荔枝体细胞胚胎发生的研究进展

荔枝体细胞胚胎发生体系的建立对于荔枝生物技术的发展是十分必要的。本文对荔枝体细胞胚胎发生的研究作了简单综述,并概括了荔枝体细胞胚胎发生的培养过程、影响因素以及出现的问题。     

荔枝体细胞胚胎发生的研究进展

荔枝体细胞胚胎发生体系的建立对于荔枝生物技术的发展是十分必要的 .本文对荔枝体细胞胚胎发生的研究作了简单综述 ,并概括了荔枝体细胞胚胎发生的培养过程、影响因素以及出现的问题 .     

幼胚和花药培养诱导荔枝胚性愈伤组织

以福建荔枝主栽品种元红的幼胚为外植体，优化了离体培养诱导胚性愈伤组织（ＥＣ）的培养基。对ＥＣ的诱导，较高质量浓度的蔗糖（５０ｇ·Ｌ＾－１）和２，４－Ｄ（２￣４ｍｇ·Ｌ＾－１）优于较低质量浓度的蔗糖（３０ｇ·Ｌ＾－１）和２，４－Ｄ（０．５￣１．０ｍｇ·Ｌ＾－１）。ＢＡ和活性炭（ＡＣ）对ＥＣ的诱导有抑制作用。适当的硫代硫酸银（ＳＴＳ）（２９．４μｍｏｌ·Ｌ＾－１）可以抵消ＢＡ的抑制作用。在ＭＳ附加质量     

荔枝幼胚的离体培养

把３个不同胚胎发育类型荔枝，品种乌叶，兰竹，绿荷包的幼胚置于含有不同生长调节剂的ＭＳ培养基上进行培养，结果表明：授粉后１５ｄ的胚胎人工培养十分困难，而授粉后３０－４０ｄ的幼胚，在ＭＳ基本培养基附加一定浓度的ＢＡ，ＮＡＡ，ＧＡ以及ＡＢＡ等的不同组合培养基上，均可诱导形成细胞团，并能进一步形成胚状体或芽状体，部分育型品种兰竹，有胚胎败育早期但未死亡１／２ＭＳ附加低浓度的细胞人裂素及生长素等的培养基上，     

幼胚和花药培养诱导荔枝胚性愈伤组织

以福建荔枝主栽品种元红的幼胚为外植体，优化了离体培养诱导胚性愈伤组织（ＥＣ）的培养基．对ＥＣ的诱导，较高质量浓度的蔗糖（５０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（２～４ｍｇＬ－１）优于较低质量浓度的蔗糖（３０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（０．５～１．０ｍｇＬ－１）．ＢＡ和活性炭（ＡＣ）对ＥＣ的诱导有抑制作用．适当的硫代硫酸银（ＳＴＳ）（２９．４μｍｏｌＬ－１）可以抵消ＢＡ的抑制作用．在ＭＳ附加质量浓度为５０ｇＬ－１的蔗糖和２ｍｇＬ－１的２，４－Ｄ培养基上，下番枝、乌叶、元红和陈紫幼胚诱导ＥＣ的频率分别为２２％、１４．５％、１７．２％和１６．８％．在上述培养基中，元红花药产生ＥＣ的频率为０．１％～０．６％，而加入ＳＴＳ（２９．４μｍｏｌＬ－１）可提高至１．２％～５．６％．对影响ＥＣ的诱导因素和它们的相互关系进行了讨论     

荔枝幼胚的离体培养

把3个不同胚胎发育类型荔枝(Litchi chinensis Sonn.)品种乌叶、兰竹、绿荷包的幼胚置于含有不同生长调节剂的MS培养基上进行培养。结果表明:授粉后15d的胚胎人工培养十分困难,而授粉后30-40d的幼胚,在MS基本培养基附加一定浓度的BA,NAA,GA以及ABA等的不同组合培养基上,均可诱导形成细胞团,并能进一步形成胚状体或芽状体,部分败育型品种兰竹,在胚胎败育早期但未死亡的幼胚,以及完全败育型品种绿荷包,在授粉后30d的胚珠,经培养亦能形成胚状体,胚状体在MS或1/2MS附加低浓度的细胞分裂素及生长素等的培养基上,增殖能力甚强,甚至不加任何附加物的情况下亦能增殖。高浓度的附加物则不利于胚状体的增殖。从胚状体诱导成苗有待进一步研究。     

小麦组织培养体细胞胚胎的次生胚状体发生研究

本研究首次通过幼胚和成熟胚培养，对小麦体细胞胚胎的次生胚状体发生潜力进行了探讨。结果表明，幼胚培养效益显著优于成熟胚，主要体现为成熟胚外植体存在严重的难以克服的微生物污染难题，其平均污染率达50％以上，而幼胚仅为0．97％。同时．叶状体化愈伤组织发生率和植株再生率．幼胚极显著高于成熟胚（P〈0．001）。对愈伤组织再分化培养物的组织学切片观察发现，成熟胚愈伤组织的细胞大、多呈长形或不规则形、胞质稀薄或空囊状、胞间排列松散，没有明显的分生组织区；而幼胚愈伤组织的细胞小、多圆形、胞质浓密、染色深、胞间排列紧密、具有明显的分生组织区，能分化形成体细胞胚胎，并且还发现材料“Fan-33”具有体细胞胚胎的次生体细胞胚胎发生潜力。这种优异的体细胞无性克隆特性，对优化小麦遗传转化系统，提高转基因工程效率具有重要意义。     

枣幼胚体细胞胚的发生及植株再生

以小梨枣胚龄30~40d的幼胚为外植体,研究不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、脱落酸(ABA)及其组合对幼胚胚乳看护培养效果、体细胞胚发生、成熟及萌发的影响。结果表明,适宜小梨枣幼胚(30~40d)胚乳看护培养的培养基为MS+IBA0.2mg·L~(-1)+BA0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1),成胚率达62.07%;诱导胚性愈伤组织较适宜的培养基为MS+TDZ 0.6mg·L~(-1)+IBA1.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1),诱导率为53.32%;在MS+6-BA 0.3mg·L~(-1)+NAA0.02mg·L~(-1)组合下有利于体细胞胚的发生,发生率可达71.43%;ABA可促进体胚的正常发育,质量浓度为0.5mg·L~(-1)时,体细胞胚结构完整,体胚成熟率为21.83%;将成熟的体胚转接到含有IBA 0.03mg·L~(-1)+GA30.03mg·L~(-1)的培养基中,体细胞胚萌发形成完整植株。     

烟草体细胞胚胎诱导发生初报

 以烤烟云烟85叶片诱导的愈伤组织为材料,通过不同的激素浓度配比进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力。结果表明:云烟85体胚诱导的最高频率为61.1%,其体细胞胚发生的最佳激素配比是NAA 2.0 mg/L,BA 0.2 mg/L,从诱导出的体胚中观察到体胚几个主要发育阶段。     

荔枝愈伤组织诱导及其体细胞胚胎发生研究初报

分别取元红荔枝盛花后45d未败育的幼胚、一个月龄的实生苗叶片、成龄树叶片、未受精子房接种在愈伤组织诱导培养基上,均能诱导出愈伤组织,但仅有幼胚能诱导出胚性愈伤组织。幼胚在含5% 蔗糖的MS基本培养基附加2,4-D2mg/L+水解乳蛋白500mg/L的培养基上诱导率最高。幼胚愈伤组织在含5% 蔗糖的基本培养基附加10% 椰乳的培养基上,白色胚状体发生率最高。胚状体易提前萌发,仅抽生根不抽生茎。健壮的未生根胚状体在含5% 蔗糖的培养基附加BA1mg/L的培养基上生根率最低,为理想的萌发培养基。随着BA浓度的降低,生根率提高,呈负相关。同浓度BA抑制生根的效果好于KT。在萌发培养基上生长一段时期后,少数较成熟的胚状体抽生出茎叶,长成完整植株。     

果树的体细胞胚发生

本文综述了影响果树体细胞胚发生的主要因素以及果树体细胞胚高频率发生、同步化控制措施及成熟与转化的条件,列表统计了离体培养体细胞胚发生的果树种类及部分果树体胚发生的培养基。     

荔枝体胚发生及成苗研究

以荔枝不同器官为外植体诱导出愈伤组织，在中２，４－Ｄ，１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋５％蔗糖的ＭＳ培养基上 细胚胚性愈伤组织系；胚性愈伤组织高浓度２，４－Ｄ（５－８ｍｇ／Ｌ）在黑暗中激发诱导培养后，转移到去除２，４－Ｄ，含低浓度ＮＡＡ和ＩＢＡ的ＭＳ培养基上，体胚发育成熟。     

北美枫香雄花和花序轴诱导体细胞胚胎发生

北美枫香是适应性强、生长速度快、秋叶红艳美丽的园林绿化树种。为了提高其繁殖效率,以北美枫香雄花和花序轴为外植体,采用完全随机区组设计,研究外植体类型,基因型,TDZ浓度对北美枫香愈伤组织的诱导、体胚分化和萌发的影响。结果表明:雄花作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.15 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶;花序轴作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.01 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶。合适的萌发培养基为不含水解酪蛋白的基本培养基。如果出现球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的改良Blaydes培养基上,体胚经成熟可进一步形成完整小植株。该体胚体系的建成将显著提高北美枫香的繁殖效率。      

扁桃杂交幼胚培养初报

采用人工授粉后46~74 d的杂交扁桃幼胚进行胚培养,诱导萌发产生试管苗,将试管苗再进行分化增殖。结果表明:最佳培养材料的获得时间是人工授粉后60 d,MS基本培养基最适合胚生长萌发;G培养基附加BA 0.5 mg.L-1,IBA 0.15 mg.L-1或0.2 mg.L-1为试管苗分化增殖的最佳组合。     

巴西橡胶树的次生体细胞胚胎发生——一种新的长期性体细胞胚胎发生诱导方法

在橡胶树中,以未成熟种子的内珠被为外植体通过其胚性愈伤组织的继代增殖可以持续不断地诱导体细胞胚胎,该方法称为持久体细胞胚胎发生(Maintained Somatic Embryogenesis,MSE)。然而,直接利用内珠被组织诱导易碎型胚性愈伤组织系不但频率很低,而且迄今仅无性系PB260和RRIM703能够藉此途径实现体细胞胚胎的长期诱导。本研究以体细胞胚胎为外植体成功诱导和建立可增殖胚性愈伤组织系。组织学分析显示,体胚外植体切口边缘表皮及周维管细胞脱分化导致易碎型胚性愈伤组织的产生。所获愈伤组织经继代增殖和筛选最终得以建立胚性愈伤组织系。该新方法被称为间接次生体细胞胚胎发生(Indirect Secondary Somatic Embryogenesis,SSE)。我们还就体胚及内珠被2种外植体诱导胚性愈伤系的潜力进行了深入比较。结果表明,采用体胚外植体诱导胚性愈伤组织系其频率明显高于内珠被外植体。除了PB260和RRIM703之外,我们通过SSE途径还成功建立了无性系PB217的胚性愈伤组织系,而该无性系之前一直难以用MSE法获得其胚性愈伤系。此外,采用SSE法建立胚性愈伤系所需继代培养的次数也大为减少。对于不少仅实现初生体细胞胚胎发生的无性系而言,该方法无疑为其长期性体胚发生的诱导开辟了一条新的途径。     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

[目的]对日本落叶松体细胞胚胎发生进行系统研究。[方法]以日本落叶松5个品种的未成熟合子胚为外植体,研究基本培养基、品种基因型、杂交系和纯系品种对日本落叶松愈伤组织诱导的影响,以及ABA对体细胞胚成熟及植株再生的影响。[结果]通过对日本落叶松胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的成熟培养获得再生植株。2种基本培养基中,DCR对胚性愈伤组织的诱导频率最高,达54.0%;落叶松品种之间的愈伤组织诱导率有差异,以杂交品种愈伤组织的诱导率最高,达71.4%,优于纯系的落叶松品种（27.3%～50.0%）;在体细胞胚的成熟培养过程中,ABA可严重影响体细胞胚的发育,并影响到其以后的萌发能力和植株再生。[结论]杂交品系更有利于胚性愈伤组织诱导,ABA对日本落叶松体细胞胚胎发育起重要作用。     

大豆体细胞胚胎发生系统组织学研究

通过对栽培大豆品种体细胞胚胎发生频率组织学进行研究,了解在农杆菌和卡那霉素存在的条件下,大豆未成熟子叶胚性细胞的发生、分化、发育过程和胚胎发生规律,为大豆未成熟子叶诱导体细胞胚发生高效转化体系提供理论依据。