鲫和鳝红细胞C3b受体的研究

本文应用免疫花环试验对鲫和鳝红细胞进行了检测。结果表明，鲫红细胞可形成Ｃ_３ｂ受体花环，花环率为７．９５±２．３３和免疫复合物花环，花环率为３．０５±１．１２。而鳝红细胞主要形成Ｃ_ｂ受体花环，花环率为３．９０±１．４２，免疫复合物花环率仅为０．２０±０．４２。正常鲫和鳝红细胞Ｃ_３ｂ受体花环率均高于红细胞免疫复合物花环率，差异极显著。这证实了鲫和鳝红细胞表面均存在Ｃ_３ｂ受体，从而表明二者的红细胞也具有重要的免疫功能。     

PAMs免疫粘附受体CR1-like对PRRSV感染的影响

[目的]本试验旨在探讨猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages, PAMs）表面天然免疫粘附受体—猪I型补体受体（Porcine complement receptor 1-like, CR1-like）对猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）感染PAMs的影响,为阐述CR1-like在PRRSV免疫应答中的生物学功能提供理论数据。[方法]采取PRRSV减毒活疫苗免疫接种PRRSV抗体为阴性的长白仔猪20～28 d后,提取分离抗病毒血清并检测抗PRRSV血清中和效价;将抗PRRSV血清进行不同倍比稀释,制备各类PRRSV抗原抗体复合物并接种于PAMs上,建立抗体依赖性增强（Antibody-dependent enhancement, ADE）模型,qRT-PCR技术检测各时间点PRRSV N基因拷贝数变化;PRRSV感染PAMs 9 h后,将抗血清和猪新鲜血清共处理细胞,运用ELISA测定不同时间点细胞上清液中猪新鲜血清C3b、C4b、CH50总活性...     

济宁市耕水养殖机械化技术试验示范与推广

根据济宁市水产养殖发展现状,采用耕水机械和传统的增氧机械配合使用的模式,在具有代表性的任城区进行了对比试验示范。结果表明：该模式可以实现清洁水质和增氧的双重功效,从而达到优化水质、健康养殖、低碳节能的技术要求和构建适宜水体的技术效果,为济宁市水产养殖业快速向资源节约、环境友好、质量安全、效益良好的现代渔业发展奠定了坚实基础。     

鲤红细胞C_3b受体的检测

对32例鲤红细胞检测表明,鲤红细胞除具有形成免疫复合物花环(花环率为4.22±1.54)外,还具有 C_3b 受体。能形成红细胞 C_3b 受体花环(花环率为8.17±1.99),二者差异显著,从而讧明鲤红细胞不但具有携氧、运输气体和调节体内酸碱平衡等作用,而且还有免疫功能。     

百脉根AD-cDNA文库的构建及与结瘤因子受体NFR1相互作用蛋白的鉴定

以豆科植物百脉根为材料,构建了AD-cDNA表达文库。其库容量达到每3μg DNA 2×106酵母转化子,空载率为12.5%,平均片段长度为1.5 kb。以百脉根结瘤因子受体激酶基因1(nod factor receptor kinase,NFR1)蛋白激酶结构域的DNA片段(NFR1-PK)为诱饵,利用酵母双杂技术,筛选与NFR1相互作用的基因。结果在含X-gal的四缺选择性培养基上筛选到120个克隆。经质粒抽取、PCR鉴定、回转酵母验证得到80个阳性克隆。对26个确定阳性克隆的外源片段进行测序和同源性分析,通过NCBI数据库比对分析鉴定含有JAB1、AT-RICH结构域等4个与NFR1-PK相互作用的不同基因。通过半定量RT-PCR观察在百脉根中这些基因的表达情况,其结果可为进一步研究NFR1基因的功能和调控机制提供材料。     

猪CFL2b/荧光蛋白融合基因在小鼠成肌细胞中的表达与定位

[目的]了解猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达与定位。[方法]用RT-PCR方法扩增得到猪CFL2b基因,连接到T载体上,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白基因融合,构建CFL2b-荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入C2C12细胞系。[结果]荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP-N1转染的C2C12细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-N1-CFL2b的C2C12细胞中荧光主要聚集在细胞质的肌动蛋白丝。表明转染的C2C12细胞系能够高效表达猪CFL2b蛋白,猪CFL2b基因表达的蛋白定位于细胞质中。[结论]该研究为CFL2b基因的功能及该基因与猪肉质性状的相关性的研究奠定了基础。     

用Glu-B3、Gli-B1和SEC-1b复合引物PCR检测普通小麦1BL/1RS易位系

 利用低分子量 (LMW )麦谷蛋白Glu B3的STS PCR标记、醇溶蛋白Gli B1的SSR标记和黑麦碱SEC 1b的STS PCR标记的复合PCR ,对 10个普通小麦品种、中优 950 7/CA963 2的 91个DH系和 2 8个F2 个体植株 ,进行了1BL/1RS易位系的检测。结果表明 ,中优 950 7/CA963 2的 3 9个DH系和CA963 2、晋麦 45、兰考 2 4、烟农 18、京冬 8等5个品种缺失 2个小麦贮藏蛋白位点的PCR产物 ,而拥有黑麦碱的PCR产物。利用PAGE和ELISA方法 ,对上述品种 (系 )进行了黑麦碱 (secalin)蛋白的检测 ,发现这些品种 (系 )均包含secalin ,与分子标记的检测结果吻合 ,是 1BL/1RS易位系。对 2 8个F2 单株的检测表明 ,该复合标记可以检测出早代 1BL/1RS的纯合和杂合植株     

严重感染与肾炎患者尿C3的检测及临床意义

严重感染与肾炎患者尿Ｃ_３的检测及临床意义麦少珍（粤西农垦总医院，湛江５２４０００）尿Ｃ３的检测对了解某些疾病的诊断、转归及治疗反应都有重要意义，目前国内有关严重感染患者尿３Ｃ的检测尚未见于文献报道。本文对严重感染及肾炎患者尿Ｃ３作了检测以观察其临床?..     

甘蓝ROH1与EXO70A1的表达与相互作用

【目的】以自交不亲和材料甘蓝为研究对象,分析ROH1的组织表达、ROH1与EXO70A1的相互作用及其是否参与甘蓝生殖发育。【方法】从甘蓝花蕾中克隆出ROH1和EXO70A1,应用半定量RT-PCR检测ROH1的表达特性;应用实时荧光定量PCR进一步分析甘蓝授粉后1 h内ROH1和EXO70A1的表达量和二者的相关性;分别构建以pGBKT7为载体的EXO70A1重组“诱饵”质粒和以pGADT7为载体ROH1的重组猎物质粒,并将重组质粒转化酵母菌株,利用缺陷型培养基进行蛋白质相互作用检测,确定ROH1和EXO70A1是否存在相互作用。【结果】在甘蓝中ROH1为单外显子基因,编码含398个氨基酸残基的蛋白质,与拟南芥ROH1对比发现,甘蓝ROH1序列内存在一个连续 16个氨基酸残基的缺失;它在甘蓝的雄蕊（花药）、花柱、幼茎、幼根及叶片中均有表达但表达量差异明显,其中,在幼叶、花柱和雄蕊（花药）中的表达量较高,在幼根和幼茎中的表达量较低;甘蓝授粉后柱头中ROH1的表达量在1 h内呈现出“上升-下降-上升”趋势,其中,以授粉后30 min的表达量最低,授粉后1 h的表达量达到最高值;而EXO70A1在授粉后1 h内的表达呈现出“下降-上升”的趋势,并以授粉15 min 时表达量最低,授粉后1 h时的表达量最高;二者表达的动态变化说明ROH1和EXO70A1参与了甘蓝的生殖发育;ROH1与EXO70A1的表达量趋势线呈现出负相关性,并在30 min时出现了重叠区域,预示ROH1与EXO70A1之间可能存在相互作用;成功构建pGADT7-ROH1和pGBKT7-EXO70A1酵母表达载体,通过酵母双杂交试验,发现载体pGBKT7-EXO70A1无自激活能力,融合菌株同时激活4个报告基因（AUR1-C、MEL1、HIS3 和 ADE2）的表达,表明花药中ROH1和花柱中的EXO70A1之间存在较强的相互作用。【结论】甘蓝的ROH1和EXO70A1之间存在较强的相互作用并呈现出负相关性,ROH1可能通过调节EXO70A1在柱头的分泌影响生殖发育。     

纯种和杂种山羊红细胞上C_(3b)受体的研究

本研究通过71例纯种杂种山羊血液的检测,发现山羊的红细胞上除具有粘附作用,形成免疫复合物花环外,还具有C_(3b)受体花环.从而证实,山羊的红细胞不仅具有携带、运输气体和调节体内酸碱平衡的功能,而且还具有重要的免疫功能.同时发现,杂种山羊红细胞上C_(3b)受体花环率的均值,显著高于纯种山羊(p<0.01).因此,我们初步认为,杂种山羊表现的适应性和抗病力强等杂种优势,除与遗传因素有关外,可能还与红细胞上C_(3b)受体花环率高有关。     

水牛红细胞上C_(3b)受体的初步研究

本研究通过对31例水牛血液的检测,发现水牛的红细胞上除具有粘附作用,形成免疫复合物花环外,还具有C_(3b)受体,形成红细胞,C_(3b)受体花环,从而证实,水牛的红细胞不仅具有携氧、运输气体和调节体内酸碱平衡的功能,而且还具有重要的免疫功能。     

The Minimal Active Fragment of the Cry1Ai Toxin is Located Between 36I and 605I

The novel cry1Ai gene that cloned from Bacillus thuringiensis strain SC6H8 encoded a protein exhibiting strong toxicity against Plutella xylostella and Chilo suppressalis in our previous study. Using the available information for the active fragments of other Cry toxins, eight truncated fragments were constructed to identify the minimal active fragment of Cry1Ai. All truncated fragments were expressed in Escherichia coli strain BL21 (DE3), and the insecticidal activity against 2nd- instar P. xylostella larvae was assessed using full-length Cry1Ai as a positive control. The results indicate that the minimal active fragment of the Cry1Ai toxin against P. xylostella is located between amino acid residues 36I and 605I, which is smaller than the regions previously reported for Cry1A. The first two amino acids (34T and 35P) on helix α-1 and whole helix α-2 of domain I and sheet β-32 of domain III are necessary for Cry1Ai toxin to keep its toxicity against P. xylostella.     

鸡传染性法氏囊病红细胞上C_(3b)受体的变化

对自然发病的7例传染性法氏囊病鸡红细胞上C_(3b)受体的变化进行了检测,,并与10例健康鸡进行比较,发现患病鸡红纲胞上C_(3b)受体明显低于健康鸡,而红细胞上免疫复合物,两者相比变化甚微,这一结果进一步说明传染性法氏囊病毒主要侵害鸡的免疫系统,检测红细胞上C_(3b)受体的变化,亦可作为诊断该病的手段之一。     

养殖密度对革胡子鲶生长性能及补体C3·C4的影响

[目的]研究养殖密度对革胡子鲶生长性能及血清补体C3、C4的影响。[方法]以体重（30.71±0.89）g革胡子鲶为试验对象,测定4种养殖密度（35、65、95、125 kg/m3）下革胡子鲶生长性能及血清补体C3、C4的变化。[结果]养殖60 d后,随着养殖密度升高,革胡子鲶终末重、日增重均呈下降趋势,其中35 kg/m3与65 kg/m3密度组间差异不显著（P〉0.05）。各密度处理组间饵料系数均无显著差异（P〉0.05）。低密度处理组（35 kg/m3与65 kg/m3）与高密度处理组（95 kg/m3与125 kg/m3）间死亡率差异显著（P〈0.05）。养殖密度对补体C3、C4的影响不显著（P〉0.05）。[结论]65 kg/m3可推荐为革胡子鲶的最佳养殖生产密度。     

百脉根离子通道蛋白Pollux与翻译延伸因子EF1A的相互作用

利用酵母双杂交技术,以百脉根离子通道蛋白Pollux胞内结构域为诱饵,从百脉根AD-cDNA文库中筛选到与Pollux相互作用的多个阳性克隆,经DNA序列测定及NCBI数据库BLAST分析,其中有6个阳性克隆编码翻译延伸因子EF1A。进一步在大肠杆菌中表达与纯化Pollux和EF1A融合蛋白,通过Pull-down及Western杂交证实Pollux胞内结构域与EF1A的C-末端相互作用。     

番茄DDB2蛋白的生物信息学分析、亚细胞定位及在E3复合体中的相互作用关系

紫外(UV)辐射诱导的DNA损伤可导致农作物减产。DDB2蛋白参与由紫外辐射造成的DNA损伤的修复过程已经在人类、水稻和拟南芥中得到证实。DDB2与DDB1、CUL4相互作用形成E3泛素连接酶复合体,该复合体对植物根茎生长、花期调控和光形态建成等多种植物发育过程起调控作用。成功克隆了番茄DDB2基因,构建了DDB2-黄色荧光蛋白融合表达载体。通过对野生型番茄UV辐射后DDB2基因表达水平的半定量分析,证明番茄DDB2基因受UV诱导表达;运用生物信息学分析对DDB2蛋白序列与模式生物进行同源比对,发现2个WD-40重复和一个DWD盒保守结构域;通过对DDB2融合黄色荧光蛋白转基因番茄根尖的荧光显微观察,证实番茄DDB2定位于细胞核。利用酵母双杂交实验证明了番茄DDB2与DDB1和CUL4之间的相互作用关系,推测DDB1蛋白作为DDB2与CUL4蛋白的桥梁形成CUL4-DDB1-DDB2复合体。     

猪传染性胃肠炎病毒非结构蛋白3a和3b融合表达及对细胞周期的影响

【目的】克隆及真核表达猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus ,TGEV）陕西分离株的3a和3b基因,研究表达蛋白在细胞中的分布及其对细胞周期的影响。【方法】利用软件Primer 5.0参照Genbank公布的序列设计两对分别针对TGEV非结构蛋白基因3a和3b的特异性引物。采用RT-PCR方法从TGEV 陕西分离株克隆3a和3b基因,再将其与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建真核表达质粒p3a-EGFP-N1和p3b-EGFP-N1。利用脂质体转染法将重组质粒转染猪小肠黏膜上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）,采用激光共聚焦显微镜检测转染细胞内融合蛋白的表达分布情况。通过RT-PCR检测细胞中目的基因的转录情况,Western blotting检测细胞中融合蛋白的表达情况。利用流式细胞仪检测表达蛋白对细胞周期的影响,采用实时荧光定量PCR检测融合蛋白的表达对内质网应激蛋白标志性分子GRP78和细胞周期蛋白Cyclin A的表达的影响,通过Western blotting试验检测细胞中蛋白表达后GRP78、Cyclin A和Cyclin B1表达量的变化情况。【结果】成功克隆出完整的TGEV陕西分离株的3a及3b基因,经过测序鉴定,3a基因的大小为213bp,3b基因的大小为732bp;经过与不同来源的TGEV毒株进行对比分析,3a基因的核苷酸序列与其他毒株同源性为97.4%-100%,氨基酸同源性为98.6%-100%;3b基因的核苷酸序列与其他毒株同源性为98.3%-99.9%,氨基酸同源性为100%。重组表达载体转染IEC细胞后,经Western blotting分析IEC分别表达出分子质量约为35kD的3a-GFP和54kD的3b-GFP的融合蛋白,与预期结果相一致。激光共聚焦显微镜观察到融合蛋白3a-GFP和3b-GFP在IEC细胞的细胞核和细胞质中均有表达,流式细胞仪分析TGEV非结构蛋白3b的表达能够使G2/M期的细胞增多,实时荧光定量PCR分析显示细胞周期蛋白Cyclin A的mRNA水平高于对照组细胞（IEC和IEC-GFP）,同时Western blotting分析结果显示表达3b蛋白的细胞中Cyclin A 蛋白水平表达量高于对照组,并且Cyclin B1的表达量低于对照组细胞,差异显著;TGEV非结构蛋白3a对细胞周期没有影响。实时荧光定量PCR分析结果显示,表达TGEV非结构蛋白3a的细胞中GRP78的mRNA水平高于对照组, Western blotting分析GRP78的蛋白水平高于对照组,差异显著,说明非结构蛋白3a可以使GRP78表达水平的上调;TGEV非结构蛋白3b对GRP78的表达没有影响。【结论】TGEV陕西株的非结构蛋白3a和3b在IEC细胞中成功表达,3a蛋白可以引起细胞内质网应激反应,3b蛋白通过使细胞周期蛋白Cyclin A表达上调并且使Cyclin B1表达下调引起细胞周期阻滞于G2/M期。     

感染异育银鲫补体组分C3·C4表达研究

[目的]了解补体组分在感染性鱼类疾病中的作用,为鱼类疾病的诊断和治疗提供参考。[方法]采用不同浓度(2×106、4×106CFU/ml)的嗜水气单胞菌感染异育银鲫,利用半定量RT-PCR技术检测感染不同时间后肝脏中补体组分C3和C4的表达量。[结果]感染后4、5 h时,异育银鲫肝脏中C3的表达量均显著高于对照组。在感染后4 h时,不同浓度组之间C3的表达量无显著差异。而在感染后5 h时,感染浓度1组(注射2×106 CFU/ml嗜水气单胞菌)中C3的表达量显著高于感染浓度2组(注射4×106 CFU/ml嗜水气单胞菌)。异育银鲫肝脏中C4的表达水平远低于C3。在感染后5 h时,感染浓度1组C4的表达量显著高于对照组,其余处理组与对照组均无显著差异。[结论]补体组分C3在鱼类免疫防御系统中具有非常重要的意义。