HPLC—MS／MS法测定水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素M1的残留量

建立了水产品中硫酸粘菌素（CS）、杆菌肽（BTC）及维吉尼霉素M1（VBGMM1）3种多肽类抗生素残留量检测的HPLC-MS/MS法.样品经水溶液[V（甲醇）∶V（0.1％甲酸水溶液）=2∶5]提取,4％三氯乙酸乙腈除蛋白,乙腈饱和正己烷除脂,过OASIS HLB（60 mg）小柱净化后,利用HPLC-MS/MS法,以选择反应监测模式检测,外标法进行定量分析.CS和BTC在0.01～10.00 mg·L^-1质量浓度范围内线性良好,VGMM1在0.002～2.000 mg·L^-1质量浓度范围内线性良好,R2均大于0.995;3种多肽类抗生素的检出限分别为CS 10 μg· kg^-1、BTC 10 μg·kg^-1、VGMM1 2μg·kg^-1,定量限分别为20 μg ·kg^-1、20 μg ·kg-和4 μg·kg-;选择3个不同浓度水平做加标回收,平均回收率在72.3％ ～ 103.9％,相对标准偏差为1.10％～10.92％.该方法具有操作简便、准确性高、灵敏度高和重现性好等优点,可为检测水产品中这3种药物的残留提供相关技术支持.     

HPLC-MS/MS法测定水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素M1的残留量

建立了水产品中硫酸粘菌素(CS)、杆菌肽(BTC)及维吉尼霉素M1(VBGMM1)3种多肽类抗生素残留量检测的HPLC-MS/MS法。样品经水溶液[V(甲醇)∶V(0.1%甲酸水溶液)=2∶5]提取,4%三氯乙酸乙腈除蛋白,乙腈饱和正己烷除脂,过OASIS HLB(60 mg)小柱净化后,利用HPLC-MS/MS法,以选择反应监测模式检测,外标法进行定量分析。CS和BTC在0.01～10.00 mg.L-1质量浓度范围内线性良好,VGMM1在0.002～2.000 mg.L-1质量浓度范围内线性良好,R2均大于0.995;3种多肽类抗生素的检出限分别为CS 10μg.kg-1、BTC 10μg.kg-1、VGMM12μg.kg-1,定量限分别为20μg.kg-1、20μg.kg-1和4μg.kg-1;选择3个不同浓度水平做加标回收,平均回收率在72.3%～103.9%,相对标准偏差为1.10%～10.92%。该方法具有操作简便、准确性高、灵敏度高和重现性好等优点,可为检测水产品中这3种药物的残留提供相关技术支持。     

生菌素、维吉尼霉素对哺乳仔猪生长和血清代谢物的影响

将90头平均体重4.98kg哺乳仔猪(杜×大×长)分成2组,日粮中分别添加维吉尼霉素(对照组)和生菌素(普乐宝)。结果表明,与对照组相比,试验组日增重、饲料转化率和血清球蛋白水平提高(P>0.05或P<0.05);仔猪腹泻率、血清尿素氮、血糖和胆固醇含量下降(P<0.05);仔猪每千克增重收益增加2.85%。     

微生物法检测水产品中粘杆菌素的残留

以支气管炎鲍特氏菌（Bordetella bronchiseptica）为检测菌种,样品经甲醇-0.1%甲酸水（体积比3∶7）超声提取,固相萃取柱净化,氮吹浓缩,用杯碟法测定水产品[草鱼（Ctenopharyngodon idellus）、斑节对虾（Penaeus monodon）、中华鳖（Pelodiscus sinensis）、日本鳗鲡（Anguilla japonica）和蟹（Brachyura）]肌肉中粘杆菌素的残留。结果显示,粘杆菌素在各水产品肌肉组织中0.4².4μg·m L^-1范围内药物浓度对数与抑菌圈直径的线性关系良好,相关系数R2>0.990 0;在0.20μg·g^-1、0.40μg·g^-1和0.60μg·g^-1的添加水平下,粘杆菌素的平均回收率为70.59%⁹3.39%,变异系数为3.22%¹4.01%。测定低限草鱼和对虾肌肉为100μg·kg^-1,鳖和鳗鲡肌肉为75μg·kg^-1,蟹肌肉为125μg·kg^-1。研究结果表明,运用微生物法检测水产品中粘杆菌素的残留是可行的,方法最低检测限达到农业部颁布的残留限量标准。 

     

HPLC-MS/MS法测定海水中杆菌肽的残留量

建立了海水中杆菌肽残留检测的液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS).在对水中杆菌肽提取、净化条件进行分析的基础上,探讨了不同固相萃取小柱对提取效果的影响,并对固相萃取步骤进行了一系列优化,建立了最佳分析方法.方法的线性范围为5～5 000 ng/mL,检出限为5 ng/mL,定量限为10ng/mL.取不同地方的海水,对方法进行验证,杆菌肽的平均回收率为79.1％ ～ 99.0％,相对标准偏差为3.56％～6.69％.     

水蛭素的分离纯化与检测方法研究进展

天然水蛭素是从水蛭的唾液腺中分离出来的一种多肽,分子量7000道尔顿,由64-66个氨基酸组成[1]。水蛭素N端由二硫键形成的紧密结构能与凝血酶活性位点结合,其C端富含酸性氨基酸残基,则与凝血酶的纤维蛋白原结合位点结合,从而对凝血酶有高度特异的抑制作用,起到抑制凝血酶的抗凝血作用。在临床上多用于治疗不稳定性心绞痛(USA),急性心肌梗死(AM),血管成形术,术后血栓形成,血液透析,体外循环,肾移植(CRRT),弥散性血管内凝血(DIC)等病症[2,3]。由于天然水蛭素产量有限,不能满足临床应用的需求,因此1986年开始对重组水蛭素进行了大量的…     

副猪嗜血杆菌的分离及实验室检测方法

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)引起猪的多发性浆膜炎与关节炎,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。近年来该病的发生,给养殖业造成巨大的经济损失。文章介绍了副猪嗜血杆菌的临床症状、解剖变化、细菌分离并综述相关的实验室检测方法。为防治该病提供参考。     

用nested—PCR方法快速检测鲑鱼肾杆菌

描述了用嵌套式聚合酶链式反应(nested PCR)快速检测鲑鱼细菌性肾病病原鲑鱼肾杆菌的方法。以BKDR和BKDF为引物,扩增鲑肾杆菌编码57kDa主要可溶性蛋白基因中501bp的DNA片段,再用引物BKDR2和BKDF2扩增其中长度为314bp的DNA片段。用其它15种常见鱼类致病菌验证这两组引物的特异性,结果没有非特异性的DNA片段被扩增出来。用酚抽提法和煮沸加冻融的方法获得的细菌裂解产物,PCR检测的灵敏度均可达到1.8×103CFU·mL-1,用Nested PCR进一步扩增PCR扩增的产物,检测灵敏度可再提高100倍。检测鲑鱼肾杆菌菌悬液与鲟卵的混合物,结果表明,该方法能准确、可靠、快速地检测鲑肾杆菌。     

水产品中血管紧张素转换酶抑制肽的研究进展

综述了国内外水产品中血管紧张素转换酶抑制剂的研究进展,总结了血管紧张素转换酶抑制剂的作用机理、制备工艺,对 ACEIP 的构效关系作了探讨,对水生生物资源中 ACEIP 的开发具有一定的指导意义。     

柱状黄杆菌间接ELISA快速检测方法的研究

应用间接酶联免疫吸附试验(Indirect-ELISA)技术,建立了快速检测柱状黄杆菌的方法。结果显示:根据棋盘试验,确定最佳抗原包被浓度和免疫血清最佳工作浓度分别为1×106cfu/mL和1∶5000,酶标抗体最佳工作浓度为1∶10000。在该条件下,所建立的间接ELISA能检测出5×104cfu/mL的柱状黄杆菌,且与爱德华氏菌、哈维氏菌弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌等常见鱼类致病菌无交叉反应。结果表明,所建立的间接ELISA可不经细菌培养而直接检测人工感染后草鱼鳃组织中的柱状黄杆菌,该方法对柱状黄杆菌的检测具有快速、敏感、特异、实用的优点。     

三聚氰胺的毒性残留及检测方法研究进展

三聚氰胺是一种化工原料,但由于其含氮（N）量高,常被不法商人添加到食品及饲料中,对人类及动物健康造成了严重危害。三聚氰胺的急性毒性很低,口服的半数致死量（LD50）为3100～3300mg·kg^-1;慢性毒性试验动物症状主要表现为肾结石及膀胱癌。三聚氰胺在生物体内无代谢转化,以原体形式或同系物形式排出体外。文章对三聚氰胺的毒性、残留代谢及检测方法进行了综述。     

基于不同检测方法的养殖鱼类昼夜摄食节律研究进展

摄食节律是鱼类在长期演化过程中对光照、温度、饵料等周期性变动的环境条件主动适应的结果,掌握鱼类摄食节律直接关系到对养殖对象投喂时间、投喂方式、投喂频率等投喂策略的决定,继而影响饲料效率和养殖水体的污染负荷。综述了国内外养殖鱼类昼夜摄食节律检测方法的研究进展,总结分析了胃肠充塞度法、日摄食率法、自适应投喂法以及观察法这4种摄食节律研究方法的具体实施过程,比较了各自的优缺点,指出目前养殖鱼类摄食节律研究方法的局限性,并对未来养殖鱼类摄食节律的研究和应用进行了展望,旨在为已有摄食节律检测方法的优化改进以及新检测方法的提出提供参考。     

甲壳类年龄鉴定方法研究进展

甲壳类特有的蜕壳现象,使其能够记录年龄信息的外骨骼周期性消失,因此甲壳类的年龄鉴定一直未得到较好的解决。年龄鉴定是评估甲壳类渔业资源的基础,鉴定甲壳类年龄的方法主要有饲养法、标记重捕法、体长频度法、脂褐素分析法、放射性同位素分析法和硬组织生长纹分析法。饲养法、标记重捕法和放射性同位素分析法较准确,然而由饲养法得到的数据不适用于实际野生环境,放射性同位素分析法花费较高,因此,这两种方法都存在较大的局限性。应用最广泛的标记重捕法和体长频度法也存在不足之处。相对于体长频度鉴龄技术而言,脂褐素分析法优势明显,但是对劳动强度和技术要求高。硬组织生长纹分析法是最近几年出现的鉴龄技术,也存在人为主观性较强等不足。本文对甲壳类年龄鉴定的方法进行了总结回顾,将不同鉴定方法进行比较,分析优缺点,以期为开展甲壳类资源评估与管理提供基础。     

奶牛结核病的PCR检测方法的建立及应用

根据PCR技术的原理建立了奶牛结核病的PCR诊断方法,并测定出该方法的敏感性为30.9pg/ūL。特异性试验结果表明,除牛结核分枝杆菌的特异扩增带(242bp)外,其他的细菌均未出现特异性扩增带。用该方法对陕西省某奶牛养殖小区的121份乳样中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示,在121份乳样中有3份为阳性,阳性检出率2.48%。本试验还用PCR方法对PPD检测和胶体金检测法进行验证,结果表明PCR方法敏感性强,特异性高,是一种提高牛结核病临床诊断的好方法。     

液相色谱质谱联用法测定水产品中泰乐菌素残留方法的研究

为了建立鱼、虾中泰乐菌素残留量的液相色谱串联质谱检测方法,文章通过对液相色谱和质谱条件、预处理、分离、纯化方法的探讨,确定了以罗红霉素为内标,先用乙腈提取,中性氧化铝柱净化,加异丙醇旋转蒸发至于,定容,过膜,上机测试。所建立的分析方法,泰乐菌素在1．0～500ng·mL。质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数均大于0．998,检出限为0．5μg·kg-1,定量限为1．0μg·kg-1。经过验证,在鲫（CarassiusauFatus）、对虾（Penacusorientalis）和草鱼（Ctenopharyngodonidellus）3种样品中的加标试验,3个不同质量浓度水平的加标回收率为82．40％-100．70％,相对标准偏差为0．86％～5．82％,符合对水产品中药物残留检测的技术要求。     

3种DNA提取方法对WSSV检测结果的影响

比较了酚-氯仿法、煮沸法、试剂盒法3种基因组DNA提取方法对WSSV DNA提取效率、纯度及病毒检测结果的影响.结果表明,3种方法的DNA提取效率平均值分别为101.5、372.6、21.5 ng/μl;OD260/OD280范围分别是1.979～2.175(平均值为2.070)、1.699～1.932(平均值为1.796)、1.784～2.075(平均值为1.951);OIE巢式PCR阳性率分别为60%、50%、70%;TaqMan定量PCR检测的病毒阳性率均为100%,病毒拷贝含量分别为916.0～2.23×106、63.3～1.78×106、479.7～2.70×106Copies/μl DNA.     

水产品中大环内酯类抗生素药物残留分析方法综述

当前对大环内酯类药残的监控日益受到重视,本文主要介绍国内外检测不同基质中大环内酯类抗生素药物残留采用的各种提取和净化方法;分析比较了薄层色谱法、紫外分光光度法、微生物效价法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、免疫测定法等几种检测方法的优劣;认为采用HPLC和HPLC-MS法用于检测多种大环内酯类药物残留,能够很好地满足标准限量的要求。     

鲤浮肿病检测方法实验室间比对的结果与评价

鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)是在锦鲤中发现的一种传染性病毒病,近年来在全球传播迅速,对鲤养殖业造成严重损害。本研究设计CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物,进行特异性实验;选取套式PCR、荧光PCR和LAMP三种检测方法,组织10家实验室进行室间比对测试:制备含CEV病毒核酸的测试样品,评价其均匀性和稳定性,通过测试结果分析方法检出限。结果显示,套式PCR的核酸样品检测限可达6.8×10^-10 g。