山东省芋花叶病毒病的田间调查及鉴定

为明确芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,Ds MV)在山东芋种植区的发生和遗传进化,在山东潍坊、青岛、烟台、日照和临沂等5个芋主栽区进行调查,对采集样品进行病毒病病原鉴定、序列分析和遗传进化分析。结果显示,芋花叶病毒的检出率为55.9%,在5个地区皆有分布。5个Ds MV分离物cp基因的核苷酸序列相似性为88.5%~91.9%,氨基酸序列相似性为93.4%~97.5%;与国内外已报道代表性Ds MV分离物cp基因的核苷酸与氨基酸的序列相似性分别为74.8%~99.4%、79.7%~99.1%。遗传进化分析显示,Ds MV山东分离物与日本分离物(Ds23)、中国分离物(ND和ZAN)和美国分离物(Ds MV-U2)亲缘关系较近,聚在同一分支。综上,Ds MV在山东省芋主栽区发生普遍,其cp基因序列之间变异相对较大。     

江苏莲藕主产区黄瓜花叶病毒病发生分布调查

由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)等引起的病毒病害是限制莲藕产量和品质的重要因素之一。采用酶联免疫吸附法(ELISA),调查了江苏省莲藕主产区CMV的发生分布状况。调查结果表明,43份莲藕样品中共检测到28份阳性样品,侵染率达65.12%,其中扬州宝应、邗江及苏州吴中地区的检出率依次为75%、58.6%和100%;表现黄化、花叶及皱缩花叶症状的莲藕叶片中CMV的检出率达100%,黄斑、皱缩、斑驳以及无症莲藕叶片中也均有检出,表明CMV在江苏莲藕上发生普遍,且可能产生多种症状类型。     

辣(甜)椒抗黄瓜花叶病毒(CMV)研究进展

黄瓜花叶病毒病(CMV)是为害辣(甜)椒的重要病毒,国内外对其研究较多。通过综述CMV的株系分化、抗性遗传、分子标记、抗CMV基因工程以及抗CMV育种等方面的研究结果和报道,旨在为辣(甜)椒抗CMV育种提供参考依据。     

辣椒苗期抗感黄瓜花叶病毒病比较转录组学分析

为了研究辣椒在黄瓜花叶病毒侵染下的分子响应机制、发掘抗病相关基因,以感病材料茄门和抗病材料JJ101为对象,对接种黄瓜花叶病毒前后的茄门和JJ101叶片进行高通量转录组测序,并利用生物信息学方法对基因表达和功能进行研究.结果显示,采用RPKM法计算基因表达量,共筛选出JJ101和茄门接种黄瓜花叶病毒后的1158个差异表...     

番茄CMV抗性育种主要进展

CMV是我国番茄生产中的主要病害,本文通过对番茄CMV的病原,抗源,抗性遗传进行总结,系统论述了我国在番茄抗CMV传统育种中的应用进展和分子育种中的研究进展.     

黄瓜花叶病毒病和绿斑花叶病毒病的发生与防治

1 黄瓜花叶病毒病 1．1症状 1）花叶型。新叶上出现黄绿相间的症状,叶片成熟后变小、皱缩、边缘卷曲。瓜条上出现深浅绿色相间的花斑,染病后瓜条生长缓慢、畸形。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒病生防菌株的分离与筛选

从黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）病发病严重的田块采集黄瓜健株和病株,从不同生境（土壤、根围、叶围、茎围、根内、茎内和叶内）分离得到587株生防细菌。通过对各菌株胞外酶（葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶）活性及产嗜铁素活性进行测定,根据不同指标对菌株进行赋值,选择出157个菌株。进一步对其进行指纹图谱聚类分析,根据ARDRA图谱分析,筛选出47个菌株。通过47个菌株温室防效试验,发现9株菌株的防效达40%以上,其中菌株HW2的防效高达57.02%,其来源于嗜麦芽寡养单胞菌属（Stenotrophomonas maltophilia）,另外8个均来源于芽孢杆菌（Bacillus sp.）,其中3个为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对47个菌株的活性赋值和温室防效进行相关性分析,相关系数为0.83。通过试验建立了针对CGMMV筛选生防菌株的系统,该系统可以为其他病毒病害生防菌株筛选提供参考。     

不同药剂防治黄瓜花叶病毒病田间药效试验

为寻找能有效防治黄瓜花叶病毒病的药剂,选用了核苷·溴·吗啉胍、氨基寡糖素、超敏蛋白、天达2116(复合氨基低聚糖农作物抗病增产剂)、核苷·溴·吗啉胍+氨基寡糖素、核苷·溴·吗啉胍+超敏蛋白、核苷·溴·吗啉胍+天达2116、核苷·溴·吗啉胍+氨基寡糖+ZnSO4、核苷·溴·吗啉胍+超敏蛋白+ZnSO4,以及核苷·溴·吗啉胍+天达2116+ZnSO4等药剂组合,研究了其对黄瓜花叶病毒病的田间药效。试验结果表明,核苷·溴·吗啉胍+天达2116+ZnSO4的防治效果最好,核苷·溴·吗啉胍+氨基寡糖素次之,二者防效均达到70%以上。     

甜(辣)椒导入CMV卫星RNA互补DNA的植株再生

甜(辣)椒(Capsicum annuum L.)是我国主要蔬菜之一,黄瓜花叶病毒(简称CMV)和烟草花叶病毒(简称TMV)常造成甜(辣)椒的严重危害。经过多年的育种实践,人们已经有了较好的抗TMV育种材料。而对CMV,目前还没有可利用的自然抗源和有效的防治措施。国内外在利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行甜(辣)椒的转化研究已有报道。W.Liu等(1990)获得了抗卡那霉素的芽组织并有GUS基因表达;王玉文等(1991)检测到GUS基因在甜椒子叶上的瞬间表达。本试验试图利用农杆菌导入抗CMV基因(CMV卫星RNA互补DNA),以提高甜(辣)椒的抗CMV能力。     

黄瓜花叶病毒的RT-PCR检测

根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,CMV质粒作为RT-PCR反应的阳性对照,进行cDNA合成和PCR扩增.对2002-2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的767bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物.结果表明98份材料中96.94%检测到CMV.     

黄瓜对西瓜花叶病毒病抗性的研究进展

西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus,WMV）是侵染黄瓜的主要病毒之一,给黄瓜生产带来了极大的损失。本文对WMV进行了简要介绍,对黄瓜WMV的抗病性鉴定方法、抗病遗传规律、抗病种质资源和分子标记的筛选与应用进行了综述,并对其存在的问题和未来的研究方向进行了分析和展望。     

西瓜花叶病毒2号外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

以郑州地区西瓜花叶病病叶分离物──西瓜花叶病毒２号（２－ＷＭＶ－）为毒源，从繁殖寄主西葫芦病叶中分离、鉴定了病毒。以病毒基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ，通过多聚酶链式反应（ＰＣＲ），从ｃＤＮＡ中扩增和克隆了病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因，其中包括３’端非编码区，完成了全部核苷酸序列分析。ＣＰ基因全长１０９９个苷耷酸，其中编码区长９０３个核苷酸，编码３０１个氨基酸，３’端非编码区长１９６个核苷酸。Ｚ－ＷＭＶ－２ＣＰ基因的编码区比Ａ－ＷＭＶ－２，Ｕ－ＷＭＶ－２两株系的ＣＰ基因编码区分别长出６０个核耷酸，多编码２０个氨基酸。与两个株系相比，编码区的核昔酸序列同源性分别为８８．５％和８７．０％，氨基酸序列同源性分别为９０．０％和８８．７％，３，端非编码区的同源性分别为６８．３％和７１．８％。若不考虑Ｚ－ＷＭＶ－２多出的６０个核苷酸及２０个氨基酸，则上述同源性依次为９５．４％、９３．７％、９６．４％、９５．０％、８８．８％和９３．４％。构建了含ＷＭＶ－２ＣＰ基因的大肠杆菌表达载体，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，表达出了与天然病毒外壳蛋白分子量相同的蛋白。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒传播方式的研究进展

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物重要病毒,通过多种方式如种子、土壤、水、介体和机械接触传播,病害蔓延扩散迅速。该病害在许多国家和地区频繁报道,我国也曾大面积受到为害,尤其是西瓜嫁接地区,产业损失严重。带毒种子为初侵染源,发生过该病害的地块土壤也是重要的侵染源,发病植株可通过灌溉水以及机械接触传播病毒。为了更好地控制该病害的发生与流行,本文介绍了该病毒传播方式方面的研究进展。     

黄瓜CMV复制酶基因相对表达定量PCR方法的建立

为了对黄瓜感染CMV植株体内CMV复制酶基因表达水平进行测定,建立CMV复制酶基因的相对表达定量检测技术,并用该方法开展黄瓜植株CMV抗性鉴定试验,以18SrRNA基因为对照,CMV复制酶基因为目标基因,设计引物,探索SYBRGreen实时荧光定量PCR反应体系,同时对CMV复制酶基因进行均一化处理,利用荧光阈值(Q值)计算p-防御素基因的相对表达量。结果表明:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术测定黄瓜CMV复制酶基因相对表达定量具有较高的准确性,耗时短,该技术可应用于CMV抗性植株的筛选。     

部分蔬菜CMV分离物CP基因的克隆及序列分析

 对来自国内不同地区、不同蔬菜作物上的8个黄瓜花叶病毒分离物, 采用一步法RT-PCR扩增得到CP基因全长片段, 分别克隆到pMD-18T载体并测序。结果表明, 本研究8个分离物的CP基因均为657个碱基, 可编码218个氨基酸, 它们之间的核苷酸序列同源性较高, 达92.8% ～99.1%; 将它们与GenBank中部分CMV CP基因序列比较, 显示出与CMV亚组Ⅰ株系的核苷酸序列同源性达90.7%～98.0%, 而与亚组Ⅱ株系的核苷酸序列同源性仅有75.8%～78.1%。因此, 这8个分离物应归属于CMV亚组Ⅰ。     

携带黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的双元载体构建

以黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因为目的基因,以大肠杆菌DH5α为表达载体体外操作寄主菌,农杆菌LBA4404为最终双元载体寄主菌。将RT-PCR获得的目的基因片段连接到pMD18-Tsi mple Vectoer上,冻融法转化到大肠杆菌扩繁后,经限制性核酸内切酶酶切插入表达载体适宜酶切位点上,重组质粒DNA经冻融法转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中得到工程菌,完成含目的基因的双元载体构建,为培育抗CMV病毒的番茄品种打下基础。     

香蕉两种主要病毒多重PCR检测方法的建立

 根据香蕉束顶病(Banana bunchy top virus, BBTV) 和香蕉花叶心腐病(Cucumber mosaic virus,CMV) 的复制酶基因、外壳蛋白基因序列分别设计特异性引物对, 在BBTV单一PCR和CMV RT-PCR优化体系的基础上, 建立了可同时检测BBTV、CMV的多重PCR检测方法。此方法可以特异地从感染BBTV和CMV的样品中扩增出2条带, BBTV (748 bp) 和CMV (557 bp) 。扩增产物序列测定结果表明, BBTV扩增产物与GenBank中其他分离物的核苷酸序列同源性为91% ～99% , CMV扩增产物与GenBank中其他分离物的核苷酸序列同源性为93%～98%。