几种细菌染色方法的改良建议

针对革兰染色法、抗酸染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、荚膜染色法5种传统染色方法的不同特点,结合多年的实践,对这些染色方法进行了改良,形成了一套适合不同需要的染色方法。改良后的染色方法不仅操作简便易学,而且镜检效果良好。     

山羊腐败梭菌、巴氏杆菌混合感染的微生物学诊断

通过对病死成都麻羊的肝脏、脾脏病料进行触片染色镜检可见革兰氏阴性、无芽孢的短杆菌,瑞氏染色法染色呈两极着染;涂片用美蓝染色法染色镜检,见到两端钝圆、单个或短链状的粗大菌体,疑似巴氏杆菌和腐败梭菌感染.通过细菌的分离培养、染色、镜检,初步诊断为多杀性巴氏杆菌和腐败梭菌混合感染;经动物接种试验、人工感染试验、细菌生化鉴定等微生物学诊断,确诊为腐败梭菌和多杀性巴氏杆菌混合感染.     

内生枯草芽孢杆菌JL-B16生物学特性研究

对枯草芽孢杆菌JL-B16进行平板培养,并对菌体进行革兰氏染色、芽孢染色和荚膜染色,获得枯草芽孢杆菌JL-B16的培养特征和形态特征;采用温度梯度和pH梯度法测定枯草芽孢杆菌JL-B16的最适培养条件,绘制其40 h内的生长曲线,并对其生理生化指标进行测定,结果表明,枯草芽孢杆菌JL-B16菌落为黄色,菌落边缘不平整,菌体呈杆状,革兰氏阳性,有芽孢,无荚膜;枯草芽孢杆菌JL-B16最适培养温度为25℃,最佳生长pH为7.0,适宜生长pH 6.0～8.0.对枯草芽孢杆菌JL-B16进行生物学特性及生理生化指标的测定,为后续系统研究枯草芽孢杆菌JL-B16奠定了基础.     

细菌鞭毛染色法的改良

鞭毛是细菌的运动器官,根据其生长的部位、数量可鉴别细菌的种类,是细菌的重要特征之一。细菌鞭毛的直径非常小(10～20nm)．一般光学显微镜难以观察．必须通过特殊染色才能见到,鞭毛染色往往受诸多因素影响,染色效果常不理想。有关细菌鞭毛染色法的研究,文献已有报道,但从作者多年的实验室摸索试验,仍有改进之处,现将结果报道如下。     

斑衣蜡蝉成虫肠道细菌的鉴定研究

斑衣蜡蝉是自然发生于臭椿树和苦楝树的一种重要害虫，也是一种重要的药用昆虫资源，分布于山东省、江苏省等地。本研究从自然种群的斑衣蜡蝉成虫肠道环境中分离、纯化、培养，获得细菌4个菌株，分别对其菌体形态、染色反应、培养性状、生理生化反应进行了系统研究。鉴定结果表明：4个细菌菌株均为兼性厌氧芽孢杆菌，l号菌株为多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa），2号菌株为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformls），3号菌株为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium），4号菌株为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。在斑衣蜡蝉成虫肠道环境中存在的不同细菌之间的数量具有明显差异。     

动物益生菌对大肠杆菌抑制作用的培养条件优化

对能抑制畜禽大肠杆菌的动物益生菌短短芽孢杆菌YSJ-0401的培养条件进行优化。从时间、温度、摇床转速和培养基pH值研究短短芽孢杆菌YSJ-0401的最适培养条件,以获得最佳的抑菌效果。短短芽孢杆菌YSJ-0401培养24~84 h的抑菌圈为10.00~13.00 mm,在24~39 ℃下培养的抑菌圈为9.00~14.00 mm,转速在90~210 r/min下培养的抑菌圈为13.75~15.00 mm,pH 6.0~8.0下培养的抑菌圈为10.50~14.50 mm。动物益生菌短短芽孢杆菌YSJ-0401的最适培养条件为培养基pH 7.5、30 ℃下培养48 h,摇床转速在90~210 r/min范围内均可。     

番茄灰霉病高效拮抗菌株鉴定及抗菌活性研究

采用形态特征观察、生理生化特性测定以及16S rDNA序列分析,对分离于淄博感染灰霉病的大棚番茄土壤样品中的6株拮抗细菌进行了分类鉴定和拮抗活性分析。结果显示,6株细菌形态均为直的杆状,有鞭毛能运动,能生成抗热的芽孢,芽孢椭圆形,革兰氏染色均为阳性,通过对菌株16S rDNA序列进行测定和同源性比对,发现与芽孢杆菌同源性达99%,结合生理生化特性确定B-01、B-02、B-03、B-04为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),B-06为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),B-07为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。通过滤液抑菌活性测定,B-02、B-06滤液对病原菌有很强的抑制作用,并且在稀释不同倍数时均能抑制灰霉病菌的生长。     

动物饲用益生菌LPF-2对大肠杆菌抑制作用的培养条件优化

[研究目的]对畜禽大肠杆菌具有抑制作用的动物饲用益生菌短短芽孢杆菌LPF-2的培养条件进行优化.[方法]以抑菌圈为指标,从时间、温度、摇床转速和培养基pH值研究短短芽孢杆菌LPF-2的最适培养条件,以获得短短芽孢杆菌LPF-2最佳的抑菌效果.[结果]短短芽孢杆菌LPF-2培养24～84h的抑菌圈为10.00～13.00 mm,在24～39℃下培养的抑菌圈为9.00～14.00 mm,转速在90～210 r/min下培养的抑菌圈为13.75～15.00 mm,pH 6.0～8.0下培养的抑菌圈为10.50～14.50 mm.[结论]动物益生菌短短芽孢杆菌LPF-2的最适培养条件为培养基pH 7.5、培养温度30℃、培养时间48 h,摇床转速在90～210 r/min范围内均可.     

药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究

以药用植物金银花为材料,对其根部、茎部、叶片不同部位的内生细菌进行分离纯化,对细胞特征采用革兰氏染色、芽孢染色法进行研究,结合菌落特征和生理生化特性将其内生细菌初步分为第1类型和第2类型两大类.采用稀释涂布法对金银花不同部位分别进行可培养内生细菌计数.结果表明,内生菌的总体数量分布为根部＞叶片＞茎部,说明内生细菌在金银花组织中的分布因部位不同而不同.基于细胞染色特征、显微观察结果和培养特性,内生菌中第1类型符合芽孢杆菌属(Bacillus)的特点,第2类型具有类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的特征.     

解淀粉芽孢杆菌JL-B05生物学特性及生理生化指标测定

[目的]研究解淀粉芽孢杆菌JL-B05的生物学特性及生理生化指标。[方法]对解淀粉芽孢杆菌JL-B05进行平板培养,并对菌体进行革兰氏染色、芽孢染色和荚膜染色,获得解淀粉芽孢杆菌JL-B05的培养特征和形态特征;采用温度梯度和pH梯度法测定解淀粉芽孢杆菌JL-B05的最适培养条件,绘制其40 h内的生长曲线,并对其生理生化指标进行测定。[结果]解淀粉芽孢杆菌JL-B05菌落颜色为白色,菌落边缘不平整,菌体呈杆状,革兰氏阳性,有芽孢,无荚膜;解淀粉芽孢杆菌JL-B05最适培养温度为25℃,最佳生长pH为7。[结论]对解淀粉芽孢杆菌JL-B05进行生物学特性及生理生化指标的测定,为后续系统研究解淀粉芽孢杆菌JL-B05及生产复合微生物菌剂奠定基础。     

生姜提取物对常见食品污染菌的抑菌作用研究

为研究生姜提取物对常见食品污染菌的抑菌作用,采用滤纸片法测定了生姜提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌的抑菌活性,探讨了不同温度和不同pH生姜提取物对3种细菌抑菌活性的影响。结果表明:生姜提取物对3种供试细菌有明显抑制作用。对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑制浓度为0.125%、对大肠杆菌的最小抑制浓度为0.250%。且生姜提取物的热稳定性较好,对供试细菌最佳抑菌pH范围为6.0~9.0。     

3株嗜(耐)盐菌株不同组合对盐碱土壤不同粒径团聚体含量的影响

为揭示微生物改良盐碱地的机制,通过培养皿和盆钵试验,利用湿筛和干筛法分析测定3株嗜(耐)盐菌对盐碱土壤不同粒径团聚体含量的影响。结果表明,培养皿试验培养45 d后,测定不同粒径土壤团聚体含量,盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提高粒径≥2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05);培养90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提高粒径≥2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05);培养45 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提高粒径0.25～2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05);培养90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理显著降低了粒径0.25～2.00 mm的土壤团聚体含量(P0.05);培养90 d后,除达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理外,其他处理对于降低粒径0.25 mm的土壤团聚体含量效果均不显著(P0.05)。盆钵试验干筛法测定不同粒径土壤团聚体含量,培养45、90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提高粒径≥2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05);培养45 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提高粒径0.25～2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05);培养90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理降低了粒径0.25～2.00 mm的土壤团聚体含量,但差异不显著(P0.05);培养45、90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理均降低了粒径0.25 mm的土壤团聚体含量,且差异显著(P0.05)。盆钵试验湿筛法测定土壤团聚体含量,培养45 d后,各处理对于提升粒径≥2.00 mm和0.25～2.00 mm土壤团聚体含量以及降低粒径0.25 mm的土壤团聚体含量效果均不显著(P0.05);培养90 d后,达板喜盐芽孢杆菌+盐单胞细菌+枯草芽孢杆菌处理对于提升粒径0.25～2.00 mm的土壤团聚体含量效果显著(P0.05)。由此得出,嗜(耐)盐菌对于不同粒径土壤团聚体的形成具有不同的作用,总体上对于土壤大团聚体的形成促进效果较好,复合菌处理对盐碱地土壤团聚体形成的促进效果整体上优于单株菌。     

生物有机肥中微生物的分离鉴定及液体菌剂的构建

【目的】了解生物有机肥中微生物的种类及各种微生物之间的关系,并借此构建一种高效便捷的 液体菌剂。【方法】采用平板划线法从肥料中分离出菌种,并通过菌落观察、革兰氏染色法及 16SrDNA 基因同 源序列比对方法对其中的微生物进行鉴定,同时运用菌饼法和平板涂布法对各菌种之间的拮抗作用及培养条件 进行研究。【结果】分离得到 4 种菌落,分别为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）,这 4 种菌之间均无拮 抗作用。地衣芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌：巨大芽孢杆菌：植物乳杆菌按 1∶1∶1∶1 添加到不同 pH 的牛肉膏蛋 白胨培养基液体培养基中进行培养,并用稀释涂布平板法测定有效活菌数,最终得到最适 pH 为 7.0。【结论】 从生物有机肥中分离得到 4 种菌种,它们之间均无拮抗作用,采用等比例的菌种配比,在 pH 为 7.0 的牛肉膏蛋 白胨液体培养基进行培养,各菌种都能很好地生长,从而得到一种高效的液体菌剂。     

适合鞭毛染色的新菌株

从酵母培养物中分离出一株运动性极强的细菌,命名为９５０６菌株、该菌株革兰氏染色为阴性,鞭毛周生,每个菌体着生１２－２０根鞭毛,鞭毛 大,地着色,在ＰＤＡ斜布上培养１２－４８ｈ能乍到完整的鞭毛,染色液存放２周不影响鞭染色效果,其效果明显优于大肠杆菌、枯草杆菌等菌株,是一株理想的鞭毛洒色实验教学用菌株     

灰葡萄孢拮抗细菌的种类鉴定及生长条件研究

经形态和生理生化鉴定,对灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）拮抗能力强、防病效果好的3株细菌进行分类,W10为地衣芽孢杆菌[Bacillus licheniformis(Weigmann)Chester],W3和Y2－11－1为多粘类芽孢杆菌[Paenibacillus polymyxa(Prazmowski)Ash et al]。这2种对蔬菜灰霉病的高效拮抗菌为中国首次报道和应用。3株拮抗细菌的生长条件基本一致,最适培养时间为24－72h,最适生长温度是27－30℃,最适培养液pH值为7－8。     

产纤维素酶芽孢杆菌筛选及发酵条件的初步研究

通过刚果红染色法和DNS分光光度法对10种芽孢杆菌分泌胞外纤维素酶进行筛选,得到1株芽孢杆菌(菌株编号为Pab02)酶活达170.948U/mL。并进一步对其发酵培养基的初始pH值、发酵温度及时间进行优化,结果显示该菌株在pH值为8.0、温度37℃、时间48h条件下酶活达到358.751U/mL酶液,比优化前提高了2.1倍。     

秸秆生物炭对土壤功能微生物生长及吸附的影响

生物炭具有多孔结构和较大的比表面积能够为许多土壤微生物的生长、繁殖提供有利的条件。生物炭通过促进土壤功能微生物的生长及活性,从而间接提高作物产量,在农业领域有着广阔的应用前景。为了研究秸秆生物炭对12种不同土壤功能微生物的影响,在培养基中添加0.6%的生物炭后,利用MTT法测定微生物生长曲线的变化,同时在一定浓度的菌悬液中加入0.6%的生物炭,室温振荡1h后,测定生物炭对微生物的吸附率。结果表明,秸秆生物炭对不同的细菌的生长影响不同,对于部分细菌存在明显生长促进作用,其中对胶质芽孢杆菌1.217的促进作用最明显,培养12h后其最大生长量可提高3.6倍;对于巨大芽孢杆菌1.217、短小芽孢杆菌04306以及褐球固氮菌01077,加入生物炭培养14~20h后最大生长量可提高1.5倍左右;巨大芽胞杆菌01667加入生物炭培养12h后,其最大生长量也可提高1.3倍;而对于另外一部分细菌,生物炭对其生长基本没有影响或有较小的抑制作用。同时,生物炭水洗后,对不同细菌的影响与水洗前基本一致,对于巨大芽孢杆菌1.217、短小芽孢杆菌04306、绿色北里孢菌02567、苏云金芽孢杆菌04311、蜡状芽孢杆菌04289、巨大芽孢杆菌01667和短小芽孢杆菌01736,生物炭水洗前后对其生长影响差别不大。另外,秸秆生物炭对部分微生物具有一定的吸附作用,其中吸附效果最为明显的是蜡状芽胞杆菌4289和胶质芽胞杆菌1.153,吸附率分别为54.40%和48.10%。这些研究结果证明生物炭能够改变土壤功能微生物的生长状况,但是对于不同的微生物,生物炭的作用效果不同。     

土壤芽孢杆菌的筛选与抑菌能力研究

为筛选具有抑菌能力的益生菌,对河北科技师范学院昌黎校区的10处土壤样本进行分离和筛选,通过热击培养、平板划线分离得到7株细菌,结合革兰氏与芽孢染色,在显微镜下观察初步鉴定为芽孢杆菌.从7株芽孢杆菌中选取4株形态各异的菌株进行抗菌活性试验,通过琼脂扩散法证明它们能够产生抗菌肽物质,从而抑制大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的生长.     

1株耐硒凝结芽孢杆菌的分离鉴定 及其培养条件的优化

用含硒培养基,采用平板稀释分离法,从湖北恩施渔塘坝高硒环境中分离鉴定1株凝结芽孢杆菌。为确定该凝结芽孢杆菌培养基及培养条件,采用单因素和正交试验法对凝结芽孢杆菌的摇瓶发酵培养条件(碳源、氮源、温度和转速)进行了优化,为确定其培养时间作出了生长曲线。结果表明,温度对凝结芽孢杆菌生长的影响最大,其后依次为氮源、碳源和转速;最适培养基为:葡萄糖11 g/L,牛肉浸膏11 g/L,氯化钠5 g/L;最适培养条件为:温度35℃,转速160 r/min;(2)从生长曲线可看出,0～1.5 h为停滞期,1.5～10 h为对数生长期,10～20 h为稳定期,最佳培养时间为10 h。     

产纤维素酶芽孢杆菌筛选及发酵条件的初步研究

通过刚果红染色法和DNS分光光度法对10种芽孢杆菌分泌胞外纤维素酶进行筛选,得到1株芽孢杆菌(菌株编号为Pab02)酶活达170.948U/mL.并进一步对其发酵培养基的初始pH值、发酵温度及时间进行优化,结果显示该菌株在pH值为8.0、温度37℃、时间48h条件下酶活达到358.751U/mL酶液,比优化前提高了2.1倍.