皱纹盘鲍与盘鲍杂交效果分析

从杂种优势的角度对皱纹盘鲍♀与盘鲍♂杂交子一代的经济性状进行分析。结果表明,4月龄杂交鲍子一代(F1)活体重比皱纹盘鲍增加36.87%,软体部干重增加33.21%,总干重增加29.20%,其它性状也显著优于皱纹盘鲍。杂交鲍F1的壳长、壳宽、活体重、软体部干重和总干重等主要性状的变异系数为12.94%~44.51%,其中软体部干重的变异系数最大,壳长的变异系数最小;且杂交鲍各性状的变异系数均大于皱纹盘鲍。杂交鲍子一代的变异有助于定向选择,提高杂交育种的效果。     

Molecular identification of interspecific hybrids between Haliotis discus hannai Ino and Haliotis gigantea Gmelin using amplified fragment‐length polymorphism and microsatellite markers

Interspecific hybrids between Haliotis discus hannai Ino and Haliotis gigantea Gmelin were produced in this study. The hybridity of the interspecific hybrids was confirmed by using the methods of amplified fragment‐length polymorphism (AFLP) and microsatellite [simple sequence repeats (SSR)] markers. Five AFLP primer combinations were used to develop the AFLP profiles of H. discus hannai, H. gigantea and their reciprocal hybrids. AFLP analysis revealed that genetic variations of H. discus hannai and H. gigantea were relatively diverse and each species holds species‐specific bands. The AFLP profiles of reciprocal hybrids showed that all of the hybrids inherited bands specific to H. discus hannai and H. gigantea. Of a total of 20 microsatellite loci, which were selected from H. discus hannai microsatellite markers evaluated, eight loci were polymorphic in H. gigantea samples, with an average of 3.375 alleles per locus. Preliminary screening showed that, two of these eight microsatellite loci (Awb002 and Awb022) could be used as species‐specific markers to distinguish the hybrids and their parental species. Simple sequence repeats analysis showed that the reciprocal hybrids inherited one allele from each parent for both of the two SSR loci investigated. These data strongly suggest that the induced interspecific hybrid is a true hybrid between H. discus hannai and H. gigantea.     

日本盘鲍与皱纹盘鲍杂交育种技术研究

１９９８年于山东省蓬莱市用１０只日本盘鲍与３００只皱纹盘鲍,在２２０ｍ＾２的育苗水体中培育出平均壳长１４．７ｍｍ的杂交鲍苗１４３．８万只,６５００只／ｍ＾２,;在５８０ｍ＾２的育苗水体中培育出平均壳长１１．９ｍｍ的皱纹盘鲍自交鲍苗１７７．９万只,３１００只／ｍ＾２。杂交鲍苗的壳和存活率明显大于我国的皱纹盘鲍自交鲍苗。     

皱纹盘鲍遗传多样性的RAPD分析

对采自山东长岛和辽宁大连海域的两个自然群体皱纹盘鲍的遗传多样性进行了RAPD分析。16个随机引物在两群体中共检测到了179个位点,其中,长岛和大连群体中的多态位点数分别为88和91个,两群体的多态位点百分率分别为49·16%和50·84%;Shannon′s多样性指数(H0)分别为0·2496和0·2668。有70%以上的遗传变异来自群体内,显示两群体内均有较高程度的遗传变异。研究结果表明,长岛和大连的皱纹盘鲍群体已出现了明显的遗传分化。     

皱纹盘鲍与日本西氏鲍杂交育苗技术的初步研究

利用从日本引进的西氏鲍,与我国北方产皱纹盘鲍进行了杂交育苗试验,使杂交鲍苗越冬后成活率提高,生长快,抗病力强,显示出了良好的生产性状和一定的杂交优势。     

皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传变异的微卫星分析

利用4对微卫星引物分析了皱纹盘鲍Haliotis discus hannai和盘鲍H.discus discus在福建和广东养殖群体的遗传多样性。结果表明,4个养殖群体平均等位基因数为3.750~5.500,平均有效等位基因数为2.941~3.885,平均期望杂合度为0.641~0.698,平均观察杂合度为0.456~0.620,平均多态信息含量PIC值为0.558~0.645,其中惠来盘鲍群体遗传多样性最高,东山盘鲍遗传多样性最低。AMOVA分析表明,群体间的遗传变异仅为总遗传变异的4.78%,但群体间遗传分化显著(FSC=0.048,P<0.001)。群体间NEI氏遗传距离为0.084~0.186,UPGMA聚类分析表明,东山盘鲍与惠来盘鲍群体间亲缘关系最近,并与惠来皱纹盘鲍聚为一类,东山皱纹盘鲍与其它群体间亲缘关系较远。皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传多样性较高,有利于遗传选育,但与野生群体相比等位基因有所丧失。     

皱纹盘鲍与盘鲍杂交技术的研究

采用皱纹盘鲍大连群体与盘鲍日本群体进行杂交育苗试验和鲍苗种生产。结果表明,皱纹盘鲍和盘鲍正、反交组合的受精率和孵化率均低于两亲本自交组,而其苗种成活率高于两亲本自交组（提高达20％以上）;皱纹盘鲍和盘鲍的正、反交组合鲍苗的生长情况是,其平均壳长明显高于两亲本自交组鲍苗的平均壳长,最长达2．01 cm ;皱纹盘鲍与盘鲍作为亲本进行鲍苗种生产,经160 d培育,共培育出鲍苗种2020．75万只（平均壳长2．01 cm ）,鲍出苗量平均4345．7只／m2。通过鲍种内杂交的育种方法,可以达到改良和优化鲍种质的目的。     

皱纹盘鲍血细胞的亚显微结构及分类研究

通过对皱纹盘鲍血细胞的超微结构的观察，将其血细胞分成5种类型：大颗粒细胞、小颗粒细胞、特殊颗粒细胞、透明细胞和淋巴样细胞。根据胞核的形态和胞质中细胞器的结构特征，研究认为大、小颗粒细胞是同一类细胞的不同发育阶段，而特殊细胞则是大、小颗粒细胞的原始细胞；透明细胞和淋巴样细胞是两类完全分化了的细胞。     

碘伏对皱纹盘鲍的急性毒性试验

试验结果表明：碘伏对稚鲍2，42，48，72，96hLC50分别为3．91，0．64，0．38和0．36mg.L^-1有效碘。稚鲍对碘伏很敏感，且忍耐质量浓度范围较窄，不适合带水消毒。     

皱纹盘鲍肌动蛋白基因启动子的克隆和序列分析

从皱纹盘鲍雌性个体的足部肌肉提取总DNA后，通过聚合酶连式反应（PCR）技术扩增得到一个扩增产物。经克隆、筛选、确定重组子产物。测序得到了长度为511bp的启动子片段。分析测序结果发现，皱纹盘鲍肌动蛋白基因启动子DNA序列与目前己知的红鲍相应序列的相似度为95%；GC碱基含量为38.93%，较红鲍的低（59.2%）；所得序列含有高度保守的基本表达调控元件，即一个CAAT框和四个TATA框。     

皱纹盘鲍蛋白酶的研究

利用分光光度计比色法测定了２－３ｃｍ的皱纹盘鲍的蛋白消化酶的最适温度、最适ＰＨ以及１１种金属离子对其的影响。结果表明：在最适温度５０℃下的活化能为４．８９×１０×４Ｊ／ｍｏｌ；最适ＰＨ为２．６０和５．００。对其最适ＰＨ值的分析表明：皱纹盘鲍存在有胃蛋白酶，且活性颇高。     

2种壳色皱纹盘鲍营养成分的比较

对皱纹盘鲍 (HaliotisdiscushannaiIno) 2种壳色个体———红壳个体和绿壳个体的一般营养成分、矿物元素以及脂肪酸的组成和含量进行比较研究。结果表明 ,两者对应组织 (足肌、内脏、生殖腺 )中水分、蛋白质、粗脂肪、灰分的含量基本无差异 ;内脏灰分颜色均为红褐色 ,但足肌灰分颜色明显不同 ,绿壳个体呈灰白色而红壳个体则呈浅砖红色。矿物元素的分析结果进一步显示 ,足肌中除了Ca之外 ,所测元素的含量均以红壳个体为高 ,其中Fe、Cu、Mn的含量为绿壳个体的2～ 3倍 ;红壳个体贝壳中Mn的含量亦较高 ,约为绿壳个体的 2倍。两者上述对应组织的脂肪酸种类相同 ,含量基本一致。此外 ,粗脂肪、无机元素含量以及脂肪酸的组成和含量在不同组织之间存在较明显的差别     

二倍体和三倍体皱纹盘鲍精子发生过程的超微结构

比较了二倍体和三倍体皱纹盘鲍精子发生过程中细胞和细胞器的超微结构变化。结果表明,二倍体皱纹盘鲍的精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子5个阶段。其形态结构发生了一系列变化,主要包括：核染色质浓缩、线粒体的发达与融合、顶体形成和胞质的减少。三倍体皱纹盘鲍各种生精细胞的直径和核径均大于二倍体,精原细胞结构与二倍体相似;初级、次级精母细胞的胞质中,除溶酶体外,线粒体、内质网等细胞器少于二倍体,线粒体大小与二倍体没有差别,但形态不典型,层状嵴不发达;三倍体皱纹盘鲍的精子发生停滞在精子细胞阶段,表现出各种畸形状态,很多趋于解体,没有发现成熟精子。     

饵料对不同规格皱纹盘鲍能量收支的影响

对3种不同规格的皱纹盘鲍(41.40±2.05、54.22±2.66、63.17±2.52mm)分别进行不同饵料搭配的投喂,并对各生理活动的能量代谢进行了测量与计算。实验结果表明,搭配投喂的实验组中皱纹盘鲍能够摄取更多的有机物作为能量代谢的基质。扣除代谢能、排泄能和排粪能后,搭配投喂能提供给皱纹盘鲍的生长能显著高于对照组(P<0.05),尤其是孔石莼与裙带菜搭配投喂组以及裙带菜与海带搭配投喂组,其获得的生长能的比例在3种规格组中均处在很高的水平,是鲍的筏式养殖中值得推广使用的投喂方法。     

皱纹盘鲍食道的结构与功能

以组织学，组织化学，扫描电镜和透射电镜观察及酶活性测定等方法研究了皱纹盘鲍的食道，食道可分为前，中后，三段，中段又可分为食物通道和食道侧囊，食道粘膜上皮由纤毛柱状细胞，粘液细胞，闰状腺细胞，微绒毛细胞和分泌细胞组成，纤毛柱状细胞参与运输食物和分泌物，并呈现吸收细胞的结构特征；粘液细胞分泌中性和酸性粘多糖；颗粒状腺细胞内充盈分泌颗粒；微绒毛细胞呈现吸收细胞的特征；分泌细胞具有强的蛋白酶等酶活性，能以楔浆分泌形式分泌消化酶，该细胞还具有吸收和细胞内消化作用。食道中段还呈现3种植物多糖酶活性。     

用流式细胞仪检测活体鲍倍性

分别取皱纹盘鲍（Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ）足肌和血液制样,经ＤＡＰＩ染色后,用ＰａｒｔｅｃＰＡＳ－Ⅲ型流式细胞仪测定其倍性,试验证明三倍体鲍的ＤＮＡ相对含量是二保体的１．５倍,切足法和抽取血液法两种制样方法均得到满意结果,用流式细胞仪法检测鲍倍性适应鲍多倍体产业化的需要。     

不同卵色皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)幼鲍的生长与免疫比较

随机选取100只经过480 d养殖的3♀×10♂绿卵全同胞家系子一代(F1)的皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)幼鲍为实验材料,进行雌雄、卵色分类后,测量所有样本总重、壳长、壳宽等生长指标,并测定不同卵色幼鲍的超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)和溶菌酶(LZM)的活性,进行单因素方差分析(One-way ANOVA).结果显示,在生长方面,不同卵色幼鲍的各生长指标无显著差异(P＞0.05),但绿卵幼鲍的各生长指标均高于其他3种卵色;在免疫酶活性方面,4种卵色幼鲍在SOD和CAT活性上无显著差异(P＞0.05),绿卵幼鲍的AKP、ACP和LZM 3种酶的活性与棕色和棕红色卵幼鲍存在显著差异(P＜0.05),而与棕绿色卵幼鲍无显著差异,其酶活性从高到低按卵色排列依次为绿色、棕绿色、棕色和棕红色.上述研究结果可为利用卵色选育皱纹盘鲍高产抗逆新品系提供依据.     

三倍体皱纹盘鲍活体倍性检测

以皱纹盘鲍的血细胞为材料，采用植物血球凝集素(PHA)体外浸泡法，运用正交实验设计，探讨PHA处理时间、PHA浓度、抽血时间对细胞分裂频度的影响。根据正交实验直观分析结果，得出用血细胞直接制备染色体标本进行三倍体皱纹盘鲍活体倍性检测的最优组合：PHA处理时间18h、PHA浓度0．04％，抽血时间22：00-24：00，3因素的主次顺序：PHA处理时间→PHA浓度→抽血时间。并可获得大量图象清晰、长度适中、分散良好的中期分裂相，是皱纹盘鲍活体倍性检测的最佳方法。同时，通过流式细胞仪测定皱纹盘鲍血细胞DNA相对含量进行三倍体皱纹盘鲍活体倍性检测，该方法制样简单，测试速度快。