猪卵泡闭锁过程中颗粒细胞凋亡和Fas/FasL变化

为了揭示猪卵巢卵泡选择性闭锁机制,采用Real time PCR和HE染色方法,检测猪各阶段卵泡颗粒细胞中Fas和FasLmRNA表达和形态学变化;分析比较不同发育阶段卵泡中颗粒细胞Fas和FasLmRNA表达差异及细胞凋亡程度。结果表明,健康的大(5 mm)、中(3～5 mm)、小(3 mm)卵泡,早期闭锁的大、中、小卵泡以及晚期闭锁的大、中、小卵泡壁层颗粒细胞都有Fas和FasLmRNA表达。早期闭锁卵泡颗粒细胞Fas和FasLmRNA相对表达量高于健康卵泡与晚期闭锁卵泡。早期闭锁小卵泡FasLmRNA相对表达量与大、中、小健康卵泡相比均有显著差异(P0.05);状态相同的大、中、小卵泡间Fas与FasLmRNA相对表达量均无显著差异(P0.05);表明Fas/FasL系统在猪卵巢卵泡选择性闭锁过程中,对颗粒细胞凋亡具有重要的调节作用。     

发情间期注射PMSG对猪卵泡发育及颗粒细胞凋亡影响的研究

为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对猪卵泡发育和闭锁及颗粒细胞凋亡的影响 ,实验采用性成熟肥育母猪为实验材料 ,对在情期第 11d(发情当日为 0 d)注射 PMSG后 2 4 ,4 8,72和 96 h的猪卵巢表面各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例以及外周血浆中类固醇激素浓度等进行了研究。结果表明 ,注射 PMSG后 2 4 h卵巢表面卵泡总数、小卵泡 (直径 <3mm)数和中等卵泡 (直径 3～ 5 m m)数分别为 :5 9,32和 2 5 .5个 /卵巢 ,明显多于同期对照组 (情期第 12 d)猪的数量 ;注射 PMSG72和 96 h卵巢表面大卵泡 (直径≥ 5 m m)数量分别为 7和 6个 /卵巢 ,明显多于对照组 (情期第 14和第 15 d) ,而此时卵汇总数却明显低于对照组。大卵泡颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后与对照组相比无显著差异 ,而小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后 2 4 h(6 .4 %和 7.8% )显著 (P<0 .0 5 )降低 ;中等卵泡颗粒细胞凋亡比例到 PMSG后 72 h回升至与对照组无显著差异 ,小卵泡颗粒细胞凋亡比例于 PMSG后 96 h回升至与对照组无显著差异。血清中雌二醇浓度在 PMSG注射后明显升高 ,在 PMSG注射后72 h时达最高值 (72 .3pg· m L- 1 ) ,显著高于对照组 (10 .8pg· m L- 1 )。孕酮的浓度在 PMSG注射后无明显变化。以上结果表明 ,在体内条     

猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化

[目的]研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考.[方法]从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组(＞5 mm)、中卵泡组(3～5 mm)和小卵泡组(＜3 mm)3组,制作完整有腔卵泡的...     

母猪健康和闭锁卵巢有腔卵泡的转录组测序比较分析

[目的]本文旨在通过对猪卵泡颗粒细胞进行转录组测序了解卵泡闭锁相关基因的表达谱并确定闭锁卵泡的潜在分子标记物。[方法]通过HE染色对卵泡及颗粒细胞进行形态学观察;抽取健康卵泡和晚期闭锁卵泡的颗粒细胞,进行转录组测序分析,最后采用实时荧光定量PCR检测差异表达基因的相对表达水平。[结果]转录组数据表明,与闭锁卵泡颗粒细胞相比,健康卵泡颗粒细胞中有771个差异基因,其中204个为上调基因,567个为下调基因;GO功能富集分析显示,差异基因显著富集到320个生物进程中,主要与细胞增殖和血管生成有关;KEGG通路分析表明,差异基因富集到48条信号通路中,主要参与氧化应激、激素合成和能量代谢等方面的信号通路;实时荧光定量PCR结果表明,CYP1B1、PDE10A、NUPR1、NOX4、LDLR、LHCGR和CYP19A1表达趋势与测序结果一致。[结论]氧化应激、血管生成、能量代谢以及激素合成等多方面因素综合调控猪卵巢中颗粒细胞的凋亡,继而影响卵泡闭锁现象的产生。     

鹅卵泡颗粒细胞凋亡与卵黄E2和P4水平关系的研究

以产蛋期扬州鹅为试验素材,取排卵前F1-F4卵泡、最小排卵前卵泡(SPF)、小黄卵泡(SYF)和闭锁卵泡,利用HE染色、透射电镜和流式细胞术分析鹅卵泡颗粒细胞凋亡,采用放射免疫分析法检测各级卵泡的卵黄雌激素(E2)和孕激素(P4)水平,探讨鹅卵泡颗粒细胞凋亡与卵黄E2和P4水平的关系.结果表明:①闭锁卵泡的颗粒细胞表现出明显的凋亡特征;②在卵泡选择过程中,E2水平显著上升,P4水平略有上升;③卵泡从排卵前阶段逐渐发育至F1卵泡的过程中,E2水平逐渐降低,而P4水平急剧升高;④闭锁卵泡的卵黄E2水平极显著低于各级正常卵泡,而P4水平极显著高于除F1卵泡外的其他各级卵泡;⑤正常卵泡的颗粒细胞凋亡指数与E2水平呈正相关(r=0.514),与P4水平呈负相关(r=-0.744).     

哺乳动物颗粒细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是雌性生殖系发育过程中的一个重要组成部分,在哺乳动物中,超过99%的雌性生殖细胞都会在卵子发生的不同阶段发生凋亡.目前,在颗粒细胞凋亡过程中至少发现5个配体受体系统:TNFa和TNF受体系统,Fas配体受体系统,TRAIL和TRAIL受体系统,APO-3配体受体系统,PFG-5配体受体系统,而且发现颗粒细胞凋亡属于依赖于线粒体凋亡信号传导凋亡途径.     

circ-13267通过let-7-19/ERBB4通路调控蛋鸭卵泡颗粒细胞凋亡

[背景]蛋鸭卵泡发育是决定其产蛋性能的关键因素.已有研究表明,禽类卵泡发育是极为复杂的生物学过程,目前人们已对家禽的卵泡发育模式有了一定的了解,但作为决定产蛋量的重要因素,卵泡发育的具体调控机理仍需进一步深入研究.颗粒细胞是卵泡中主要的功能细胞,可调控卵泡膜细胞和卵母细胞的生长、分化和成熟,同时也精确的调控卵泡的生长发...     

猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因表达量对卵泡闭锁的影响

SIRT1是一种二氢尿嘧啶脱氢酶(NAD)依赖的具有去乙酰化酶活性的多功能转录调节因子.本研究分析不同闭锁阶段卵泡颗粒细胞中SIRT1基因表达规律性,探讨SIRT1基因表达量与卵泡发育的关系.采用免疫组织化学方法分析SIRT1蛋白表达定位,qRT-PCR方法分析SIRT1 mRNA表达量.结果表明,SIRT1蛋白在晚期闭锁卵泡中最高,健康卵泡中最低,SIRT1 mRNA表达规律性与SIRT1蛋白表达规律性一致.综合分析,颗粒细胞中SIRT1基因随着卵泡的闭锁表达量逐渐升高,SIRT1表达与猪卵巢卵泡发育存在一定相关性.     

猪不同程度闭锁卵泡判定方法的比较研究

以猪卵泡为试验材料,在总结各种分类方法的同时,通过具体的试验分析了几种可持续跟踪研究的分类方法(外观形态、颗粒细胞密度、孕酮(P4)和雌二醇(E2)的比值)间的关系。经过对239个卵泡的分离和检测,以及对在不同闭锁阶段各20个共60个在各个判定指标上都达到一致的卵泡进行分析和比较,检验各判定指标与猪卵泡闭锁的关系,形成了合理的综合判定标准:在外观判定基础上将颗粒细胞数小于2 500μL-1、2 500～10 000μL-1、大于10 000μL-1分别定义为健康、早期闭锁及晚期闭锁卵泡,而相应的P4/E2值分别为小于5、5～20及大于20。     

猪卵泡期中等卵泡发育和闭锁的相关基因表达及激素水平分析

研究猪卵泡期内有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞自噬与凋亡、卵泡内调控因子、类固醇激素及相关酶类的变化,为提高排卵前卵泡发育数量提供理论依据。从猪卵泡期卵巢中分离3~5 mm有腔卵泡,根据发育变化分为健康卵泡、早期闭锁和晚期闭锁3类,应用HE染色观察内部形态结构变化,应用酶免法检测卵泡液中雌二醇(E2)和孕酮(P4)的浓度变化,采用Real-time PCR方法检测自噬相关基因(Becline、LC3B、ATG3、ATG5、ATG7)、凋亡相关基因(Caspase-3、Bim、Bcl-2和Bax)、类固醇合成酶基因(CYP11A1、3βHSD、CYP17A1、CYP19A3)、激素受体和卵泡内关键调控基因(FSHR、ERα、CART、SMAD4)在不同类型卵泡中的表达变化。结果表明,健康卵泡中颗粒细胞层完整,有少量凋亡细胞,早期和晚期闭锁卵泡中颗粒细胞层分散,且凋亡细胞明显增多。早期和晚期闭锁卵泡中P4/E2显著高于健康卵泡,自噬和凋亡相关基因的表达水平在早期和晚期闭锁的卵泡中显著高于健康卵泡,类固醇合成酶基因CYP11A1和3βHSD的表达量在早期和晚期闭锁卵泡中显著高于健康卵泡,CYP17A1、CYP19A3、FSHR、ERα和SMAD4的表达量在早期和晚期闭锁卵泡中显著低于健康卵泡,而CART的表达量则呈现相反的趋势。由此可见,颗粒细胞自噬和凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,而类固醇合成酶基因CYP11A1和3βHSD通过提高卵泡液中孕酮的水平加速了卵泡闭锁的进程。     

Morphological and Hormonal Identification of Porcine Atretic Follicles and Relationship Analysis of Hormone Receptor Levels During Granulosa Cell Apoptosis In vivo

Recent reports have demonstrated that follicular atresia is initiated or caused by granulosa cell apoptosis followed by theca cell degeneration in mammalian ovaries, but the mechanism of follicular atresia is still to be elucidated. Therefore, our present study was designed to examine our hypothesis that the changes of follicular microenvironment induce the granulosa cell apoptosis during pocrine follicular atresia in vivo. We firstly isolated intact porcine antral follicles and identified them into three groups, healthy follicles （HF）, early atretic follicles （EAF） and progressed atretic follicles （PAF） through morphology and histology. To further confirm their status, we detected hormone levels in follicular fluids and the expression level of apoptosis gene Bax in granulosa cells. The rate of progesterone （P） and estradiol （E2） was increased with the expression of Bax, indicating hormone can be used as a marker of granulosa cell apoptosis or follicular atresia. Finally, we analyzed the expression level of hormone receptor genes in granulosa cells and their relationship with follicular atresia. In PAF, the expression of Progesterone receptor （PGR） was increased significantly while estradiol receptor （ER） had no notable changes, which suggesting the increased-PGR accelerated the effect of P-stimulated granulosa cell apoptosis. The dramatic increasing of androgen receptor （AR） expression in PAF and the obvious increase of tumor necrosis factor-u receptor （TNFR） in EAF indicated that there are different pathways regulating granulosa cell apoptosis during follicular atresia. Together, our results suggested that different pathways of granulosa cell apoptosis was induced by changing the follicular microenvironment during follicular atresia.     

绵羊卵泡颗粒细胞体外培养条件的优化

为了探讨绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养时FSH(Invitrogen)与胰岛素的最佳质量浓度,试验在无血清条件下培养绵羊卵泡颗粒细胞,并向其中加入不同质量浓度的FSH与胰岛素,体外培养7 d后测定细胞数目以及培养液内雌二醇浓度。结果表明,当培养液内FSH质量浓度为25 ng/mL、胰岛素质量浓度为100ng/mL时,颗粒细胞的数目最多;当FSH质量浓度为1 ng/mL、胰岛素质量浓度为10 ng/mL时,培养液内雌激素质量浓度最高。     

哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节

细胞凋亡是近几年细胞生物学研究的热点。卵巢中发生的生殖细胞减少、卵泡闭琐和黄体退化都与细胞凋亡密切相关。就上述三个过程中的细胞凋亡进行了概述 ,并简要介绍了新近发现的几种因素对卵巢细胞凋亡的调节。     

GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的影响

【目的】细胞自噬和凋亡存在着相互制约,p38MAPK信号通路作为细胞凋亡的主要调控通路之一,也对细胞自噬存在促进和抑制的双重作用。已有研究表明,促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)对细胞自噬与凋亡均有影响,但作用机制尚不明确。故探究GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞(pGCs)自噬与凋亡的影响及其机理,为解决母猪的产子率以及同期发情等问题提供参考。【方法】从猪卵巢中提取卵巢颗粒细胞,进行体外培养。1、探究GnIH对p38MAPK信号通路的最佳作用时间:按孵育GnIH时间梯度(0min、10 min、30 min、60 min、90 min)分组,用Western blot检测猪卵巢颗粒细胞p38与p-p38的蛋白表达量变化;2、验证GnIH对p38MAPK信号通路的影响:按(空白对照、GnIH、p38激活剂(U-46619)、U-46619+GnIH)分组,用Western blot检测p38与p-p38的蛋白表达量变化;3、探究不同浓度GnIH对自噬和凋亡的影响:按(空白对照、10-6 mol·L-1 GnIH...     

牛的卵泡颗粒细胞采集与培养

本试验培养了牛的颗粒细胞,并且进行了细胞的冷冻与复苏,建立了一套颗粒细胞的培养方法,为后期的牛体细胞核移植技术做准备.     

颗粒细胞或卵丘细胞提高小鼠未成熟卵母细胞恢复减数分裂能力的研究

本研究通过12～13d小鼠颗粒细胞或21d小鼠卵丘细胞与14d小鼠直径55～65μm的卵母细胞共培养7d,发现单独培养、与颗粒细胞共培养、与卵丘细胞共培养的直径分别为54.2±1.6μm、65.2±2.3μm和63.4±3.4μm。而且,共培养提高了卵母细胞GSH的表达量(p<0.05)。在与颗粒细胞共培养7d后,11.1%(27/254)的卵母细胞能完成第一次减数分裂达到MII期。说明了小鼠颗粒细胞或卵丘细胞能够促进未成熟卵母细胞的发育及减数分裂的恢复,为研究哺育动物卵母细胞的发育调控提供了依据。