食源性阪崎肠杆菌研究进展

<正>阪崎肠杆菌(Enterobacrer sakazakii)属肠杆菌科,是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性菌,一直以来被称为黄色阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),于1980年以日本细菌学家Riichi Sakazakii的名字命名。由于阪崎肠杆菌能引起严重的新生     

食源性阪崎肠杆菌研究进展

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）属肠杆菌科,是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性菌,一直以来被称为黄色阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）,于1980年以日本细菌学家Riichi Sakazakii的名字命名。由于阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和败血症,并且可能引起神经系统后遗症和死亡,近年来已经受到了研究者的广泛关注。目前,有关阪崎肠杆菌的污染来源还尚不清楚,有研究认为婴儿配方奶粉是新生儿阪崎肠杆菌感染的主要感染源。     

婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌的研究进展

阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽胞杆菌,能引起新生儿脑膜炎,致死性小肠结肠炎和败血症等疾病.婴幼儿配方奶粉中若含有阪崎肠杆菌,则会引起一系列的临床症状.婴儿在前六个月应采用母乳喂养来减少致病菌的危害.婴儿配方奶粉不是一种无菌制品,为了减少婴儿感染的风险,应该对婴幼儿配方奶粉进行正规的卫生学检测.本文综述了阪崎肠杆菌的特性和一些检测方法.     

一例南方大口鲶烂尾病病原阪崎肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

从患烂尾病南方大口鲶的肝脏和心脏中分离到1株优势菌株DKN01,经API 20NE系统鉴定结果为阪崎肠杆菌。2次人工感染试验结果,DKN01对试验鱼的致死率在60%以上,是南方大口鲶烂尾病病原菌。该菌对复达欣、菌必治等8种药物高度敏感,对青霉素G、复方新诺明等7种药物不敏感。     

乳粉中阪崎肠杆菌耐热性的研究

长期以来,在食用食品前进行热处理一直被认为是降低食品中食源性致病菌风险的一个重要手段,但是目前国内对阪崎肠杆菌方面的研究还较少。文中主要从阪崎肠杆菌的培养、分离纯化、耐热性方面着手,重点研究阪崎肠杆菌的热耐受情况,为在食用前能有效地进行热处理以降低该菌的感染风险奠定良好的试验基础,并能够带来极大的社会与经济效益。     

乳制品生产过程中阪崎肠杆菌的控制研究

通过对乳制品企业常用的清洗杀菌剂对阪崎肠杆菌处理效果的试验分析,对其耐酸碱性和耐热性实施了验证,从而确定了乳制品加工过程中的清洗杀菌方法,为婴幼儿乳制品企业控制阪崎肠杆菌提供了有效的方法。     

浅论阪崎肠杆菌的危害及其检测方法

阪崎肠杆菌属于肠杆菌科,它对所有年龄段的人都易感。本文就阪崎肠杆菌的来源、传播途径及其危害、最新的检测方法作以综述。并根据我国的实际情况提出了预防措施。     

快速检测奶粉中阪崎肠杆菌新型酶免疫传感器

为探求奶粉中阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii,E.sakazakii）更好的快速检测技术,将硫堇和辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体依次自组装到多壁碳纳米管/羧甲基壳聚糖-海藻酸钠修饰的丝网印刷碳电极上,制得一种阪崎肠杆菌酶免疫传感器。采用交流阻抗法和循环伏安法对不同修饰电极进行电化学特性表征测试,根据免疫电极CV还原峰电流在孵育前后的变化差值（ΔI）对阪崎肠杆菌进行检测。优化试验条件下,该方法对阪崎肠杆菌检测线性范围为103～10^9 CFU/mL,检出限为6.6×10^1 CFU/mL;且具有良好的特异性（非目标菌ΔI〈0.5μA）、准确性（与GB/T 4789.40-2010符合率为100%）、稳定性（免疫电极在4℃无菌环境下保存30d,响应电流仍能达到初始值的92.3%）和重现性（RSD=6.3%）。     

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检测方法试验研究

通过对阪崎肠杆菌的菌落形态、生理生化等生物学特性方面的试验,确定采用灭菌蒸馏水(DW)预增菌、肠杆菌增菌肉汤(EE)增菌、显色培养基琼脂[Xa-GlcA)分离、AP120E生理生化系统鉴定的方法,能准确判定出婴幼儿配方奶粉中是否含有阪崎肠杆菌.     

快速检测阪崎肠杆菌新型凝集技术研究

为建立新型快速检测阪崎肠杆菌(E.sakazakii)的技术,本研究采用有机活性染料与抗体共修饰二氧化硅活性微球制成单分散免疫彩色二氧化硅微球(Immune colored silica nanoparticles,ICSN),建立了快速的E.sakazakii新型凝集检测技术。扫描电镜检测显示,利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米微球(Colored silica nanoparticles,CSN)大小均匀(约70μm),分散程度好。通过ICSN凝集试验检测E.sakazakii结果表明,该新型凝集技术对目标菌的检测范围为6×103cfu/mL~6×109cfu/mL,其凝集结果清晰、直观、易于判别;重复性和稳定性好,而且具有良好的特异性和准确性。实验结果显示,采用ICSN建立的新型凝集技术具有灵敏、快速、稳定、简便、准确及低成本等优点,适用于快速检测E.sakazakii,并为其它病原性微生物快速检测方法的建立提供技术平台。     

16S rDNA在婴幼儿配方乳粉阪崎肠杆菌鉴定中的应用

选取近几年从婴幼儿配方乳粉生产过程环境及产品中收集、经国标GB/T 4789.40-2010检验和API20E鉴定为阪崎肠杆菌阳性的菌株16株,利用MicroSEQ 1D微生物鉴定系统进行16S rDNA基因测序分析,构建系统发育树,鉴定种属。结果显示,这16份经API20E鉴定为阪崎肠杆菌阳性的菌株,经16S rDNA基因测序证实,其中2份为梨形肠杆菌,1份为克氏柠檬酸杆菌,其余13份样品均为阪崎肠杆菌,且与数据库中标准菌株的同源性达到99 5%以上。16S rDNA基因测序方法在婴幼儿配方乳粉企业进行阪崎肠杆菌鉴定和溯源方面具有广阔的前景。     

灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立

In order to detect viable Enterobacter sakazakii in pasteurized milk,a new method was established by combination of propidium monoazide （PMA） and polymerase chain reaction （PCR）.PMA concentration and exposure time were optimized to find optimal conditions for distinguishing between dead and viable E.sakazakii. The results showed that to kill the viable E.sakazakii must be exposed to 100 ℃ for 20 min in water bath. The optimum light exposure time to intercalate the DNA of dead E.sakazakii and to photolyze the free PMA in solution was 15 min. The minimum concentration of PMA to completely inhibit the PCR amplication of dead bacterium was 5 μg/mL. The maximum concentration of PMA did not inhibit the PCR amplification of viable bacterium was 15 μg/mL. After PMA treatment,viable E.sakazakii in a mixture containing different proportions of dead and viable bacterium could be selectively detected by PCR,and the determination limit was 40 CFU/mL. In the pasteurized milk,the determination limit was 100 CFU/mL. This study laid a foundation for use of PMA-PCR to detect the E.sakazakii in the food.     

奶粉中阪崎肠杆菌在检测及控制方面的研究进展

阪崎肠杆菌是一种食源性的条件致病菌,婴幼儿若摄入了被该菌污染的奶粉,则可造成不可逆的致命伤害。本文主要综述了阪崎肠杆菌的生物化学特性以及其在检测和控制方面的研究进展。     

PCR荧光技术在阪崎肠杆菌检测中的应用

本文就婴幼儿配方奶粉中食源性致病菌阪崎肠杆菌的分类、来源、特性、致病性以及减少婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的措施进行了介绍和综述.着重介绍了阪崎肠杆菌国内外检测标准、技术和检测仪器;综述了国际通行的保证食品安全的荧光PCR食源菌检测标准、仪器和方法;论述了荧光PCR法检测阪崎肠杆菌的政策要求、技术标准、实验技术、检测步骤以及荧光PCR实验室建设要点.     

一种快速检测阪崎肠杆菌的新方法——免疫磁性分离荧光标记

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽胞杆菌。我国于2005年8月批准了阪崎肠杆菌检测的行业标准,此标准改进了美国FDA的推荐方法。本文论述了一种基于免疫磁珠磁性分离、免疫量子点荧光标记联合应用的检测方法,本方法可灵敏、快速、高特异性的检出乳制品中的阪崎肠杆菌。     

阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D_{450 nm}值及P/N值选择1：20000稀释的5C10作为包被抗体,1：40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。     

抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及初步应用

为制备抗阪崎肠杆菌(ES)脂多糖(LPS)抗原单克隆抗体(MAb)及建立双抗夹心ELISA检测方法,本研究以热灭活的Es(ATCC51329)菌体抗原作为免疫原,ES菌体结合LPS作为筛选抗原,采用杂交瘤细胞技术筛选获得9株稳定分泌抗ES LPS特异性MAb的杂交瘤细胞株.采用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测ES的双抗体夹心ELISA方法,该方法对ES ATCC51329具有良好的特异性,最低检测限可达103 cfu/mL,为食品中ES的检测提供特异性MAb及ELISA检测方法.     

广州市售婴儿配方乳粉阪崎肠杆菌污染情况调查

目的:了解广州市售婴儿配方乳粉阪崎肠杆菌的污染情况.方法:对市售1 601个批次的婴儿配方乳粉进行阪崎肠杆菌检验.结果:广州市售婴儿配方乳粉共有5个国产品牌检出阪崎肠杆菌,阪崎肠杆菌总体不及格率为0.56％.结论:GB 10765-2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》的实施加强了对婴儿配方乳粉阪崎肠杆菌污染的检验监管力度,生产企业应高度重视婴幼儿配方食品的安全隐患问题.     

紫花苜蓿种带阪崎克罗诺杆菌的分离鉴定及其致病性初步研究

采用稀释平板法从6种表面消毒的紫花苜蓿种子中分离和纯化出3株阪崎克罗诺杆菌疑似分离物。选取代表分离物1gF3室内条件下通过菌悬液(≈10⁹ cfu·mL^-1)浸种紫花苜蓿种子,皿内发芽;腹腔注射洁净级昆明小白鼠试验;测定阪崎克罗诺杆菌疑似分离物对紫花苜蓿和小鼠的致病性。结果表明,阪崎克罗诺杆菌疑似分离物对紫花苜蓿不致病;小鼠在接种分离物1gF3 12 h后病理特征显示化脓性脑炎、心肌水肿扩张,局部心肌纤维有断裂、肝脏局部坏死、急性脾炎、肺部急性弥散性出血以及肾脏弥散性血管内凝血等症状,1gF3对小鼠具有致病性。发病小鼠血液涂板分离到阪崎克罗诺杆菌疑似分离物TM2。结合表型特征和16S rDNA鉴定,确定分离物1gF3和TM2为阪崎克罗诺杆菌。在此基础上,测定了菌株1gF3的生物学特性,该菌对数生长期为24~36 h,之后衰退;干旱胁迫加重其生长量线性下降;菌株1gF3能在较宽温度(10~41 ℃)和pH (3~11)范围内生长;该菌不需盐生长,NaCl浓度上升该菌的生长量受到抑制;黑暗交替的光照有利其生长。研究材料为具有动物和植物跨域寄主特点的一类病原菌资源,研究结果对隐藏于植物或动物材料中跨域病原菌侵染传播特征及相关检疫防控提供了理论基础。     

紫花苜蓿种带阪崎克罗诺杆菌的分离鉴定及其致病性初步研究

采用稀释平板法从6种表面消毒的紫花苜蓿种子中分离和纯化出3株阪崎克罗诺杆菌疑似分离物。选取代表分离物1gF3室内条件下通过菌悬液(≈109 cfu·mL-1)浸种紫花苜蓿种子,皿内发芽;腹腔注射洁净级昆明小白鼠试验;测定阪崎克罗诺杆菌疑似分离物对紫花苜蓿和小鼠的致病性。结果表明,阪崎克罗诺杆菌疑似分离物对紫花苜蓿不致病;小鼠在接种分离物1gF3 12h后病理特征显示化脓性脑炎、心肌水肿扩张,局部心肌纤维有断裂、肝脏局部坏死、急性脾炎、肺部急性弥散性出血以及肾脏弥散性血管内凝血等症状,1gF3对小鼠具有致病性。发病小鼠血液涂板分离到阪崎克罗诺杆菌疑似分离物TM2。结合表型特征和16SrDNA鉴定,确定分离物1gF3和TM2为阪崎克罗诺杆菌。在此基础上,测定了菌株1gF3的生物学特性,该菌对数生长期为24~36h,之后衰退;干旱胁迫加重其生长量线性下降;菌株1gF3能在较宽温度(10~41℃)和pH(3~11)范围内生长;该菌不需盐生长,NaCl浓度上升该菌的生长量受到抑制;黑暗交替的光照有利其生长。研究材料为具有动物和植物跨域寄主特点的一类病原菌资源,研究结果对隐藏于植物或动物材料中跨域病原菌侵染传播特征及相关检疫防控提供了理论基础。