猪胚胎生物技术研究进展

本文就猪的胚胎移植及其相关的胚胎生物技术,包括超数排卵、同期发情、胚胎移植、胚胎体外培养及保存、胚胎分割、嵌合体动物制作、性别控制、卵母细胞体外培养及体外受精、受精卵的基因转移和胚胎的核移植等,进行了综述。     

显微注射导入生长激素基因产生转基因兔和鼠

本研究旨在建立显微注射转基因系统；获得表达人生长激素和猪生长激素基因的转基因兔和鼠；探索提高动物生长性能的可能性与可行性。家兔和小鼠作超数排卵和交配处理，收集原核胚。将小鼠金属巯因启动子与人生长激素和绵羊金属巯因启动子与猪生长激素融合的基因质粒注入雄原核，观察体外和体内发育结果。用斑点杂交、ＰＣＲ技术和放射免疫检测外源基因的整合和表达情况。试验结果，胚胎回收后立即作体外培养的囊胚发育率为９０％，基     

波尔山羊活体采卵与卵母细胞体外受精技术

对10只不孕不育波尔母山羊采用超数排卵、活体采卵、卵母细胞体外成熟培养以及体外受精等技术方法,探讨其是否能正常繁育后代。试验中6只供体经超数排卵处理,在发情前利用特制的采卵装置进行活体采卵,共采集到30枚形态学正常的卵母细胞。经过体外成熟培养,有21枚成熟卵母细胞进行了体外受精处理和培养,获得16枚2 细胞胚胎,移植到4只同期发情的当地山羊受体输卵管内,经妊娠检验,有两只受体受孕,其中1只受体产出正常羔羊2只。该技术经进一步改进完善后可望作为不孕不育波尔山羊繁殖后代的辅助生育技术。     

家兔早期胚胎体外培养和移植研究

用ＦＳＨ，ＰＭＳＧ，ＨＣＧ和ＩＣＩ－８０９９６对２０只家兔进行超数排卵，平均每只排卵１９．１枚，回收胚胎１３．５枚。超排卵数和卵子回收数ＦＳＨ分别为２６．３枚和２１．１５枚，ＰＭＳＧ为２２枚和１３．５。将正常的２５枚１细胞，７枚２细胞和３２枚４细胞期胚胎在ＴＣＭ－１９９培养液，５％ＣＯ２和 ３８．５℃环境中培养６０－７ ０ｈ，６３．１７％的胚胎可发育至囊胚移植至５只体兔后，产出仔兔１３只。     

小鼠早期胚胎体外培养的实验研究

本试验采用国产化学试药和哈尔滨地区的天然水,制备了 Brinster 化学合成培养液。把160枚通过超数排卵获得的2-细胞期小鼠胚胎放在添加适量牛血清白蛋白或胎牛血清的 Brinster 化学合成培养液内,并在适当湿度、5%CO_2和95%空气的气相环境、37℃温度条件下培养。58小时后,大约67%4小鼠2-细胞期胚胎发育到桑椹胚阶段;大约32%的小鼠桑椹胚发育到囊胚期阶段。试验证明,用国产化学药品和哈尔滨地区水配制的培养液可以对早期小鼠胚胎进行体外培养研究。     

山羊胚胎体外培养和移植的研究

用FSH、LH、PMSG、HCG对40只山羊进行超数排卵处理，平均每只排卵21．5枚，回收11．5枚胚胎。超数排卵和卵子回收数，FSH分别为24和14枚，PMSG为19和9枚。将正常的30枚1细胞，12枚2细胞和45枚4细胞胚胎在TCM──199培养液，5％CO2和38．5℃环境中培养60－78小时，65．23％的胚胎可发育至囊胚，移植6只受体羊。妊娠检查已孕3只。     

科苑荟萃

云南水牛的同期发情、超数排卵和胚胎移植试验；无角道塞特绵羊超数排卵技术研究；胚胎移植技术在云南半细毛羊上的应用研究；受体品种、体重及移植季节对杜泊羊胚胎妊娠率和新生羔羊体重的影响；波尔山羊胚胎徒手分割试验；波尔山羊胚胎回收和移植器械研制与应用；OPS法玻璃化冷冻绵羊胚胎的移植效果观察；影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析；安胎散提高羊胚胎移植受胎率及其机理的研究；[编者按]     

羊胚胎生产和胚胎移植

综述了绵羊和山羊胚胎生产和胚胎移植各项技术的研究进展，包括超数排卵、体内受精与发育；成熟卵泡卵母细胞与腔前卵泡卵母细胞的体外成熟、体外受精与发育；利用极体生产胚胎以及利用胚胎生产胚胎的胚胎分割与细胞核移植克隆技术；胚胎的回收、检胚与胚胎分级，以及供体与受体的同期发情处理和胚胎移植技术。     

东方田鼠胚胎体内外生长发育

采用外阴观察法及阴道涂片法,观察到东方田鼠的发情周期为7d左右;PMSG—HCG的剂量及间隔时间对东方田鼠的超数排卵无显著影响;采用PMSG5～25U注射后即合笼,可使东方田鼠达到或接近正常排卵;东方田鼠的胚胎体外用HTF溶液培养,能正常发育至二细胞胚胎或囊胚期胚胎,比例分别为73%、30%、60%、83%和100%。     

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20 的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3% (35/112)极显著高于EPS10组的12.2% (13/107)（P＜0.01）,选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛"康康"和"双双"进行了超排试验,分别获得6枚（4枚可用胚）和10枚（9枚可用胚）胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛"双双"的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素（FSH）具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。     

不同处理方法对家兔超数排卵效果的影响

采用两种处理方法对家兔进行了超数排卵研究。结果表明:PMSG-HCG法处理的母兔卵巢上的平均排卵点数极显著(P<0.01)高于PMSG法,而PMSG-HCG法的平均囊肿卵泡数与平均卵泡数则显著(P<0.05)低于PMSG法;两种方法间的平均卵泡发育数则差异不显著(P>0.05)。说明PMSG-HCG法的超排效果明显优于PMSG法。试验还表明,母兔交配后28h采胚所获取的胚胎大多处于二细胞期,到交配后32h,胚胎多处于四细胞期。采用PMSG-HCG法进行超排处理,对家兔的胚胎发育无影响。     

对昆明白杂种鼠胚胎体外培养的实验研究──2细胞期至卵圆筒期

利用ＣＭＲＬ—１０６６和国产其它药品对昆明白杂种小鼠２—细胞期的胚胎，进行了体外培养试脸，成功地将２—细胞胚胎在体外培养条体下，使之生长发育到卵圆筒阶段。从２—细胞期开始计算，囊胚形成率为７０％，卵化率为３０％，附植率为２％，卵圆筒期胚胎形成率为１％。试验发现，把２—细胞期小鼠胚胎体外培养到卵圆筒期比体外发育到同阶段推迟１～２天，此卵圆筒期胚胎的形成率与国外报道的２４％相比仍然很低，其原因估计可能为：１）小鼠的品种；２）国产药物的纯度；３）ＣＯ２条件不同而造成。     

胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响

为了探讨胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响,进一步优化猪早期胚胎培养体系,分别进行了胚胎培养液(NCSU-23)中添加不同批号和浓度的胰岛素以及不同胚胎培养密度(培养滴体积)对猪孤雌胚早期胚胎体外发育的影响试验,并于第2、7天分别统计胚胎分裂率和囊胚发育率。结果表明:①在NCSU-23中添加5.0μg/mL批号为I-1882(Sigma公司)的胰岛素,其囊胚发育率最高,为(33.48±12.79)%;②在体外培养25枚猪孤雌胚时,按胚胎数(枚)l培养液体积(μl)为1∶2.0~1∶3.0的比例进行培养,其培养效果较好。     

羔羊超数排卵及体外受精技术研究

用FSH+ PMSG和FSH+LH 2种处理方法,对8只6周龄的高山细毛羊进行超数排卵试验,4只作对照组,并对采集到的卵子进行体外受精,探索羔羊超数排卵的可行性及体外受精的效果.结果表明:2组处理共获得发育卯泡583个,回收卵母细胞255枚.卵母细胞经体外培养24 h后与上游法获能的精子进行体外受精,48 h后2组处理...     

延边黄牛胚胎移植及诱发双胎试验

为了研究适于延边黄牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择2头供体牛和7头受体牛,进行了FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验.结果表明,供体获得7枚可用胚胎,其中诱发双胎(人工授精后移植胚胎)3枚,单胚移植4枚,妊娠5头,移植率71.4%,诱发双胎率66.7%.     

不同时期鸡胚体外培养及其影响因素的研究

采用代用蛋壳体外培养方法，对不同时期鸡胚胎换蛋壳培养进行了研究。结果表明：体外受精卵体外培养发育率为10％。X期胚胎体外培养的出雏率为1.2%；孵化1日龄胚胎体外培养的出雏率为7.9%；去1／4壳的鸡胚出雏率为3.7%；鸡胚胎换蛋壳以后，添加6－8mL稀蛋白对换壳鸡胚发育比较适宜。     

小鼠发情周期不同时期超数排卵效果的研究

实验分析了108只昆明白小鼠发情周期与超数排卯的关系，结果表明在发情周期不同时期进行超数排卵，效果有差异，以发情初期和间情后期超数排卵效果最好，见栓率高达84．20％，3．5d取胚，平均胚胎数达30．57枚，而且胚胎的质量也最好，多数是桑椹胚和囊胚，占胚胎总数的78．73％。     

氧分压对猪卵母细胞成熟尧受精及早期胚胎发育的影响

研究利用两种氧分压（5%和20%）培养卵母细胞并进行IVF试验,同时使用两种氧分压培养孤雌（PA）胚胎、体外受精（IVF）胚胎和克隆(NT) 胚胎,以探寻猪的最佳体外培养环境。结果显示：低氧分压不利于猪卵母细胞的体外成熟,其成熟率极显著低于高氧培养的,但对低氧培养的卵母细胞进行IVF时,其卵裂率和囊胚率均极显著高于高氧培养的卵母细胞;IVF进行精卵孵育时,低氧环境下,其胚胎卵裂率和囊胚率均显著高于高氧环境下的;PA胚胎、IVF胚胎和NT胚胎用两种氧分压培养,低氧条件下IVF胚胎的发育能力高于高氧培养的,而PA胚胎和NT胚胎差异不显著。试验结果表明,低氧培养虽不利于卵母细胞的成熟,但有利于其以后的胚胎发育,且低氧环境下IVF胚胎的发育能力高于高氧环境下的。     

季节与饲养管理条件对奶牛超数排卵效果的影响

<正> 胚胎移植是近代细胞生物工程应用于畜牧业生产的一项新技术,而超数排卵则是胚胎移植的核心技术,同时也为胚胎冷冻保存、胚胎分割、细胞融合、体外受精、胚胎性别鉴定等生物工程技术的研究与应用奠定物质基础。本研究立足于应用国产激素和药品,寻求适宜本地自然条件、经济状况及相对稳定的超排效果,在不同季节和月份及不同饲养管理条件下进行奶牛超数排卵试验,拢出了季节与饲养管理条件对奶牛超数排卵效果的关系。一、试验方法1、供体牛的选择:供体牛为黑白花奶牛,年龄1.5～9岁,身体健康,营养中等,性周期正常,饲养管理条件各异。2、药品器械:试验所用垂体促卵泡素(FSH)系宁波生物制品厂生产,前列腺素(PGF2α)系上海五洲药厂生产。器械     

不同剂量PMSG对獭兔超数排卵效果及胚胎质量的影响

【目的】研究不同剂量PMSG对獭兔的超数排卵效果,并通过胚胎体外观察,探究不同剂量PMSG对獭兔超数排卵后胚胎质量的影响。【方法】选取体质量3～4 kg,7～8月龄18只健康母獭兔,随机分为3组,分别为Ⅰ组（50 IU PMSG+100IU hCG）、Ⅱ组（100 IU PMSG+100 IU hCG）和Ⅲ组（150IU PMSG+100 IU hCG）,每组6只,对其进行超数排卵处理。【结果】Ⅰ组平均排卵点数、平均胚胎收集数以及平均可用胚胎数均显著于高于Ⅲ组（P<0.05）;Ⅲ组平均卵泡囊肿数显著高于Ⅰ组（P<0.05）;Ⅲ组平均充血卵泡数以及胚胎畸形率显著高于Ⅱ组,且Ⅱ组显著高于Ⅰ组（P<0.05）。【结论】用50 IU PMSG+100 IU hCG的外源激素组合处理獭兔,其超排效果较好,可在獭兔生产中参考使用。