沃尼妙林对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

为了研究预先服用沃尼妙林对急性肺损伤(ALI)的作用,试验采用脂多糖(LPS)诱导建立了小鼠炎症ALI模型;制备支气管肺泡灌洗液(BALF)以检测蛋白浓度、细胞因子水平以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;收集肺组织测定湿干重(W/D)比率、髓过氧化物酶(MPO)活性,观察组织学的变化。结果表明:预先服用沃尼妙林显著降低了肺组织的W/D比率、蛋白浓度和白细胞数,组织学分析表明减弱了组织损伤;沃尼妙林使BALF中SOD的水平显著升高,减弱了肺脏中MPO的活性,抑制了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)等炎性细胞因子的产生。说明了沃尼妙林对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用。     

SB203580对猪流感病毒诱导小鼠急性肺损伤中炎症因子的影响

为探讨SB203580对猪流感病毒(SIV)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)中炎症因子的影响,将180只6⁸周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成SIV感染组(感染组)、SIV感染+SB203580组(SB组)和对照组,于感染后2、4、6、8和14d,分别进行临床症状、肺脏病理组织学观察和肺组织中炎症因子测定。结果显示,感染组和SB组小鼠均表现明显的ALI症状,但SB组小鼠症状较轻,肺损伤程度明显低于感染组;感染组和SB组中炎症因子水平均高于对照组,SB组小鼠肺脏炎症因子水平较感染组降低。说明p38MAPK特异性抑制剂SB203580可以下调磷酸化p38MAPK的表达水平,降低炎症因子的表达,减轻ALI中肺组织的病理损伤。     

冷暴露对内毒素性急性肺损伤小鼠TLR4信号通路的影响

为了研究冷暴露对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤的影响及其与Toll样受体4(TLR4)信号通路的关系,本试验将40只健康BALB/c雄性小鼠,随机分为正常对照组(N组)、冷暴露组(C组)、LPS组(L组)和冷暴露+LPS组(C+L组),每组10只,其中L组和C+L组小鼠鼻滴LPS溶液[0.5 mg/(kg·bw)],N组和C组鼻滴等体积无菌PBS溶液,滴鼻后将N组和L组小鼠置于室温环境下,C组和C+L组小鼠置于(4±2)℃通风冷室中,6 h后采用BCA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度和白细胞数量;ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量;取肺组织称重,计算肺组织的湿干重比(W/D),苏木精-伊红(H.E.)染色法观察肺组织病理改变;Western blot法测定肺组织TLR4蛋白表达量。结果显示,与N组比较,C组总蛋白浓度、白细胞数量,TNF-α、IL-6含量,肺组织W/D及肺组织TLR4蛋白表达量各项指标均无明显变化,差异没有统计学意义(P>0.05);N组和C组肺组织H.E.染色结果均正常,没有明显的差别;与N组比较,L...     

孕酮对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14和MD2的影响

先分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经差速贴壁法纯化后,随机分为6组：空白对照组、0.5mg/L脂多糖（LPS）组、10-6 mol/L孕酮（P4）组、LPS＋10-5 mol/L P4组、LPS＋10-6 mol/L P4组、LPS＋10-7 mol/L P4组。各组在处理12、24h分别提取上清液,ELISA法测TNF-α和IL-1β的含量;各组在处理24h分别提取细胞总RNA,用RT-PCR法测TLR4、CD14、MD2mRNA的表达。结果显示,处理12、24h,0.5mg/L LPS组TNF-α和IL-1β的含量均极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4组与对照组差异不显著（P〉0.05）;LPS＋10-5 mol/L P4组极显著低于对照组（P〈0.01）;LPS＋10-6 mol/L P4组显著低于对照组（P〈0.05）;而LPS＋10-7 mol/L P4组TNF-α的表达差异不显著（P〉0.05）,IL-1β的表达差异显著（P〈0.05）。说明P4可降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,且呈剂量依赖关系。LPS单独处理,TLR4和CD14mRNA的表达极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4单独处理与对照组无显著差异（P〉0.05）;分别添加1-5、10-6、10-7 mol/L P4组均极显著降低LPS诱导TLR4和CD14mRNA的表达（P〈0.01）,而MD2mRNA的表达差异不显著（P〉0.05）。说明P4可极显著降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和CD14mRNA表达,但对MD2mRNA表达影响不显著。结果显示,P4能抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,此过程与细胞TLR4和CD14表达下降相关,而与MD2的表达无关。     

脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞先天性免疫反应

采取荷斯坦奶牛乳腺,进行体外分离培养,并纯化细胞。用不同质量浓度(0、1、10、100mg/L)的脂多糖刺激乳腺上皮细胞,采用MTT法检测脂多糖对细胞增殖的影响,半定量PCR检测10mg/L的LPS对乳腺上皮细胞TLR4、TLR2、CD14、MD-2四个基因在不同时间(0、2、6h)mRNA表达水平的差异。结果表明,高剂量(100mg/L)的LPS对乳腺上皮细胞的增殖产生明显影响;LPS刺激乳腺上皮细胞后,导致TLR4、CD14、MD-2mRNA表达迅速升高,而TLR2mRNA弱表达。说明TLR4、CD14、MD-2参与LPS的识别,同时也说明脂多糖刺激乳腺上皮细胞后,乳腺上皮细胞能够产生先天性免疫反应。     

Balb/c小鼠肺组织一氧化氮及一氧化氮合酶的动态变化

为探讨Balb/c小鼠正常生理状况下肺组织中一氧化氮自由基含量以及一氧化氮合酶活性的动态变化,采用电子自旋共振法直接测定了一氧化氮自由基含量,采用分光光度计法测定了一氧化氮合酶的活性.结果表明:在第3,6,7,12天Balb/c小鼠肺组织的一氧化氮自由基含量、一氧化氮合酶活性均无显著性差异(P＞0.05).说明生理状态下,Balb/c小鼠肺组织一氧化氮自由基的产生维持动态平衡.     

TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的影响

Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)是参与天然免疫的一类重要的模式识别受体,在天然免疫和获得性免疫反应过程中发挥着重要的作用。观察TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)mRNA表达的影响,探讨TLR2和TLR4受体在LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞过程中对TNF-αmRNA表达影响的机制。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光定量PCR技术检测了TLR2和TLR4受体封闭肽对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α基因表达的影响。结果显示,与LPS刺激组相比较,CP对照组TNF-α基因的表达量无显著性差异(P>0.05),TLR2和TLR4受体封闭肽作用组TNF-α基因和蛋白的相对表达量极显著性降低(P<0.01)。由此可知,TLR2和TLR4受体封闭肽对促炎性细胞因子TNF-α基因的表达存在抑制效果。     

TLR4信号分子在脂多糖诱导小鼠肝损伤过程中的变化

为了阐明LPS诱导小鼠肝损伤过程中TLR4信号分子的变化,本试验以昆明小鼠为研究对象,经腹腔注射LPS,从形态学和肝功能指标变化判定肝损伤模型的建立,利用RT-PCR法检测各组肝脏组织中TLR4、IL-10、TNFα的转录水平。结果表明,随着LPS作用时间的延长,肝脏组织病理变化明显,肝窦不同程度充血,炎性细胞浸润,肝细胞呈现点状、小片状或多灶性坏死;血液和肝脏中GPT和GOT的活性升高,升高幅度依赖LPS作用时间,提示成功建立了肝损伤模型;RT-PCR结果显示,LPS诱导肝组织TLR4、IL-10、TNFα表达增加,且具有时间依赖性,TLR4、IL-10在3h表达开始升高,12h达高峰,TNFα变化幅度不如TLR4、IL-10变化显著,提示TLR4、IL-10、TNFα的表达水平依赖于肝损伤程度。     

盐酸沃尼妙林预混剂对猪气喘病的临床疗效试验

进行了盐酸沃尼妙林预混剂对猪气喘病的疗效试验。结果显示:以盐酸沃尼妙林预混剂300 mg/kg和400 mg/kg两种剂量混饲给药,对猪气喘病均有显著效果。盐酸沃尼妙林预混剂可有效控制猪体内的肺炎支原体病原,促进肺炎支原体所致肺组织病变的好转,甚至临床治愈,从而改善气喘病猪的症状。     

LPS诱导下鹅TLR15及相关免疫因子的表达分析

为探究炎症反应中东北白鹅Toll样受体15(TLR15)的免疫功能及其组织表达特征,本研究采用荧光定量PCR方法,对LPS诱导下的东北白鹅TLR15及相关免疫因子在不同组织的转录水平进行分析;同时利用免疫组织化学技术,对TLR15在不同组织中的表达水平进行检测。结果显示,在LPS诱导下东北白鹅TLR15及其相关免疫因子(IFN-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6)的转录水平均高于对照组,其中TLR15、IFN-α和IFN-γ在法氏囊组织转录水平最高(p0.01),IL-6在胸腺中转录水平最高,表明在炎症反应中TLR15及其免疫因子在不同组织的转录水平存在一定的差异。免疫组织化学检测结果显示,与对照组比较,各实验组TLR15在法氏囊、脾脏和肝脏中的表达差异极显著(p0.01),在肺组织和肾组织中的表达差异显著(p0.05),表明在LPS诱导下,鹅TLR15基因的转录和翻译水平一致。本研究为东北白鹅TLR15在炎症反应中的免疫功能分析提供了参考依据。     

川射干提取物调节TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导的小鼠急性肺损伤的研究

为了探究川射干提取物对急性肺损伤的防治效果及其对TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响，试验将24只雌性Balb/c小鼠随机分为空白对照(CTR)组、模型(LPS)组、地塞米松(DEX)组及川射干提取物(ITR)组，每组6只。ITR组每只每天灌胃12.5 mg/mL川射干提取物0.2 mL,其他组灌胃等体积生理盐水，连续7 d。末次给药1 h后，LPS组、DEX组和ITR组每只小鼠腹腔注射1 mg/mL脂多糖0.2 mL造模，CTR组腹腔注射等体积生理盐水。DEX组于造模前1小时每只小鼠腹腔注射0.5 mg/mL地塞米松0.2 mL。造模6 h后采集血液，制备血清；处死各组小鼠，分别采集肺泡灌洗液(BALF)和肺脏，通过ELISA法检测血清和肺泡灌洗液中趋化因子1(CXCL1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和IL-10的含量；对肺脏组织进行H.E.染色，观察肺脏病理变化；通过Western-blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达情况。结果表明：与LPS组相比，ITR组血清和肺泡灌洗...     

脂多糖对小鼠子宫内膜Toll样受体4介导的炎性信号通路的影响

革兰阴性菌感染可引起子宫内膜炎,机体的Toll样受体4(TLR4)可接受革兰阴性菌的细胞壁主要成分脂多糖(LPS)的刺激引发一系列炎症反应。为了研究LPS对TLR4介导的炎性信号通路的影响,本试验以小鼠为模型,分别用不同浓度的LPS对小鼠进行在体子宫灌注和处理体外培养的子宫内膜上皮细胞系。组织学观察显示,灌注不同浓度LPS后子宫内膜组织中炎性细胞增多。通过RT-PCR对各组中TLR4和核转录因子κB(NF-κB)、IL-6的mRNA表达水平进行检测,发现LPS刺激能够增强TLR4和NF-κB、IL-6 mRNA表达,影响TLR4介导的炎性信号通路。     

Balb/c小鼠线粒体转录终止因子3基因克隆及其组织表达分析

旨在获得Balb/c小鼠线粒体转录终止因子3(MTERF3)基因cDNA的序列特征并进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律。应用RT-PCR技术克隆Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA编码区序列(CDS),采用MEGA6.0软件构建小鼠MTERF3基因系统进化树,并采用Northern blot、RT-qPCR和Western blot技术研究该基因在小鼠大脑、心、脾、肺、肾、肝、骨骼肌和睾丸等8种不同组织中的特异性表达规律。结果显示,Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA的CDS序列大小为1239bp,编码412个氨基酸。小鼠MTERF3基因与大鼠MTERF3基因同源性高达91.1%。MTERF3基因mRNA和蛋白质在Balb/c小鼠各组织中均有不同程度的表达。结果表明,成功克隆了Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA的完整编码区序列,并揭示了该基因在各组织器官的表达规律,为进一步研究MTERF3基因在实验动物体内的功能奠定了基础。     

盐酸沃尼妙林与猪鸡兔血浆蛋白结合率的检测和比较

本试验采用超滤法结合高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定沃尼妙林与猪、鸡和兔血浆蛋白结合率,并对血浆中不同浓度沃尼妙林的蛋白结合率进行比较。结果表明,建立的液相色谱-串联质谱联用法用于沃尼妙林生物样品的测定具有简便、灵敏与选择性高的特点。沃尼妙林具有较强的血浆蛋白结合率,其在猪、鸡和兔血浆中的平均蛋白结合率分别为84.4%±1.07%,87.5%±1.83%和86.6%±1.96%。沃尼妙林的血浆蛋白结合率在0.1~10μg/m L的考察浓度范围内无显著性差异,蛋白结合呈现非浓度依赖的特性。     

表达ETEC F41的干酪乳杆菌免疫小鼠后的黏膜免疫应答

将SPF级Balb/c小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠以pLA-F41/L.casei重组干酪乳杆菌滴鼻免疫,对照组用pLA/L.casei干酪乳杆菌滴鼻免疫,应用间接ELISA测定血清中特异性IgG抗体水平和鼻咽部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便中ETEC F41特异性SIgA抗体水平.分离并计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数目,利用免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平,观察重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答.结果表明重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答.     

漏芦通过TLR4/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应

为探讨漏芦醇提物（RUEE）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠乳腺上皮细胞（HC11细胞）的抗炎作用及机制,试验利用RUEE(80μg/mL)、LPS(1μg/mL)单独处理以及RUEE(80μg/mL)+LPS(1μg/mL)共处理HC11细胞,采用荧光定量PCR检测炎性细胞因子及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平,采用Western blotting检测核转录因子κB(NF-κB)通路关键因子的蛋白表达量。结果表明：LPS诱导可明显提高HC11细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达水平（P<0.05）;明显上调TLR4 mRNA表达及NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的磷酸化水平（P<0.05）。RUEE预处理可显著降低LPS诱导的HC11细胞TNF-α、COX-2、IL-6、IL-1β的mRNA表达（P<0.05）;显著下调TLR4 mRNA表达及NF-κB p65和IκBα的磷酸化水平（P<0.05）。由此可知漏芦醇提物可通过抑制TLR...     

槲皮素和乙酸龙脑酯对小鼠的保胎作用及IL-10和CD80~+/CD86~+细胞的影响

本文旨在研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠流产的保护作用及其对小鼠子宫IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+细胞数量的影响。试验选用LPS尾静脉注射(0.10μg/鼠),制造小鼠流产模型,于怀孕第4~7d分别口服不同保胎药物,检测各组(n=10)小鼠的流产率、胚胎吸收率、子宫组织IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+表达的变化。发现LPS诱导流产的小鼠IL-10含量降低,CD80+/CD86+比值升高,预先口服不同保胎药物后,不同程度的抑制了LPS的作用,其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显,并且IL-10含量显著升高,CD80+/CD86+比值显著降低,与LPS流产组比较均差异显著(P0.05)。这些结果表明,LPS诱导流产与机体IL-10和共刺激分子CD80+/CD86+有关。保胎中药成分槲皮素和乙酸龙脑酯有降低小鼠脾脏CD80+/CD86+比值,促进母胎界面Th2细胞因子IL-10分泌的作用。     

LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析

本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞受到产肠毒素大肠杆菌侵扰发生炎症反应的相关分子反应机理。结果发现,两种浓度的LPS均使得所检测的TLR4及其信号通路相关基因表达量上调,诱导后4~6h的表达量急速上升,且高浓度的LPS诱导处理后各基因表达量上调倍数明显高于低浓度LPS诱导时各基因表达量上调倍数,高浓度的LPS对机体肠道的刺激引起了更为强烈的免疫反应,使正常机体更快地产生炎症反应。由此推测,大肠杆菌侵染猪肠道后将释放LPS,TLR4作为LPS的受体,受LPS诱导其表达量上调,进而引起TLR4信号途径的信号传递,传递过程中由于MyD88的依赖机制,MyD88表达量上调相对稳定,再经过级联免疫放大效应,大量的促炎细胞因子释放,导致炎症及腹泻水肿病的产生。     

谷氨酰胺对急性肺损伤小鼠MUC5AC的调节及其对肺脏的保护作用

旨在探讨谷氨酰胺(GLN)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤小鼠黏蛋白MUC5AC表达的调节作用及其对肺损伤的保护作用。选用雌性ICR小鼠32只随机分成4组:正常对照组(PBS组)、谷氨酰胺组(GLN)、内毒素组(LPS)、谷氨酰胺+内毒素组(GLN+LPS)。采用气管滴注LPS的方法刺激小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,在滴注LPS12 h后采集肺组织进行湿干重比值,IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8、HSP70、MUC5AC的mRNA水平,IL-6、TNF-α含量以及HSP70、MUC5AC蛋白含量的测定,通过HE染色观察肺组织形态学变化。结果显示:与对照组相比,LPS组MUC5AC、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA表达量极显著升高,HSP70 mRNA表达量极显著降低;MUC5AC蛋白的表达量极显著增加,HSP70蛋白的表达量极显著降低;IL-6、TNF-α含量极显著升高,肺组织湿干比值极显著增加;肺泡破裂较严重,细支气管黏液分泌增加且可见杯状细胞部分脱落;与LPS组相比,GLN+LPS组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著降低,MUC5AC、IL-8 mRNA表达量显著降低,HSP70 mRNA表达量显著升高;MUC5AC蛋白的表达量显著减少,HSP70蛋白的表达量显著升高,IL-6、TNF-α含量极显著降低;肺组织湿干比值显著减少;部分肺泡破裂,杯状细胞排列整齐,细支气管黏液分泌量减少。结果表明:静脉注射谷氨酰胺能减少LPS诱导的小鼠肺组织中MUC5AC、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA和MUC5AC蛋白的表达,减少IL-6、TNF-α的含量,增加HSP70 mRNA和HSP70蛋白的表达,减轻肺组织损伤;谷氨酰胺可能通过增加HSP70的表达来对LPS诱导的急性肺损伤小鼠起到保护作用。     

气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价

为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pVAX1空载体组和PBS对照组。对小鼠采血并分离血清,用ELISA测定血清中的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平;第3次免疫2周后,用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4~+和CD8~+T细胞水平。结果表明,pVAX1-NanA核酸疫苗免疫Balb/c小鼠后,小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P0.01);CD4~+、CD8~+T细胞分析表明, pVAX1-NanA免疫组的CD4~+和CD8~+T细胞水平显著高于pVAX1组和PBS对照组(P0.05),pVAX1-NanA核酸疫苗组的CD4~+/CD8~+T细胞比值高于pVAX1空载体组与PBS对照组(P0.05),pVAX1空载体组和PBS对照组之间无显著差异(P0.05)。试验成功制备了pVAX1-NanA核酸疫苗,且pVAX1-NanA核酸疫苗可刺激Balb/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫。