不同保存条件对绵羊卵巢组织卵泡存活的影响

研究旨在通过组织学方法评估卵巢保存形式、温度、时间、保存液对绵羊卵巢组织短期保存以及培养后卵泡存活的影响。结果表明:碎块或整个卵巢组织39℃保存6 h或12 h后,正常卵泡比例与新鲜组织和其他组比较显著下降(P0.05)。经过6 d的组织培养后,在生理盐水中4、20℃保存6、12 h和39℃保存2 h以及在MEM中39℃保存2 h的组织碎块中正常卵泡比例显著低于整个卵巢保存后组织中正常卵泡比例(P0.05)。在MEM中4℃保存6 h或12 h,培养后卵泡存活率显著高于相同条件保存于生理盐水中的组织(P0.05)。此外保存12 h培养后正常卵泡比例显著低于保存2 h处理组(P0.05)。表明在生理盐水和MEM中整个卵巢4、20℃保存2~6 h,或者卵巢碎块20℃保存在MEM中2~6 h都可以用于卵巢体外培养的研究。     

温度与稀释液pH对猪精液常温保存效果的影响

 为提高猪精液常温保存的效果,研究不同温度和稀释液pH对猪精液常温保存效果的影响。结果表明：（1）当精子活力分别为50％和30％时,配方Ⅰ与Ⅱ稀释液保存的精液,在温度为15~20 ℃条件下的精子存活时间均显著高于21~25 ℃（P<0.05）;在pH为6.5~6.9条件下的精子存活时间均显著高于6.0~6.4（P<0.05）;（2）精子顶体染色结果表明,适宜温度与pH条件下,精液保存48 h后,顶体完整率达到96%以上。研究结果表明,猪精液常温保存适宜温度为15~20 ℃,适宜PH为6.5~6.9。     

褪黑素对猪卵巢在不同时间和温度条件下保存后卵母细胞体外成熟的影响

本研究旨在探讨不同温度和时间保存猪卵巢后对猪卵母细胞体外成熟的影响,通过培养液中添加不同浓度褪黑素,探索褪黑素对卵母细胞体成熟的最佳浓度,为远距离运输卵巢最适温度和时间条件的研究提供理论依据,进而改善胚胎体外生产效率。本实验将卵巢分别在4、17、25、37℃保温杯内保存0、4、8、10 h,筛出最适温度与时间后,在卵母细胞体外培养液中分别添加10^-5、10^-7、10^-9 mol/L浓度褪黑素,体外成熟44 h,采用孤雌激活的方式发育为胚胎,统计极体排出率、卵裂率、囊胚率。结果显示：卵巢37℃保存10 h,4℃保存4 h后卵母细胞均未达到MII期;与37℃和4℃相比,17℃、25℃保存卵巢后卵母细胞成熟质量得到大幅度提升(P<0.01);卵巢在25℃随着保存时间的延长,卵母细胞成熟率无显著差异,囊胚率高于17℃(P<0.01),且25℃保存卵巢8 h与4 h囊胚率无显著差异;25℃保存8 h后培养液中添加褪黑素,发现卵母细胞发育能力不受损伤,添加10^-7 mol/L褪黑素对卵母细胞体外发育...     

粪便保存条件、时间对鸡球虫卵囊活力的影响实验

为探讨在不同温度条件下粪便保存不同时间对球虫卵囊成熟力的影响,本实验将含有球虫卵囊的粪便在-20℃、4℃、20℃、28℃分别保存0 h、24 h、48 h、72 h,通过观察卵囊的孢子化率确定最佳保存条件。结果表明:相同保存温度条件下,保存0 h、24 h、48 h、72 h的E.tenella早熟耐药株卵囊的孢子化率依次降低。-20℃和28℃时孢子化率均未达到80%;在4℃时粪便保存24 h的孢子化率达到80%以上,保存48h及以上时孢子化率极显著(P0.01)低于保存24 h的孢子化率;在20℃时的孢子化率均达到80%以上。     

粪便保存条件、时间对鸡球虫卯囊活力的影响实验

为探讨在不同温度条件下粪便保存不同时间对球虫卵囊成熟力的影响，本实验将含有球虫卵囊的粪便在．20℃、4℃、20℃、28℃分别保存0h、24h、48h、72h，通过观察卵囊的孢子化率确定最佳保存条件。结果表明：相同保存温度条件下，保存0h、24h、48h、72h的E．tenella早熟耐药株卵囊的孢子化率依次降低。-20℃和28℃时孢子化率均未达到80％；在4℃时粪便保存24h的孢子化率达到80％以上，保存48h及以上时孢子化率极显著（P〈0．01）低于保存24h的孢子化率；在20℃时的孢子化率均达到80％以上。     

保存方法对牧草DNA提取效果的影响

为从野外采集的禾本科牧草样品中获得优质DNA,在有限的试验条件下找到最合适的样品保存方法。本研究在野外试验站采集了8种禾本科牧草,分别采用变色硅胶、-20℃、4℃、自然风干和45℃烘干等5种方法进行保存,保存一个月后进行DNA的提取。通过琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR以及DNA的浓度和纯度对比,对几种保存方法下保存的牧草样品中所提取DNA的效果和质量进行鉴别。此外,为了解样品中多糖和多酚含量对DNA提取效果的影响,本研究还对采集样品多糖和多酚含量与DNA浓度和纯度进行了相关性分析。结果显示变色硅胶的保存效果最佳,烘干的保存效果最差,其他3种保存方法对不同植物的保存效果不能确定。多糖和多酚含量与DNA的提取效果、提取质量无明显关系,与DNA的浓度和纯度也无显著相关性,二者不是影响本研究DNA提取效果的主要因素,本研究中DNA提取效果的差异性是由于保存方法的不同造成的。在野外试验采集禾本科牧草样品时,如需要获得优质的DNA进行深入的试验,用变色硅胶保存样品,是一种便捷、效果优越的保存方法。     

不同稀释液对藏獒精液保存效果的影响

比较了8种稀释液在藏獒精液冷冻保存和低、常温保存(5 ℃,10 ℃,15 ℃,20 ℃)的效果.结果表明:2号和8号稀释液在冷冻保存时效果最好,精子活力和顶体完整率分别达到0.40和49%,与对照组相比差异显著(P<0.05).在藏獒的低温、常温保存试验中,所有稀释液在15 ℃时保存时间最长,综合考虑,7号液保存效果最好;在15℃时精子平均存活时间为103 h,显著高于对照组和其它稀释液(P<0.05).     

布尔山羊精液保存条件的试验研究

本研究对不同条件下，用不同成分的黧液保存布尔山羊精液的效果进行了对比试验。试验证明，选用Ａ液（３０ｇ／Ｌ葡萄糖、１３ｇ／Ｌ柠醋酸钠和１ｇ／Ｌ乙二胺四乙酸钠），按５０ｍＬ／Ｌ加入贸黄，稀释布尔山羊精液，在常温（１５￣２１℃）和低温（４℃）条件下分别保存３０ｈ和９６ｈ，其活力分别为０．５０和０．５２，可完全满足输精要求；选用Ｂ液（５４ｇ／Ｌ葡萄糖和１０ｇ／Ｌ柠檬酸钠），进行细管冷冻保存布尔山羊精液，冻     

空肠弯曲菌保存方法的研究

本文研究了１５株不同菌株和同一菌株在不同保存温度和培养基中的保存效果，结果表明：用同一菌株作该菌保存方法研究缺乏整体代表性；在所试的两种冰冻温度中，以－２５℃极显著地优于－１０℃保存（Ｐ＜０．０１）。在－２５℃下冻融１次保存该菌是最佳保存条件，于Ｐ－基、ＦＭＰＧ和ＭＳＧ培养基中，菌株１００％存活的期限分别为１２个月以上、６～９个月间（ＦＭＰＧ和ＭＳＧ），菌株５０％存活的期限三者均在１２个月以上。     

不同稀释常温保存波尔山羊精液的效果

目前,国内外对波尔山羊精液常温保存的资料报道甚少.为了加快波尔山羊改良步伐,推广波尔山羊的统一供精,我们开展了波尔山羊精液的高倍稀释常温保存、冷冻技术的系列研究.波尔山羊精液常温保存的试验目的在于筛选组成简单,药品价廉易得,能够使波尔山羊精液在14～16℃的条件下使0.3级保存时数达到48 h的稀释液配方,现将试验结果报告如下.     

Effect of Preserving Condition of Porcine Ovaries on the Development of In Vitro Matured Oocytes

The effect of preservation condition of ovaries on the in vitro maturation of the porcine oocytes was studied. Cumulus‐oocyte complexes (COCs) were obtained from the ovaries preserved in Dulbecco’s phosphate buffered saline (PBS) solution at various temperatures for different time intervals, and cultured in M199 maturation medium. Matured oocytes were obtained from the ovaries preserved in PBS for 8 h and electrically activated. The activated oocytes were then cultured in NCSU23 embryo culture medium for 16 h to observe activation or 144 h to observe embryo development. It was found that the preservation temperature affected the maturation of porcine oocytes greatly. The effect was described as a compromise of the suppressions of autolysis at physiological temperature and frostbite because of low temperature. A preservation temperature of approximately 25°C showed the maximum maturation rate for a preservation time of 8 h. Preservation temperature also affected the activation and embryo development of porcine oocytes greatly, following a trend similar to the effect of preservation temperature on the maturation. Based on maturation rate, activation rate and cleavage rate, a preservation temperature of approximately 25°C would be optimum for a preservation time of 8 h.     

支原体检验用培养基的研究

水质和血清对比试验结果表明：以水质电导率低于0．5μs／cm、猪血清总蛋白不低于49g／L、胆固醇不高于1．66mmol／L为标准制备的改良Frey培养基和支原体培养基活菌滴度均达10^9CCU／mL。对滑液支原体GX11-T株及猪鼻支原体BTS-7株1—5代对数生长期培养物检测,均达10^9CCU／mL。改良Frey培养基与支原体培养基经反复冻融8次;或改良Frey培养基经37℃保存24h;支原体培养基37℃保存8h均不影响灵敏度。改良Frey培养基在鸡胚成纤维细胞及鸡胚尿囊液中最小检测量分别为4CCU／mL和2CCU／mL;支原体培养基在BHK：,细胞中最小检测量为8CCU／mL。改良Frey培养基和支原体培养基4℃有效期为1个月,-20℃为12个月。     

山羊类ES细胞的分离与培养

旨在优化并建立有利于山羊类ES细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法。本研究选择武汉市本地白山羊配种6～7 d后的胚胎,通过全胚培养法、酶消化与机械分离结合法分离山羊类ES细胞,并在不同的细胞饲养层中饲养、在培养基中添加不同的生长因子、采用不同的传代方法,比较不同培养条件对山羊类ES细胞生长和增殖的影响。通过碱性磷酸酶染色和免疫组化染色法鉴定ES细胞特异生物标记AKT、SSEA-1和Oct-4的表达,并将得到的山羊类ES细胞进行体外分化。结果表明,与小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibro-blast,MEF)和山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)相比,C2C12更有利于细胞的贴壁,但差异不显著(P>0.05);细胞传代时,在高浓度细胞因子LIF(Leukemia inhibitory factor)和SCF(Stemcell factor)中处理ICM(Inner cell mass),更有利于细胞传代(传至第8代);培养基中添加LIF和SCF的同时,添加肝素和胰岛素,更有利于细胞的传代(传至第9代);山羊类ES细胞中SSEA-1(...     

苜蓿褐斑病的离体叶接种研究

研究和鉴定苜蓿褐斑病抗病性的离体叶接种技术。结果表明,离体叶接种鉴定比传统的整株鉴定效率高,结果可靠。在0.3%水琼脂培养基中加入50μm/mL苯骈咪唑,即可达到最佳保绿效果。接种所需的适宜条件是,相对湿度接近100%,温度20℃,接种时间20h,无光照。培养所需的适宜条件是,生长箱内光照(光强度9000lux)和黑暗每12h交替一次,有光时22℃,无光时18℃。     

不同培养温度对嗜酸乳杆菌BL-A1生物学特性的影响

采用MRS培养基对嗜酸乳杆菌BL-A1菌株在30℃和37℃不同培养温度下的生长、产酸、耐盐、耐胆酸盐及培养物抗菌性等部分生物学特性进行了研究。结果表明,该菌在37℃培养时具有繁殖速度快、产酸能力强的特点,而在30℃培养时具有更强的耐盐、耐胆酸盐能力。两个不同温度培养下的嗜酸乳杆菌的代谢物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都具有很强的抑制作用。     

紫花斜茎黄芪腋芽茎尖组织培养和植株再生研究

通过对紫花斜茎黄芪 (Astragalusadsurgens)进行组织培养和植株再生 ,着重对培养基和培养条件等方面进行了筛选和研究 ,结果表明 ,紫花斜茎黄芪腋芽和茎尖作为外植体的组织培养和继代增殖培养 ,最适宜培养基为MS + 1mg/LBA + 0 .1mg/LNAA和MS + 0 .5mg/LBA + 0 .1mg/LNAA。培养温度 2 0～ 2 6℃ ,光照每天 10h ,光照强度 15 0 0Ix。生根培养最适宜的培养基为MS + 0 .1mg/LNAA ,培养温度 2 0～ 2 5℃ ,光照每天 10h ,光照强度仍为 15 0 0Ix。     

小尾寒羊精液保存技术研究

为了充分发挥种公羊的生产潜力,快速扩繁优良群体,本实验以取材方便的小尾寒羊为实验动物,对其精液采用室温、低温和细管法冷冻3种保存方法进行了研究。结果表明:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存小尾寒羊精子,显著优于室温(23±2)℃条件下的保存效果。其中采用II液低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于III液(72 h,0.30)I、V液(48 h,0.35)和I液(18 h,0.42)。而采用III液冷冻保存绵羊精液,其解冻后活率(0.532±0.004)极显著高于IV液(0.470±0.003)I、液(0.445±0.004)和II液(0.432±0.012)3种冷冻稀释液(P<0.01)。4种冷冻稀释液冷冻解冻后的精子,均能在室温下6 h内保持0.35以上的活率。     

Effects of temperature and handling conditions on lipid emulsion stability in veterinary parenteral nutrition admixtures during simulated intravenous administration

OBJECTIVE: To determine whether lipid particle coalescence develops in veterinary parenteral nutrition (PN) admixture preparations that are kept at room temperature (23 degrees C) for > 48 hours and whether that coalescence is prevented by admixture filtration, refrigeration, or agitation. SAMPLE POPULATION: 15 bags of veterinary PN solutions. PROCEDURES: Bags of a PN admixture preparation containing a lipid emulsion were suspended and maintained under different experimental conditions (3 bags/group) for 96 hours while admixtures were dispensed to simulate IV fluid administration (rate, 16 mL/h). Bags were kept static at 4 degrees C (refrigeration); kept at 23 degrees C (room temperature) and continuously agitated; kept at room temperature and agitated for 5 minutes every 4 hours; kept static at room temperature and filtered during delivery; or kept static at room temperature (control conditions). Admixture samples were collected at 0, 24, 48, 72, and 96 hours and examined via transmission electron microscopy to determine lipid particle diameters. At 96 hours, 2 samples were collected at a location distal to the filter from each bag in that group for bacterial culture. RESULTS: Distribution of lipid particle size in the control preparations and experimentally treated preparations did not differ significantly. A visible oil layer developed in continuously agitated preparations by 72 hours. Bacterial cultures of filtered samples yielded no growth. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: Data indicated that the veterinary PN admixtures kept static at 23 degrees C are suitable for use for at least 48 hours. Manipulations of PN admixtures appear unnecessary to prolong lipid particle stability, and continuous agitation may hasten lipid breakdown.     

Culture and morphologic features of small intestinal mucosal explants from weaned pigs

Small intestinal explants from weaned pigs were cultured under a variety of conditions. Explants maintained villus-to-crypt ratio between 1:1 and 1.5:1 for 48 hours. The mucosal epithelium remained well preserved and retained good cellular morphologic features, as determined by light and electron microscopy. Between 48 and 72 hours, considerable mucosal degeneration was evident. Best results were obtained when the explants were cultured on a rocking platform placed in an atmosphere of 95% O2 and 5% CO2, using supplemented RPMI 1640 cell culture medium.