原生质体紫外诱变选育普鲁兰酶高产菌株

[目的]对酸性普鲁兰酶产生菌的原生质体制备条件及诱变育种进行研究。[方法]对盐球菌（Halococcus sp.）Z1的原生质体制备和再生条件进行了研究,并对其原生质体进行紫外诱变选育普鲁兰酶高产菌株。[结果]菌体经培养14 h后,在36℃、2.8 mg/ml溶菌酶作用下酶解1.5 h,其原生质体形成率和再生率分别为87.4%和19.4%。采用紫外线对原生质体进行诱变,筛选得到9株普鲁兰酶活性比出发菌株高的突变株,其中D9-08的酶活达6.37 U/ml,比诱变前提高了0.96倍,经10次传代遗传性稳定。[结论]利用原生质体紫外线诱变手段进行酸性普鲁兰酶产生菌的育种是一条可行并具有较好效果的途径。     

红色素产生菌RZ21菌株的原生质体紫外诱变育种研究

[目的]对红色素生产菌RZ21菌株的原生质体进行紫外诱变育种,以提高其红色素的产量。[方法]以粘质沙雷氏菌为供试菌种,研究其原生质的制备、再生的条件和该菌的原生质紫外诱变对红色素产量的影响。[结果]RZ21菌株以溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L（终浓度）的EDTA作用20 min,原生质体形成率达81.9%,再生率达31.5%。该菌原生质体经紫外诱变原生质体处理及抗性平板、摇瓶两步筛选后,得到1株高产株RZ21-3,灵菌红素产量达到了0.813 g/L,比原始菌株提高了24.9%。[结论]溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L（终浓度）的EDTA作用20 min为该菌原生体制备的最佳工作条件。     

灵芝三萜高产菌株原生质体紫外诱变选育

对灵芝（Ganoderma lucidum）HG菌株进行原生质体紫外诱变处理,经过初筛和复筛,获得了生长速度、菌丝干重和三萜含量明显高于出发菌株的9株诱变株;通过10次PDA斜面继代培养、液体培养以及栽培试验筛选,获得了菌丝干重和三萜含量稳定提高的诱变株UV-3,该菌株在栽培袋中的菌丝生长速率及子实体中三萜含量分别比出发菌株高58．6％和29．4％。SRAP-PCR结果表明,诱变株UV-3与出发菌株相比,DNA指纹图谱发生了明显改变。     

产纤维素酶芽孢杆菌10768原生质体紫外诱变探讨

以生产菌株10768为出发菌株,对其进行原生质体的紫外诱变,通过刚果红透明圈初筛和液体产酶能力测定,得到1株纤维素酶高产菌株UV22,其纤维素酶活力为748.0 U·mL-1,较原始菌株提高了50.9%。试验结果表明,原生质体诱变可以有效提高芽孢杆菌10768生产纤维素酶的能力。     

草菇原生质体诱变菌株Vp53的选育

对草菇原生质体诱变选育的菌株Vp53与亲株V4菌株进行了同工酶、菌丝生长速度、营养成分、产量和形态特征等方面的分析比较,结果表明,都存在差异。Vp53菌株的产量较V4菌株高29.1%,表明Vp53菌株是一个优良的变异菌株。     

富铬酿酒酵母的单倍体原生质体复合诱变选育

对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)单倍体菌株SY8的原生质体进行紫外线(UV)和微波(MW)复合诱变,获得1株高抗性突变菌株SY8-4-29,其Cr3+抗性水平为20 mmol/L,是出发菌株(5 mmol/L)的4倍,其铬含量为6.211 mg/kg,约是出发菌株(1.265 mg/kg)的5倍,拮抗紫外线6、0Co辐射和清除羟基自由基的能力显著增强。50世代培养结果表明,其遗传稳定性在95%以上。     

NTG和UV复合诱变米曲霉原生质体选育米蛋白分解菌的研究

以米曲霉（Ａ．ｏ－２）原生质体为对象，采用ＮＴＧ和ＵＶ作为诱变剂进行单因子和多因子复合诱变处理，在以米渣为主要原料的固体培养基上培养，选育出中性蛋白酶活力较高、生长快、易于培养的变异株Ｎ－４。在原料配比为米渣：麦麸＝２：１、培养时间为４８ｈ、培养温度为３０℃的培养条件下，变异株Ｎ－４的中性蛋白酶活力最高，比出发菌株Ａ．ｏ－２提高３２．６％。     

南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育研究

南昌霉素A(Nanchangmycin A)产生菌——南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)的原生质体经不同浓度NTG处理以后,分别采用抗药性诱变筛选和随机筛选选育高产菌株,通过连续3批次摇瓶发酵筛选出高产菌株400-N-4s,其产南昌霉素A的能力比出发菌株116-3r-68提高了20％以上。同时,经过对两种筛选结果进行统计学分析,结果表明,采用抗药性致死标记技术,可以有效的提高抗生素高产菌株的选育效率,得到较好的结果。     

蛋白酶高产菌株的紫外诱变选育

［目的］提高地衣芽孢杆菌B7的产蛋白酶能力。［方法］采用福林酚法测定酶活力,通过诱变育种试验和遗传稳定性试验选育出遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株。［结果］紫外线照射时间为2 min,菌落的总致死率为62.47%。371株菌株的HC值变化小于5%,53株菌株的HC值正变大于5%,76株菌株的HC值负变大于5%。正变大于10%的12株菌株的HC值是出发菌株的1.18-1.34倍。所有变异株的蛋白酶活力均显著高于出发菌株,其中菌株B720和B749的蛋白酶活力达50 U/ml,比出发菌株提高了40%以上。经过复筛得到菌株B7 49,诱变前后其最高酶活分别为33.97和50.29 U/ml。遗传稳定性试验中菌株B749的蛋白酶活力变化小于10%。［结论］该试验成功选育出的遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株B749可用于发酵法制备大豆肽。     

原生质体诱变技术在冬虫夏草优良菌株选育中的应用

从冬虫夏草中分离出的真菌菌种,在实验室和工业生产中多次传代培养后容易变异、退化,其遗传稳定性会发生变化.总结分析了原生质体诱变技术在冬虫夏草菌中的应用,以期为冬虫夏草优良菌株的选育提供一定的参考.     

1株产紫杉醇内生真菌的原生质体制备与再生

对1株产紫杉醇的内生真菌的原生质体的制备与再生进行了研究.结果表明,原生质体制备的最佳条件是1.33%纤维素酶+2.66%蜗牛酶的酶解液,酶解时间6 h,稳渗剂为0.7 mol/L NaCl,酶解温度30℃,酶解pH值6.0,原生质体产量524万个/mL,原生质体细胞再生频率为21.47%.     

灵芝原生质体电融合选育高产多糖菌株的研究

采用灵芝原生质体电融合技术选育高产多糖菌株,通过电融合方法对紫芝(Ganoderma sinese )和赤芝(Ganoderma lucidnm)原生质体电融合条件进行了研究,表明灵芝原生质体电融合的最佳条件为:脉冲强度10 kV,脉冲间隙24 μs,脉冲次数3次/s,最高融合率为0.038%.10 L罐发酵结果,选育的融合菌株GL-18的生物量和多糖含量分别为17.52 g/L和1.88 g/L,均高于亲本菌株.     

原生质体融合选育耐高温耐盐红螺菌的研究

为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37℃,作用时间3 h,聚乙二醇(PEG)浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50℃良好生长的融合子(a、b、c)。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,但耐受盐度、降解养殖水体氨氮与亚硝基氮功能均与耐盐红螺菌亲株相近。其中融合子a菌株具有生长更快、性能更稳定的特点,其细胞形态特征、革兰氏染色属性、色素吸收峰等均与耐盐红螺菌相似。     

香菇单核原生质体杂交菌株JW系列的选育研究

以香菇菌株精选和武香作为亲本制备单核原生质体,将两个亲本的单核原生质体进行一一杂交。对杂交菌株与亲本菌丝长势和长速、产量、子实体形态、氨基酸含量等农艺性状比较,获得了农艺性状较优良的菌株JW1和JW3。     

原生质体融合选育耐高温耐盐红螺菌的研究

为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70 ℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37 ℃,作用时间3 h,聚乙二醇（PEG）浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50 ℃良好生长的融合子（a、b、c）。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,但耐受盐度、降解养殖水体氨氮与亚硝基氮功能均与耐盐红螺菌亲株相近。其中融合子a菌株具有生长更快、性能更稳定的特点,其细胞形态特征、革兰氏染色属性、色素吸收峰等均与耐盐红螺菌相似。     

用原生质体融合技术选育谷氨酸高产菌株

用适当方法制得枯草杆菌BR151(Trp~-,Lys~-,Met~-)和黄色短杆菌ZAU89101(Bio~-)的原生质体,在DNase存在条件下,用40％聚乙二醇(PEG)做助融剂,进行两菌株的原生质体融合。融合率为2.69×10~(-5)～3.6×10~(-6)。随机挑选10株融合子进行生化及谷氨酸发酵实验,证实了融合子的杂种性质。融合子的细胞、菌落形态和大小、形成芽孢能力及谷氨酸发酵能力等性状均较亲本有不同程度的变异。通过摇瓶发酵实验获得一株谷氨酸产率为7.29％以上的融合子。经长时间培养,此菌株仍保持了稳定性,因而具有应用前景。     

原生质体融合亲本菌株抗药性标记的筛选

以具有降解秸秆功能的康宁木霉和白腐真菌为研究对象,在两种菌株原生质融合前进行抗药性标记筛选,为两种菌株原生质体融合后融合子的筛选和分离提供依据。试验采用10种药物,对两种亲本菌株进行抗药性初筛,然后对临界药剂用量筛选,通过对比和重复试验、镜检和酶活测定,获得两种具有白腐真菌抗药性而康宁木霉非抗药性的药品,即氟康唑和十一烯酸真菌清,筛选剂量分别为400μg/mg和500μg/mg。     

原生质体融合技术在食用菌育种上的应用研究进展

本文报道食用菌原生质体融合技术在育种上的特点,国内研究动态、进展及发展趋势,分析了原生质体融合菌株难以形成子实体的问题.四川省农科院攻克了融合菌株难以形成子实体的世界性难题,选育出科间融合新品种"金凤2-1"在生产上应用,并产生显著社会经济效益,处于世界先进研究水平.原生质体融合育种研究理论上将向融合子菌株形成子实体的遗传机制、基因调控机理纵深方向探讨;技术上将广泛应用现代分子生物学技术鉴别融合子;育种将向目间、纲间等远缘融合方向迈进.     

水稻单性生殖育种研究

通过植物激素对水稻杂交组合进行单性生殖诱导育种试验，结果表明，利用植物激素能有效地诱导出杂交水稻第一代（F1）单性生殖种子；诱导时间宜在早造杀雄后3－4天，采用6－BA（50mg/L)或NAA（25mg/L) 2,4-D(25mg/L)作诱导剂可提高诱导效果，增加结实率。经诱导育成的杂交水稻汕优桂34新品系，比原组合（汕优桂34）产量高，后期熟色好，抗病性和米质较好。