罗汉松内生真菌的抑菌活性研究

为了研究药用植物内生真菌的次生代谢产物是否具有抑菌活性,以96株罗汉松内生真菌为研究材料,将菌丝及其培养液经氯仿-甲醇抽提后,采用杯碟法测定了全部菌株的抑菌活性。罗汉松内生真菌中49%的菌株具有抑菌作用,其中菌株LHS18、LHS42、LHS67、LHS92和LHS93抽提物经100倍稀释后对金黄色葡萄球菌仍有强的抑菌作用,菌株LHS30抽提物的100倍稀释溶液对大肠杆菌的生长有强烈的抑制作用。对抑菌活性较强的6株菌根据其ITS序列相似性进行了分子鉴定。菌株LHS18和LHS42鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）,LHS92为四孢脉孢菌（Neurospora tetrasperma）,LHS30为丝枝霉（Aphanocladium sp.）,LHS67为拟茎点霉（Phomopsis liquidambari）,LHS93未能鉴定出种属。研究结果提示,罗汉松内生真菌中49%菌株具有抑菌活性,其中6株菌对动物和人类的病原菌有强列的抑制作用,是挖掘高效抑菌物质的重要资源。     

捕食线虫性真菌培养基筛选及优化

为了弄清少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的最佳条件生长条件,文章对从实验室中筛选出的一株具有高捕食能力的菌307进行了培养基、温度、p H三方面研究。结果表明该菌最优化的培养基为:06WSA,培养条件p H=7.0,温度25℃。     

甘草内生真菌分离及其抑菌活性初探

为了解药用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var.tritici）、枸杞黑果病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumeris）、黄瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani）5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）4种细菌作为供试指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。试验结果显示,从甘草根、茎、叶中分离出20株内生真菌,其中根部最多,占分离菌株总数的65.0%,其次为茎部,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2目2科5属,梭孢霉属为优势菌属,占分离菌株总数的70.0%;在分离的内生真菌中有15株菌对1种或1种以上供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的75.0%,19株菌对1种或1种以上供试细菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的95.0%;有7株内生真菌对枯草芽孢杆菌拮抗活性差异显著（P＜0.05）,有 8株内生真菌对金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,有3株内生真菌对大肠杆菌拮抗活性差异显著,有1株内生真菌对革兰氏阴性铜绿假单胞菌拮抗活性差异显著,其中菌株RLEFR015对番茄灰霉病菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR010对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR002对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌供试细菌拮抗活性差异显著;菌株RLEFR015、RLEFR002、RLEFR010均为梭孢霉属,为高活性菌株。甘草内生真菌具有多样性和抑菌活性,多数菌株对供试病原真菌和病原细菌具有拮抗活性,对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌拮抗活性较强,预示着甘草内生真菌具有重要的资源价值。     

牛心朴子内生真菌分离及其抑菌活性分析

为了解荒漠植物牛心朴子(Cynanchum komarovii)内生真菌多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法分离其内生真菌,并选择5种植物病原真菌和4种人体病原细菌作为指示菌测定抑菌活性。结果表明:分离的25株内生真菌以茎部最多,根部次之,叶部最少,经形态学初步鉴定归于2目3科11属,曲霉属(Aspergillus)为优势菌属;84%的分离菌株对2种以上病原真菌,以及60%的分离菌株对1种以上病原细菌有不同程度的拮抗作用,2株高活性菌株CKEFL003和CKEFS001对多种病原菌拮抗作用明显,均为曲霉属。牛心朴子内生真菌在根茎叶组织器官中数量分布存在差异,种群构成具有多样性特征,对植物和人体病原菌具有不同程度的拮抗作用,抑菌资源较为丰富,高活性菌株为曲霉属,抗菌谱较宽。     

醉马草-内生真菌共生体中生物碱的抑菌活性

本研究以Epichloё属内生真菌侵染(E+)和未被侵染(E-)的醉马草(Achnatherum inebrians)生物碱提取液为材料,测定其对麦角菌(Clavieps purpurea)、德氏霉(Drechslera erythrospila)、燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)、根腐离蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、新月弯孢(Curvularia lunata)、半裸镰孢(Fusarium semitectum)、腐皮镰孢(Fusarium solani)和细交链孢(Alternaria alternata)8种植物病原真菌菌落生长和孢子萌发的抑制率,明确醉马草生物碱提取液的抑菌活性。高效液相色谱(HPLC)检测结果发现,E+醉马草提取液中含有麦角新碱和麦角酰胺两种生物碱,其浓度分别为26.178和369.074 mg·kg-1,而E-醉马草提取液中不含这两种生物碱。不同浓度的E+和E-醉马草提取液对供试植物病原真菌的菌落繁殖和孢子萌发均具有不同程度的抑制作用,E+对真菌菌落生长的抑制率要大于E-,其中对腐皮镰孢菌落生长和孢子萌发的抑制率最大,分别达到63%和57%。生物碱提取液浓度与供试真菌孢子萌发抑制率呈显著正相关(P0.05)。内生真菌的侵染提高了醉马草提取液的抑菌活性,共生体中含有生物碱成分,具体的抑菌机制和机理有待后续研究。     

药用植物柽柳内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

为探明药用植物柽柳内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定其抑菌活性。结果显示,从柽柳不同组织器官中分离出18株内生真菌,茎部最多,根部次之,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2个目,3个科,7个属;有11株菌对2种或多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的61.1%,有8株内生真菌只对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,占分离菌株总数的44.4%;活性内生真菌菌株TCEFL001分别对枸杞黑果病菌、小麦全蚀病菌以及金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,属于组丝核菌属。药用植物柽柳具有较为丰富的内生真菌资源,其开发和利用值得进一步探究。     

猫爪草内生真菌的分离、鉴定及抑菌活性的初步研究

植物内生真菌是一类具有开发潜力的新型微生物资源。为了从药用植物猫爪草中分离有生物活性的内生真菌,试验采用常规组织块分离法分离内生真菌,形态学及分子鉴定结合进行菌株分类,圆纸片法和对峙培养法检测抑菌活性。结果表明:从栽培猫爪草的根、茎、叶中分离纯化获得23株内生真菌,形态学初步鉴定为7个属;检测到有8株内生真菌对病原细菌金黄色葡萄球菌和病原真菌核盘菌、灰葡萄孢菌都有抑制作用。同属镰刀菌(Fusarium sp.)的菌株R1、L6、L11,刺盘孢菌(Colletotrichum sp.)P2及链格孢菌(Alternaria sp.)L2菌株具有开发生物防治药物的潜力,值得进一步深入研究。     

响应面分析法优化蒲公英内生真菌培养基条件的研究

本研究对具有抗菌特性的蒲公英中内生真菌产抑菌物质的最适培养基进行优化。在摇瓶发酵条件下,以金黄色葡萄球菌为指示菌,先确定碳源、氮源、蒲公英汁单因素成分及最佳水平,再采用Box-Behnken和响应面分析法对培养基配方进行优化,确定最适培养基组成为:碳源(葡萄糖2.65%+豆油0.53%)、氮源(玉米粉0.10%)、蒲公英汁7.06%。蒲公英内生真菌抑金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达到了40.0mm,是优化前的2.43倍。     

野生型桑树内生细菌的多样性分析及ME0717菌株的抑菌活性测定

从多年生野生鲁桑的枝条中分离出190株内生细菌,并分析其多样性指数(H)、丰度(D)、均匀度(J),发现在不同发育时间的桑树枝条中,内生细菌的种类、数量和多样性指数明显不同,枝条发育时间越长,越不利于内生菌的生长,而1年生枝条最有利于内生细菌的生长。分离得到1株优势内生细菌,命名为ME0717。经培养性状观察、形态鉴定、染色反应等生化特性测定以及16S rDNA序列分析,鉴定ME0717为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。ME0717菌体和发酵液对桑炭疽病菌(Colletotrichum morifolium Hara.)、桑漆斑病菌(Myrothecium roridum Todeet Fr.)的菌丝生长和孢子萌发均有明显的抑制作用,随着培养时间的延长,菌株的发酵液对两种病原菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用增强。     

桑黄类真菌抑菌活性研究

药用真菌桑黄有显著的抗肿瘤活性,也具有良好的抑菌活性。桑黄类真菌涉及的种类繁多,丰富的桑黄类真菌资源和日益扩大的生产规模,利于桑黄类真菌抑菌物质开发利用。本文介绍了桑黄及其与形似真菌的关系,简述了桑黄类真菌抑菌活性的研究结果,以期为桑黄类真菌抑菌活性物质的开发利用提供参考。     

中国主要疯草内生真菌分离鉴定及其抑菌活性研究

探明中国西部草地主要疯草内生真菌的种类及其分布,并通过内生真菌次生代谢产物抑菌活性筛选,为疯草内生真菌次生代谢产物开发利用提供参考。将采自青海和内蒙古草地的小花棘豆、黄花棘豆、甘肃棘豆、急弯棘豆、兰花棘豆和变异黄芪,运用表面消毒法进行内生真菌分离纯化;采用形态学和结合rDNA-ITS序列分析技术种属鉴定,NJ法构建系统发育树并分析其亲缘关系;以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门菌为测试菌株,用纸片法进行抑菌活性筛选。结果从中国6种主要疯草中分离获得265株内生真菌,合并得到38株,30株分属12科19属,8株未确定科。其中镰刀菌属、链格孢属和拟青霉属是优势种群,分别占总菌株的16.98%、11.32%和9.81%;系统发育分析显示,38株内生真菌绝大部分具有较高亲缘关系,仅少数亲缘关系偏低,其亲缘关系的远近受疯草种类、部位及生态环境等多种因素的影响;抑菌试验结果表明,38株内生真菌有29株次生代谢产物至少对1种测试病原菌有抑菌活性,占总分离菌株的76.32%,其中有2株次生代谢产物对4种测试病原菌均有较强抑菌作用。中国西部草地疯草含有丰富的内生真菌,不同生态地域的疯草内生真菌分布存在空间差异性,其次生代谢产物中存在丰富的天然抑菌活性物质,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

弯曲杆菌中具有高抑菌活性乳酸菌的筛选

使用微生态制剂来替代抗生素用于动物疫病防制是未来的发展趋势,而乳酸菌是目前微生态制剂最主要的成分。试验旨在筛选弯曲杆菌中具有高抑菌活性并耐受动物胃肠道环境的乳酸菌。从广东不同地区采集家禽粪便样品,对分离的乳酸菌进行生化鉴定、PCR鉴定及16S rDNA测序。同时,对分离菌株进行鸡源空肠弯曲杆菌、鸭源空肠弯曲杆菌和鹅源结肠弯曲杆菌的抑菌试验,以及模拟胃肠道环境的耐酸、耐胆盐和耐胰蛋白酶试验。结果表明,唾液乳杆菌R3对不同禽源的弯曲杆菌都具有高抑菌活性和耐受能力。因此,唾液乳杆菌R3为开发防控家禽弯曲杆菌疾病的微生态制剂提供了候选株。     

疯草内生真菌FEL3生产SW培养基的最佳碳氮比优化

为探讨碳氮比对甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis)内生真菌FEL3产苦马豆素(Swainsonine,SW)的影响,利用单因素试验对最佳碳源和氮源进行了筛选。结果表明:蔗糖和蛋白胨分别是理想的碳源和氮源;采用中心组合设计(Central Composite Design,CCD)考察液体培养基中蔗糖和蛋白胨的比率对内生真菌FEL3产SW的影响,并利用Design-Expert 7.1.6软件模拟得到二次多项式回归方程的预测模型;当蔗糖为1.47 g·L^-1,蛋白胨为0.29 g·L^-1时,SW浓度达到最大值6.71×10^-4mol·L^-1。试验结果将为利用疯草内生真菌FEL3批量生产SW提供技术支持。     

吸水链霉菌BS-112菌株产生抗家蚕病原真菌活性物质的发酵培养基配方优化

为了开发利用吸水链霉菌BS-112菌株产生的抗真菌活性物质防治家蚕真菌病,在单因素试验基础上通过正交试验优化BS-112菌株分泌产生抗真菌活性物质的发酵培养基配方。优化后的最佳发酵培养基配方为:18.0g/L葡萄糖,12.0g/L玉米粉,35.0g/L黄豆饼粉,0.4g/LKH2PO4,0.8g/LMgSO4。优化发酵培养基配方后的菌株发酵液对家蚕病原绿僵菌的抗菌效价达到4916.85μg/mL,较基础培养基提高了3.08倍。分别以价格低廉的玉米粉和豆饼粉作为发酵培养基的缓效碳源和有机氮源,有利于该菌株在蚕用抗生素产业化开发的应用。     

变异黄芪内生真菌FEL1A菌株固体培养条件优化

对变异黄芪中分离得到的内生真菌FEL1A菌株进行了固体优化培养条件的探索,在不同温度、碳源、氮源,初始pH条件下,检测FEL1A的生长情况。结果表明,FEL1A生长的最适温度为20℃,初始pH为7.0;以燕麦片作为碳源时FEL1A生长最快,培养20 d后菌落大小为13.32 mm±0.77 mm;蛋白胨作为氮源时FEL1A生长最快,培养20 d后菌落增至18.14 mm±0.64 mm。     

嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans培养基的筛选

2000年新疆畜牧科学院从丹麦皇家农业和兽医大学引进了Duddingtonia flagrans菌株,经过3年多的研究,对该真菌进行了实验室驯化、基础培养、生物学特性和体内外捕杀新疆牛羊胃肠道线虫的效果检测。结果表明该真菌具有与国外研究一致的良好的生物防治效果。嗜线虫真菌D.flagrans经培养后产生大量的厚垣孢子能通过动物的胃肠道不被消化而随粪便一起排出体外,在适宜条件下该厚     

除臭抑菌微生物菌株的筛选与鉴定

为了减少宠物饲养过程产生的异味和臭气，获得高效的除臭抑菌微生物菌株，从泰安市5家宠物医院的宠物粪便收集箱和3处生活垃圾处理站分离筛选了6株具有除臭抑菌效果的菌株，其中CY01、CY02和CY03对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌作用，抑菌效果排序为CY01>CY02>CY03;CY04、CY06对氨气和硫化氢的清除率均超过了50%,CY05对氨气和硫化氢的清除率分别超过50%和40%。通过形态学观察、16Sr DNA和ITS基因序列分析，确定CY01与CY04为枯草芽孢杆菌，CY02、CY03、CY05和CY06分别为地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母和黑曲霉。这6株菌在宠物抑菌除臭领域具有潜在的应用价值。     

巨菌草诱导培养基的筛选及优化

巨菌草(Pennisetumsp.)属单子叶禾本科狼尾草属植物,可作为动物饲料和多种食用菌的培养基质,在中国及非洲广泛种植,然而不耐寒的特性限制了其推广应用。要克服其遗传缺陷,需借助转基因或体细胞杂交等技术,因此,必须建立巨菌草的组织培养体系。本研究以巨菌草幼茎为材料,研究了巨菌草外植体的消毒方式和2,4-D、IAA与NAA,细胞分裂素(6-BA和KT)的不同浓度及组合对愈伤组织诱导的影响。结果表明,用75%酒精擦拭剥离后的叶鞘,再用2%的次氯酸钠溶液消毒10 min就能达到理想的消毒目的。1.0~4.0 mg·L-1的2,4-D都可以诱导出愈伤组织,且各浓度间无显著差异(P0.05);0.2mg·L-1 IAA对愈伤组织诱导有较好的促进作用;不同细胞分裂素对愈伤组织诱导没有明显促进作用。巨菌草愈伤组织诱导的最佳培养基配方是MS+2,4-D(3.0mg·L-1)+IAA(0.2mg·L-1)。