不同胎牛血清对动物细胞体外培养的影响

本研究针对血清在细胞库构建中的基础性作用,以中国农业科学院北京畜牧兽医研究所的20枚京星矮脚鸡的7日龄蛋胚为试验材料,利用2 种不同的胎牛血清,采用贴壁培养方法,对细胞进行培养、传代及冻存。观察细胞原代及传代后的生长个体数、生长瓶数,细胞形态、冻存前形态及细胞生长曲线。结果表明,不同血清对细胞培养有一定的影响,血清B培养的细胞各方面都优于血清A培养的细胞。本研究结果为细胞体外培养中的血清选择提供了依据。     

影响动物细胞体外培养因素

主要对影响动物细胞体外培养因素的研究进展及动物细胞培养的应用和研究前景进行概述,分析了当前制约动物体细胞培养发展的主要因素.     

样品保存液在猪口腔液检测中的应用

猪口腔液作为血清、鼻腔拭子和肛拭子的替代品,已被用来检测和监测包括非洲猪瘟病毒在内的多种传染病。由于口腔液样品自身的复杂性,使得口腔液样品中的病原微生物容易降解,导致检测结果的不准确。试验的目的是分析动物DNA病毒(PRV)和RNA病毒(PRRSV)在口腔液样品中的储运条件对病原核酸检测结果的影响。将PRV和PRRSV与猪口腔液样品混合制备参考品,样品保存液A、B、C和生理盐水,在保存温度为4℃,25℃和40℃,保存0 d,3 d,7 d时分别提取各样品核酸,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。当用生理盐水作为样品保存液时,病毒的检出量下降;3种商业化的样品保存液在4℃条件下对病毒核酸都有保护作用,样品检出量优于其他温度条件。口腔液样品储运条件优选使用样品保存液,并在低温条件下储运最佳。     

猪早期胚胎体外培养和保存研究进展

早期胚胎的体外培养和保存不仅是研究胚胎生物学的基础,而且也是胚胎移殖推广和应用的先决条件。目前,家兔、牛、绵羊和山羊胚胎的体外培养与冷冻保存技术已基本成功,但猪这方面的研究却不足。本文就猪早期胚胎的体外培养     

褪黑素对猪卵巢在不同时间和温度条件下保存后卵母细胞体外成熟的影响

本研究旨在探讨不同温度和时间保存猪卵巢后对猪卵母细胞体外成熟的影响,通过培养液中添加不同浓度褪黑素,探索褪黑素对卵母细胞体成熟的最佳浓度,为远距离运输卵巢最适温度和时间条件的研究提供理论依据,进而改善胚胎体外生产效率。本实验将卵巢分别在4、17、25、37℃保温杯内保存0、4、8、10 h,筛出最适温度与时间后,在卵母细胞体外培养液中分别添加10^-5、10^-7、10^-9 mol/L浓度褪黑素,体外成熟44 h,采用孤雌激活的方式发育为胚胎,统计极体排出率、卵裂率、囊胚率。结果显示：卵巢37℃保存10 h,4℃保存4 h后卵母细胞均未达到MII期;与37℃和4℃相比,17℃、25℃保存卵巢后卵母细胞成熟质量得到大幅度提升(P<0.01);卵巢在25℃随着保存时间的延长,卵母细胞成熟率无显著差异,囊胚率高于17℃(P<0.01),且25℃保存卵巢8 h与4 h囊胚率无显著差异;25℃保存8 h后培养液中添加褪黑素,发现卵母细胞发育能力不受损伤,添加10^-7 mol/L褪黑素对卵母细胞体外发育...     

不同培养条件对水貂毛囊体外培养的影响

旨在筛选较理想的水貂毛囊体外培养条件,建立水貂毛囊体外培养模型,从而为研究水貂毛囊生物学特性和生长调控机制奠定基础。在无菌条件下分离水貂初级毛囊,分别置于Williams E无血清培养基、Williams E血清+10%血清、DMEM无血清和DMEM血清+10%血清4种不同培养基中进行培养,观察毛囊最终长度及形态学变化,选出水貂毛囊体外培养的最适培养基;再将最适培养基中的毛囊置于6个不同的培养温度下进行培养,即29℃、31℃、33℃、35℃、37℃和39℃,选出最适温度。结果发现体外培养的水貂毛囊在Williams E无血清培养基中毛囊的最终生长长度显著高于其他处理组(P0.05),水貂毛囊生长速度随培养时间的增加显著减慢(P0.05);在31℃培养的毛囊生长速度显著高于其他组(P0.05),且毛囊形态较好。研究结果表明,水貂毛囊体外培养的适宜培养基为Williams E无血清培养基,适宜培养温度为31℃。     

不同保存条件对牛奶样品乳成分、体细胞数和尿素氮的影响

将6个添加了防腐剂的牛奶样品分成两份,一份保存于常温,一份保存于4℃,对常温条件下样品连续测定7d,冷藏条件下样品连续测定8d。结果发现:冷藏条件下牛奶的稳定性较好。检测脂肪、蛋白、乳糖指标时,如果常温保存,最好在4d之内测定完毕;如冷藏,可保存至少一周。检测体细胞数时,如果常温保存,最好在3d之内检测完毕,超过3d后体细胞数下降可达到10万/m L以上;如果冷藏,可以保存至少一周。对于乳尿素氮的测定,由于尿素氮指标不稳定,不论是常温或是冷藏最好都不要超过3d。     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10μg/mLFSH、1μg/mLE_2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10μg/mLFSH、10μg/ mLLH、1μg/mLE_2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%。卵母细胞培养<20h、20h、24h、28h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20h、24h、28h组与<20h组相比差异显著(P<0.05)。卵裂率20h、24h组(51.79%、58.16%)明显高于<20h组(38.24%)、28h组(36.98%)(P<0.05),但20h、24h组卵裂率差异不显著(P>0.05)。     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10 μg/mL FSH、1 μg/mL E2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH、1 μg/mL E2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P＜0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P＞0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%.卵母细胞培养＜20 h、20 h、24 h、28 h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20 h、24 h、28 h组与＜20 h组相比差异显著(P＜0.05).卵裂率20 h、24 h组(51.79%、58.16%)显著高于＜20 h组(38.24%)、28 h组(36.98%)(P＜0.05),但20 h、24 h组卵裂率差异不显著(P＞0.05).     

体外培养条件下不同植物油对脂肪酸合成的影响

采用体外批次培养技术,比较豆油、玉米油和葵花油在瘤胃中脂肪酸氢化及t11-C18:1累积规律。以微晶纤维素作培养底物,培养液中添加5mg植物油(豆油、玉米油和葵花油),培养时间点为2、4、8、16和24h,测试每个时间点培养液中PUFA含量。3种油培养液脂肪酸含量结果比较:大豆油能显著提高培养液中C18:0和t11-C18:1浓度(P0.05),玉米油能显著提高培养液中c9,c12-C18:2含量(P0.05),但3种植物油培养液中c9-C18:1含量无显著性差异(P0.05)。     

鸵鸟种质资源保存中的体细胞培养

本研究利用皮肤植块法建立了鸵鸟胚胎成纤维细胞 ,并进行了传代、冻存、复苏和染色体核型分析实验。传代实验和染色体核型分析实验表明 ,鸵鸟胚胎成纤维细胞系可在体外存活 7～ 8代 ,且保持核型正常 ,而且 ,细胞冻存和复苏对核型也没有显著影响 ,从而证明利用体外培养的体细胞是进行保种可行的。     

鹿茸干细胞体外培养技术的研究

利用消化酶消化法,用DMEM培养基对鹿茸干细胞进行了体外培养,分别从原代培养、传代、冻存、以及复苏等几个环节进行了试验。摸索鹿茸干细胞合适的体外培养条件,为鹿茸的各项相关研究打基础。结果表明,用透明质酸酶和胶原酶对组织样进行消化,然后用10%DMEM培养基进行培养细胞生长效果较好。适宜培养条件是37℃、5%CO2最大饱和湿度。     

奶牛子宫内膜细胞体外培养及应用研究概况

子宫内膜细胞体外培养技术在研究动物子宫内膜生理功能、繁殖障碍疾病机制及治疗药物筛选等过程中具有重要的作用和意义。论文就国内外有关奶牛子宫内膜细胞体外培养技术中常用的分离、纯化和鉴定等方法以及该细胞体外模型相关应用进行综述,为探索简便、高效的奶牛子宫内膜细胞体外培养方法及国内有关奶牛子宫内膜生理病理的分子细胞学研究提供参考。     

S1640细胞培养基培养效果观察

用从废弃猪肉里提取的复合氨基酸配制的S1640细胞培养基,进行了淋巴细胞和组织培养,并与从国外进口的RPMI1640和国产1640细胞培养基作了比较.细胞遗传学指标检测的结果表明,S1640和日本、美国RPMI1640细胞培养基的细胞培养结果基本一样,而与国产干粉1640存在显著性差异,比国产干粉1640的效果好.     

Research Progress on Technology of Fed-batch in Animal Cell Culture

Nowadays, fed-batch culture becomes the predominant mode of the large-scale animal cell culture process.It is widely used in the production of biological products, and promotes the development of the modem biological industry.In the process of culture, the cells should be provided with nutrient for its metabolism and products synthesis.The by-produces of the cells should also be controlled to relief the contradiction between nutrient consumption and by-produces accumulation.The advantage of fed-batch culture is drawn forth from analyzing the characteristics.In this paper, we reviewed the cell metabolism coupled with gene regulation, the optimization of culture process and control strategies linked with on-line monitor in the fed-batch culture process.On the basis of above-mentioned survey, the existent problems and prospects for animal cell cultivation were discussed.     

不同培养体系对牛胚胎体外发育的影响

采用离子霉素和6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)对牛体外成熟卵母细胞进行联合激活,激活后采用不同的培养体系进行体外培养,观察不同的培养液对牛孤雌激活胚体外发育能力的影响。3种培养体系分别为:A(0~48 h:CR1aa+3 mg/mL BSA;48 h~7 d:CR1aa+10%FBS),B(连续7 d均为SOFaa+3 mg/mL BSA),C(0~5 d:SOFaa+3 mg/mL BSA;6~7 d:SOFaa+10%FBS)。结果表明:3种培养液对卵裂率没有显著性影响,分别为87.22%,94.33%和91.30%,但囊胚发育率存在显著性差异,以A效果最好,其囊胚发育率为25.56%;C次之,囊胚发育率为11.80%;B最低,囊胚发育率为3.55%。之后选择最佳的培养液进行体外受精实验,结果表明CR1aa可用做牛胚胎体外生产的培养液。     

动物细胞流加培养工艺研究进展

流加培养技术是动物细胞大规模生产中主流培养技术,被广泛应用于生物制品的生产,推动了生物技术产业的发展。流加培养过程中,需合理地向细胞持续提供所需营养物质,以满足其生长代谢和产物合成所需,控制代谢副产物的积累,缓解营养物耗竭和代谢副产物积累之间的矛盾。通过对流加培养的特性分析引出其优势,从培养过程中细胞代谢及基因调控、培养工艺的优化及流加过程的检测与控制等方面进行了阐述,最后提出了现如今流加培养技术存在的问题并进行了展望。     

高精料条件下酵母培养物对混合瘤胃微生物体外发酵的影响

采用山羊瘤胃液的体外批次培养研究了酵母培养物对混合瘤胃微生物体外发酵的影响。发酵底物精粗比为7:3,酵母培养物添加量为0、0.75 g/L1、.5 g/L2、.25 g/L。结果表明,发酵各时间点,各处理组的pH值较对照组均显著降低(P<0.05)。与对照组相比,发酵24 h、36 h4、8 h时,各处理组氨氮浓度显著降低(P<0.05),2.25 g/L处理组的TVFA浓度显著升高(P<0.05)。各时间点,三个处理组的乙酸浓度与对照组相比差异均不显著,而发酵24 h4、8 h时,三个处理组的丙酸浓度均高于对照组(P<0.05)。发酵24 h、48 h时,1.50 g/L处理组的乙丙比较对照组显著降低(P<0.05)。在整个发酵期内,1.50 g/L、2.25 g/L处理组的累积产气量均显著高于对照组(P<0.05),各组干物质消失率无显著差异(P>0.05)。结果显示,酵母培养物能够显著提高瘤胃VFA浓度,降低乙酸/丙酸比例,改变瘤胃发酵类型。     

山羊卵母细胞体外培养体系及冻存后体外培养的研究

随着哺乳动物胚胎工程技术的深入研究和商业化胚胎移植技术的快速发展,对卵母细胞的需求量急剧增加。而冷冻的卵母细胞可为胚胎工程技术研究提供方便、丰富的材料来源。试验以屠宰场云岭黑山羊卵巢卵母细胞为实验材料,研究冷冻后的山羊卵母细胞体外培养体系。结果表明,采用传统成熟培养液（OM＋10%FBS）与在其中添加1%ITS（OM＋10%FBS＋1%ITS）对卵母细胞培养成熟率无显著差异（71.6%vs 76.2%）,而孤雌激活的卵裂率差异显著（60.5%vs 71.5%）。用优化的卵母细胞成熟体系培养解冻后的GV期COCs,成熟率31.5%;用添加有ITS和EGF的胚胎培养液培养解冻后GV和MII期孤雌激活的卵母细胞,其卵裂率分别为35.6%、58.4%,差异极显著（P〈0.01）。