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为了筛选出适合甜菜分子标记的InDel引物以及利用InDel引物构建能够扩增多重InDelPCR反应的引物,以提高甜菜InDel-PCR扩增的效率,利用8个甜菜品种的DNA对300对甜菜InDel引物进行筛选,结果筛选出多态性较好、条带清晰、易于识别的甜菜InDel引物44对,这44对引物共扩增出总条带116条,其中多态性条带109条,多态性比率为94%;其中有37对引物扩增的总条带为2或3条,可以作为将来多重InDel引物的首选;又从中筛选出7对多重InDel引物:ND228、ND31、ND267、ND229、ND66、ND231、ND22。 相似文献
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玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建 总被引:9,自引:1,他引:9
研究了39个玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建方法。结果显示:①用改良CTAB法得到的玉米DNA的A260/A280为1.82,A260/A230为2.02,其条带清晰,降解少,质量明显优于SDS法;②从所用的国内外63对核心引物中筛选出PIC值高、条带清晰、稳定性好的20对玉米SSR核心引物;③用8%聚丙烯酰胺电泳在20对引物扩增产物中检测出了171个位点,PIC值为0.855 4,远远高于3%琼脂糖电泳,更适合DUS测试;④建立了DUS标准品种SSR分子指纹图谱,为DNA检测方法在玉米新品种DUS测试中的运用奠定了基础。 相似文献
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以茶树叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶、模板DNA 5种因素5个水平,对茶树SRAP反应体系进行了研究,建立了茶树SRAP最佳反应体系。结果表明,茶树SRAP最佳反应体系为:Mg+22.0mmol/L、引物各0.5μmol/L、dNTP 0.1mmol/L、TaqDNA聚合酶0.5U/μL、模板DNA 4ng/μL,总体积为10μL。运用该体系,从128个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的56个引物组合。这一体系的建立及引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行茶树分子遗传学研究提供了理论依据。 相似文献
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以国兰杂交品种(系)为材料,采用L16(45)正交试验设计对Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板及引物等5个重要影响因素进行优化,确定国兰杂交品种(系)SRAP-PCR反应的最优反应体系为(25μL体系):Taq DNA聚合酶,1 U;Mg2+,1.8 mmol/L;dNTPs,0.08 mmol/L;模板DNA,100 ng;引物,上下游各0.3 mmol/L;10×PCR Buffer,2.5μL。此外,本试验采用DNA混合池技术(DNA pooling)快速筛选SRAP引物,从180对SRAP引物组合中筛选出39对扩增产物丰富、多态性高的引物组合。与常规方法相比,该技术明显缩短试验周期、节约了模板用量,为快速高效筛选SRAP引物提供了新思路。 相似文献
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不同品种(系)凤凰单丛茶DNA指纹图谱的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
为能够快速、准确地对不同品种(系)凤凰单丛茶进行鉴定,建立不同品种(系)凤凰单丛茶的DNA指纹图谱,本研究利用ISSR分子标记技术,以4份凤凰单丛茶品种为材料,对UBC802~UBC899等58条ISSR引物进行筛选,得到了12条多态性好的ISSR引物。在确定引物最佳退火温度后,利用这12条ISSR引物对39份凤凰单丛茶进行了扩增,结果显示,从其中筛选出的6条核心引物共扩增出84条带,平均每个引物扩增出14条带,其中多态性条带78条,多态性条带比例为92.86%,多态信息量平均为0.9456,其中引物UBC843多态性最为丰富,品种相似性系数在0.4063~0.9836之间;为将39份凤凰单丛茶品种全部区分开,本研究对6条核心引物进行了组合,发现其中UBC827/UBC846的组合鉴别效率最高;通过综合品种名称、国家地区编号、采样地点、高效核心引物组合名称以及ISSR数据代码,本研究建立了39种凤凰单丛茶的DNA指纹代码。之后,通过整合软件录入如品种指纹图谱代码、香型、海拔、ISSR-PCR扩增数据图片等更多相关信息,形成指纹图谱二维编码,构成凤凰单丛茶的DNA指纹图谱,为凤凰单丛茶品种权益保护及信息平台的建立提供数据支持。 相似文献
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为探讨收集保存的毛叶枣种质的亲缘关系,运用正交设计建立优化毛叶枣ISSR反应体系。结果表明:即25μL PCR体系中含2.5μL的10×PCR Buffer、3.75μL的2.5 mmol/L dNTPs、1.5μL的0.5 U/μL Taq酶、1.5μL的5μm/L引物,0.75μL的100 ng/μL DNA。然后利用ISSR标记对21份毛叶枣材料进行分类研究,并从100条引物中筛选13条扩增条带数量丰富、清晰、稳定的引物用于亲缘关系分析。结果显示:共扩增条带98条,其中多态性条带78条,多态性百分率85.7%;根据ISSR扩增结果,21份材料遗传相似系数范围为0.51~0.90。通过UPGMA法进行聚类分析,在遗传相似系数0.67水平,21份毛叶枣种质可分为3类:第I类为蜜丝枣1个种质;第Ⅱ类均来自台湾品种群,有17个种质;第Ⅲ类滇刺枣野生种、缅甸长果种和缅甸圆果种。大多数品种间相似性系数在0.67以上,说明保存种质的遗传多样性较低。 相似文献