),对棘球蚴感染绵羊和黄牛的敏感性分别为92.16％和95.83％;健康绵羊和黄牛的特异性分别为95.63％和93.33％;细颈囊尾蚴感染绵羊有22.73％出现阳性反应。讨论了宿主抗原对ELISA结果的干扰,以及各种带科绦虫的中绦期幼虫之间的交叉反应问题。     

丙硫咪唑治疗藏羊原发性细粒棘球蚴的病理形态学观察

应用常规病理学和组织学技术,检查丙硫咪唑治疗后自然感染细粒棘球蚴的藏系绵羊体内棘球蚴囊的大小,所含囊液的量及原头蚴的存活力。大体观察显示棘球蚴囊大部分萎缩、钙化。光镜下观察到角质层变性、断裂,嗜酸性增强;生发层核浓缩或消失,甚至全部脱落坏死;原头蚴崩解为碎片。并见大量炎性细胞浸润。     

旋毛虫感染小鼠对p46 000重组抗原的抗体应答

分别以旋毛虫肌幼虫ES抗原和p46000重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA检测。结果表明，以肌幼虫200条／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后9d可检出抗体，并于感染后35～42d达到最高水平；应用重组抗原检测时，感染后10d可检出抗体，抗体水平略低于用ES抗原，但是其消长规律基本一致．而且与阴性血清相比差异明显；抗体在117d后仍维持于较高水平。     

细粒棘球蚴14-3-3重组蛋白免疫小鼠T淋巴细胞亚群的动态研究

为研究细粒棘球蚴14-3-3(r Eg14-3-3)重组蛋白免疫小鼠的细胞免疫机制,本研究利用r Eg14-3-3、弗氏佐剂和PBS分别免疫3组ICR小鼠,每隔两周免疫一次,在第三次免疫后4周,以原头蚴攻击感染,采用流式细胞术分别检测免疫后0、2、4、6、10、18、30周小鼠外周血中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的百分率。攻击感染24周后迫杀鼠,检获棘球蚴包囊数并计算减囊率。结果表明:与对照组相比,r Eg14-3-3免疫组CD4~+T细胞和CD8~+T细胞在原头蚴感染后均显著增高,rEg14-3-3蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为84.47%。本研究表明r Eg14-3-3免疫小鼠在原头蚴攻击感染后T淋巴细胞数量显著增加,该重组蛋白能够诱导有效的抗感染细胞免疫应答。     

棘球蚴的SDS－PAGE银染分析

棘球蚴的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染分析徐雪平，李兴江，薄新文陈志蓉，郑经鸿（新疆农垦科学院）棘球蚴病是一危害严重的人兽共患寄生虫病，在该病的免疫诊断中绵羊棘球蚴囊液是最常用的诊断抗原。但棘球蚴囊液成分复杂，在免疫诊断中有时与其它绦虫蚴发生免疫交叉反应。为此...     

绵羊多头蚴可溶性蛋白质的SDS—PAGE银染分析

应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和银染分析法对绵羊多头蚴囊液及原头节的可溶性蛋白质进行分析，结果囊液与原头节分别可见３１和４２条多肽条带，两者均存在与棘球蚴，细颈囊尾蚴相同的２０．３８ＫＤ多肽这两个组成“弧五”抗原的成份。     

影响鸡免疫应答因素分析

鸡的免疫类型分非特异性免疫和特异性免疫.特异性免疫又分为细胞免疫和体液免疫.细胞免疫是指来自于骨髓中的淋巴细胞在胸腺依赖区中被诱导分化成熟为T细胞,在受到抗原或有丝分裂源的刺激后,分化增殖转化为致敏淋巴细胞所表现出来特异性免疫.这类免疫应答不能通过血清传递,只能通过致敏淋巴细胞所传递.体液免疫是指来自于骨髓的淋巴细胞在法氏囊依赖区诱导分化为成熟的B细胞.在抗原物质的刺激下产生抗体以及血液性抗体与相应抗原接触后引起一系列抗原抗体反应的免疫应答方式[1].分析和掌握影响鸡免疫应答因素,对于制定适合现地养禽场的免疫程序和选择合理疫苗,保证该养禽场生物安全生产具有重要意义.     

山羊免疫弓形虫代谢分泌抗原后的免疫应答

将山羊随机分为6组,即E／SA纽、E／SA＋cpG组（未乳化）、E／SA＋CpG组、E／SA＋IL-2组、E／SA＋IL-2＋CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊外周全血及涂血片,IHA法检测抗体滴度的动态变化;ELISA法检测IFN-γ、TNF—a、IL-2、IL-4的表达水平;ANAE染色法检测T淋巴细胞的动态变化。结果显示,免疫后各免疫组的IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-4及T淋巴细胞水平显著高于对照组（P〈0．05）,各免疫组的抗体水平均高于对照组。结果表明,E／SA可引起IFN—γ、TNF—a、IL-2、IL-4、T淋巴细胞及抗体水平的升高,说明E／SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。     

多头绦虫抗原特性的研究：原头节及其排泄分泌抗原的免疫原性

应用多头蚴原头可溶性抗原和将原头节进行体外短期短培养后获得的排泄分泌抗原，以４ｇ／Ｌ抗原量与等体积的白油－司班佐剂乳化后，按每次２ｍＬ剂量对试验羔羊进行３次免疫。于最后一次免疫后２周，攻击感染２５００个多头绦虫虫卵，攻击后２２５ｄ剖杀各组羔羊。     

细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞代谢抗原的免疫原性和反应原性

应用培育成功的人源细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞的天然代谢抗原,接种昆明小鼠,于接种后第14天给免疫小鼠接种人源细粒棘球蚴原头节约1 000 个,于200 d 剖检观察有无包囊形成,病理切片鉴定;并用该抗原作为诊断抗原,使用间接血凝(IHA)、琼脂扩散(AGD)试验,检测临床确诊的细粒棘球蚴病人血清。以多房棘球蚴病人血清、细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清作为对照。结果表明,该抗原能使60% 的小鼠获得完全抵抗细粒棘球蚴原头节攻击的能力,未完全获得保护的小鼠形成包囊的数量、大小较对照组明显减少,且为不育囊;使用该抗原IHA 检测31 份血清,阳性24 份,阳性率77.42% ,AGD检测30 份血清,阳性13 份,阳性率43.33% ,2 种方法对多房棘球蚴病人血清和细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清不起反应。     

X射线照射后对细粒棘球绦虫原头蚴体外培养成囊率的观察

观察X线照射后细粒棘球绦虫原头蚴体外培养下成囊率的变化,初步探索X线照射对原头蚴成囊过程的影响。新鲜采集自然感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,无菌分离原头蚴体外培养,将X线照射分为0,10,20,30,40,50,60 Gy共7个剂量,于单次大剂量照射后观察各组形态变化,计算成囊率。结果显示,单次大剂量照射原头蚴后体外培养14 d,对照组光镜下可见原头蚴成囊发展,大部分原头蚴已成囊,顶突消失,囊外周已有角质层出现;而照射组出现不同程度的钩突崩解,正常结构消失。不同剂量X线照射后14 d统计原头节的成囊率各不同剂量照射组与对照组比较差别有统计学意义(P0.05)。结果表明,X放射线可抑制细粒棘球绦虫原头蚴向成囊方向发展,这将为X线对原头蚴及包囊的杀灭作用机制研究奠定一定的理论基础。     

细粒棘球蚴14-3-3重组抗原诱导小鼠体液免疫应答的研究

为研究细粒棘球绦虫原头蚴(Eg)重组蛋白14-3-3(r Eg14-3-3)诱导小鼠的免疫反应以及其对小鼠的免疫保护力,本研究将r Eg14-3-3免疫ICR小鼠,在三免后4周,采用原头蚴攻击感染,并采用ELISA法对小鼠血清中Ig G及其亚型、Ig E抗体水平和IL-21细胞因子水平进行检测。结果表明:免疫组小鼠血清Ig G、Ig G1、Ig G2a水平显著高于对照组(p0.05),Ig E水平则无显著性差异。免疫组小鼠和对照组小鼠在免疫后和攻击感染后IL-21水平迅速升高并在较长时间内维持相对较高水平;而且免疫组保护效率为84.47%。本研究表明r Eg14-3-3能够诱导小鼠产生高水平的特异性体液免疫反应,并且Tfh细胞也参与体液免疫应答,表明该重组蛋白可以作为预防Eg的候选亚单位疫苗或重组疫苗的有效免疫抗原。     

斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究

以原头节可溶性粗抗原经Sephadex G-200层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊IgG-HRP结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的Dot-ELISA，并以ELISA作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测86头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为94．18％和93．02％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测122头份绦虫蚴病阴性血清，18头份棘球蚴病阳性血清，35头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为90．29％和95．43％。两种抗原的特异性差异显著。Dot-ELISA和ELISA两种方法的符合率为100％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Dot-ELISA和ELISA对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。