生物酶法水解海鱼皮的研究

为了充分合理利用海鱼下脚料鱼皮,并减少环境污染,本实验改变传统的酸碱处理法,采用生物酶解法,将海鱼皮酶解成小分子肽,为制备胶原蛋白、明胶等产品做指导。选用蛋白酶作为酶解实验用酶制剂,主要有碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及其复合酶制剂,通过不同添加量比较常用指标,包括:水解度、酸溶蛋白、肽分子量的分布。结果表明,随着碱性蛋白酶添加量的增大,水解度、酸溶蛋白、肽分子量变化不明显;中性蛋白酶酶解几种指标中肽分子量分布有少许差异;木瓜蛋白酶酶解之后都是平均分子量≤1 000 Da的肽;复合酶制剂酶解之后分子量≤3 000 Da的肽占85%。本实验选取的四组酶制剂配方,其水解度都达到80%以上,碱性蛋白酶达到85%以上;酸溶蛋白的含量均在2.0%左右,差异不明显。相同成本条件下,从分子量分布来看,木瓜蛋白酶的效果最好,其次是碱性蛋白酶,再其次是中性蛋白酶,复合酶制剂效果最差。     

鸭血球短肽的优化制备及其特性研究

本试验旨在筛选水解效率高且脱色效果好的商业蛋白酶,建立血球短肽的优化工艺,比较其在酶解前后营养特性的变化,研究其功能特性与体外抗氧化能力,以研发功能性血球短肽产品,为家禽血液资源高值化的转化利用与深度挖掘提供理论依据与技术借鉴。比较酶种类、酶浓度、温度、p H、水解时间等因素对蛋白酶水解度(DH)、脱色程度、水解物产量的影响,采用正交试验设计优化血球短肽的最佳工艺,对血球短肽进行营养价值、功能特性及抗氧化性能评价。确定酸性蛋白酶为最佳水解酶,其水解鸭血球蛋白制备短肽的最优工艺参数为:酶用量6 000 U/g,温度50℃,p H 3.5,水解时间7.0 h。在此条件下,水解度为(25.10±0.65)%,水解物产量为(60.09±1.77)%。通过高效液相色谱分析水解产物分子质量分布。结果表明,酶解对血球蛋白有明显的降解作用,酶解产物主要以3 ku以下的短肽为主,其中1 ku以下占大部分(62.82%)。血球短肽粉呈乳白色,氨基酸种类齐全,必需氨基酸含量丰富(53.31%),鸭血球蛋白酶解后的溶解性大大提高(60%),且具有良好的乳化稳定性。血球短肽清除自由基能力较强,随血球蛋白浓度的提升,清除1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·)与超氧阴离子能力随之愈强,还原力也逐渐增加。由此可见,酸性蛋白酶可有效水解鸭血球蛋白获得氨基酸含量丰富、溶解性好且具有抗氧化活性的乳白色血球短肽,可以作为功能性原料应用于食品与饲料中。     

牛乳酪蛋白初级抗菌肽粉乳基料的制备

为制备抗菌活性较好的肽粉乳基料,以新鲜牛乳为原料提取酪蛋白,以酪蛋白酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为指标,从木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,并通过单因素试验和正交试验确定该酶水解牛乳酪蛋白优化水解条件。结果表明：木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白,其酶解物对3种菌均有较好的抑制作用;优化水解工艺条件为：酶解温度50℃、酶解时间4.5h、加酶量4500U/g、pH5.5、底物质量浓度6g/100mL;牛乳酪蛋白酶解物及初级肽粉乳基料稳定性均较好。     

家蝇蛹的营养成分分析及抗氧化肽制备工艺研究

研究着力于分析家蝇蛹的成分,探索比较家蝇蛹抗氧化肽的制备方法,考察酶解法制备抗氧化肽的工艺条件。实验用水提醇沉法(WAM)、热变性法(TDM)和酶解法(EHM)制备得到家蝇蛹抗氧化肽,检测了三种方法制备产物的得率、应用OPA法测得多肽的含量、聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染法表征其分子量分布、比较抗氧化肽在五种体外抗氧化体系(ABTS自由基清除、DPPH自由基清除、羟基自由基清除、FRAP法测还原、亚铁离子螯合)中的抗氧化能力;最后通过单因素试验优化酶解法制备工艺。实验结果显示:水提醇沉法、热变性法和酶解法制备抗氧化肽的得率分别是(18.35±0.43)%、(25.11±0.49)%、(70.80±0.36)%;OPA法检测的多肽含量分别为(53.87±2.74)%、(43.33±1.07)%、(66.50±9.02)%;热变性法制备的抗氧化肽的自由基清除能力和还原能力均较强,酶解法制备抗氧化肽的亚铁离子螯合能力最优,而水提醇沉法的各项指标值均较低。单因素实验结果显示,最佳酶解条件为温度60℃、酶解时间30 min、加酶量6 000 U/g。以上结果提示,家蝇蛹营养成分丰富,酶解法和热变性法均能有效制得强抗氧化活性物质,具有开发成饲料或饲料添加剂的潜力。     

血清加工废弃蛋白质水解工艺研究与优化

为了提高血液蛋白质的利用率,降低其对环境的污染,得到风味蛋白酶水解血清加工废弃蛋白质的最优工艺,试验以血清加工废弃蛋白质为原料,以水解度为评价指标,选择风味蛋白酶的添加量、温度、时间和pH值为自变量进行单因素试验,筛选部分因素进行三因素三水平的响应面试验,同时测定最优工艺条件下酶解液中多肽含量、肽段种类及游离氨基酸种类和含量。结果表明：最佳酶解工艺为酶添加量7 g/L,温度50.8℃,pH值5.0,时间5 h,在该条件下血清加工废弃蛋白质的水解度为(55.40±0.34)%。酶解液中多肽含量为(7.23±0.23)mg/mL;含有5 757种肽段,且分子质量集中在1 000 ku以下;含有18种游离氨基酸,总含量为37.085 7 g/L,占总蛋白质含量的46.36%。说明优化后的酶解工艺具有一定的合理性,在节约时间成本及投资成本的基础上具有较好的酶解效果。     

小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的体外抗氧化活性研究

试验旨在研究小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的分子质量分布和体外抗氧化活性。试验采用单因素完全随机设计,以维生素C为对照,分别测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白在0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL浓度下对DPPH自由基、羟自由基和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基的清除率,并通过测定T-AOC吸光度值计算总还原力。结果表明：使用高效液相色谱测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白重均分子质量分别为513 u和551 u,二者分子质量小于1 000 u的比例分别为90.22%和86.93%。在一定浓度范围内,随小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白浓度的升高,其体外抗氧化性能线性增加（P<0.05）,且呈正相关关系。在10 mg/mL浓度时,小麦胚芽肽对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别为90.39%、70.66%、96.24%和2.23,大豆酶解蛋白对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别达到65.55%、68.21%、75.14%和0.51。综上,在本试验条件下,不同浓度小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白均具有一定的抗氧化能力...     

低温脱脂豆粕制备大豆肽生产工艺优化及生物活性探究

利用低温脱脂豆粕,经65%乙醇变性处理后,采用Alcalase碱性蛋白酶酶解豆粕蛋白制备大豆肽。通过单因素试验,考察p H、底物质量分数、酶用量(E/S)和酶解温度等因素对Alcalase碱性蛋白酶酶解豆粕蛋白效果的影响。通过正交试验设计,确定酶解最佳工艺参数:酶解温度60℃,底物质量分数7%,酶用量(E/S)5 300 U/g,p H 9.5,此条件下,蛋白水解度达最大,为21.54%。利用离子交换树脂法进行脱盐浓缩,又分别用改进的亚油酸-硫氰酸钾方法和邻苯三酚法对产品抗氧化能力进行检测。试验结果表明:利用离子交换树脂方法的脱盐率为95.12%,大豆肽清除自由基能力的顺序和抗亚油酸过氧化能力结果基本保持一致。     

羽毛粉酶解法制备羽毛肽的工艺研究

试验采用酶解方法处理羽毛粉,制备利于动物机体消化吸收的羽毛肽。羽毛粉经过高温和强碱预处理后,采用不同种类蛋白酶制剂酶解羽毛粉,并优化酶解条件,测定酶解物中可溶性蛋白质含量考察酶解效率;确定最佳制备条件为预处理温度90℃、处理时间150 min及溶解剂质量分数0.7%,得到最佳酶制剂为角蛋白酶,蛋白酶添加量0.8‰、酶解p H 8.5及酶解时间8 h,酶解后低聚肽含量超过70.0%。用高效液相色谱测定酶解后羽毛低聚肽分子质量的分布,约70.0%羽毛肽分子质量≤2 000 D。     

家蚕丝素蛋白抗氧化肽的制备及其稳定性研究

利用碱性蛋白酶水解家蚕丝素蛋白制备抗氧化肽,考察水解pH、水解时间、加酶量、底物浓度、水解温度5个因素对水解产物DPPH自由基清除率的影响,在此基础上采用响应面试验优化水解工艺条件,并调查家蚕丝素蛋白抗氧化肽对热、酸、碱和体外肠道消化的稳定性,测定不同分子质量范围的家蚕丝素蛋白水解产物组分的抗氧化活性.结果 表明,碱性蛋白酶水解制备家蚕丝素蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为水解pH 8.69、水解时间60 min、加酶量3035 U/g、底物(丝素蛋白)质量浓度26.80 g/L、水解温度53.89℃,在此条件下制备获得的家蚕丝素蛋白抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为55.16％.家蚕丝素蛋白抗氧化肽具有良好的热稳定性;在中性环境中抗氧化活性很稳定,但在强酸和强碱环境中抗氧化活性明显降低;经体外模拟胃肠道消化后,对DPPH自由基的清除率比未消化处理对照组提高了9.43百分点.分子质量小于5 kD组分是家蚕丝素蛋白抗氧化肽的主要活性组分.研究结果为家蚕丝素蛋白功能产品的开发提供了试验依据.     

水牛乳抗氧化活性肽制备中蛋白酶的选择

本研究采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、动物复合蛋白酶、植物复合蛋白酶、Protamex 蛋白酶对水牛乳蛋白进行酶解试验,以水解度、DPPH自由基清除率为评价指标,筛选适合水牛乳蛋白活性肽制备的最佳蛋白酶.结果表明,采用碱性蛋白酶酶解水牛乳蛋白的水解度及DPPH自由基清除率为最高,分别为24.30％和66.63％.     

超声波辅助双酶法制备黑豆多肽的工艺优化及其抗氧化活性研究

试验以黑豆蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解黑豆蛋白制备黑豆多肽,同时以超声波辅助水解过程。以蛋白水解度为表征指标进行单因素试验,研究超声功率、复合酶比例、底物浓度、加酶量、反应时间等5种因素对黑豆蛋白水解度的影响,进一步通过正交试验进行黑豆蛋白肽制备工艺的优化。结果显示,超声波辅助复合酶水解黑豆蛋白的最佳工艺参数为：超声功率200 W、酶配比7∶3、反应pH值为7.5、反应温度为52℃、底物浓度5%、加酶量800 U/g、反应时间4 h。黑豆多肽对超氧阴离子自由基（·O2-）、羟自由基（OH·）、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基（ABTS+·）具有一定的清除能力,具有良好的体外抗氧化活性。     

羊小肠黏膜蛋白酶解工艺条件研究

试验以探讨确定羊肠膜蛋白粉生产小肽适宜酶解工艺条件为目的。以羊小肠黏膜为原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解试验,采用正交试验对酶解条件(酶添加量、酶解时间、酶解温度和pH)进行优化,以小肽和水溶蛋白为检测指标,探讨最佳酶解工艺条件。结果表明:羊肠膜蛋白粉最佳酶解条件为温度60℃、酶加量5 000 IU/g、pH 10和水解时间4 h。     

猪肠膜双酶分步磕解工艺的研究

以猪小肠黏膜提取肝素后的滤渣为原料,利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对猪肠膜进行双酶分阶段水解.在单因素试验的基础上采用正交试验对水解条件进行优化.结果表明木瓜蛋白酶和中性蛋白酶双酶分阶段水解的最佳酶解工艺为木瓜蛋白酶-中性酶的加酶量比为1∶2,总酶量8000U/g蛋白,底物浓度为5%,pH7.0,温度55℃,酶解时间3h.通过喷雾干燥生产出成品,其蛋白质含量为37.5%.     

双酶法制备饲料级小麦低聚肽的工艺研究

试验旨在研究使用双酶法制备饲料级小麦低聚肽。试验对比了食品级与饲料级蛋白酶水解谷朊粉的多肽含量，筛选出最佳的复合酶种类；在单因素试验基础上，利用正交试验优化酶解条件并测定可溶性小肽含量。结果显示，酶解工艺条件为谷朊粉添加量12%、pH值7.0、中性蛋白酶与碱性蛋白酶各添加3%、水解5 h。在此条件下，可溶性小肽含量84.34%。使用高效液相色谱测定其重均分子量为764 Da，分子量小于1 000 Da的小麦低聚肽占比87.19%。研究表明，使用饲料级蛋白酶酶解谷朊粉，小麦低聚肽含量显著提高，并降低成本，具有作为功能性饲料添加剂应用的潜力。     

脱脂柞蚕蛹蛋白用复合中性蛋白酶水解制备多肽的工艺条件优化试验

利用蛋白酶对脱脂柞蚕蛹蛋白进行酶解制备具有活性的多肽,可以提高柞蚕蛹蛋白的应用价值。为了建立适合工业化应用的脱脂柞蚕蛹蛋白的酶解工艺条件,首先采用单因素试验考察料液质量浓度、复合中性蛋白酶种类与使用浓度、酶解温度和时间4个因素对脱脂柞蚕蛹蛋白水解度的影响,得出较适合的工艺条件是:料液质量浓度60 g/L,3 g/L复合中性蛋白酶中的风味蛋白酶与蚕蛹专用复配蛋白酶按1∶1质量比混合,酶解温度55℃,酶解时间10 h。进一步采用Box-Behnken设计及响应面分析法对工艺条件进行优化,在复合中性蛋白酶质量浓度4.85 g/L、料液质量浓度41 g/L、酶解温度55℃、酶解时间10.66 h的最佳酶解条件下,脱脂柞蚕蛹蛋白的理论水解度为45.82%,实际水解度为45.75%。利用优化的酶解工艺条件制备柞蚕蛹蛋白活性肽,具有酶解效率高、稳定性好、操作简单、生产成本低的特点。     

以豆粕为原料制备反刍动物饲用肽的研究

本文通过正交试验,选用碱性微生物蛋白酶,研究得出酶解法制备大豆肽的最佳工艺参数:豆粕预处理条件为90℃水浴加热10min,酶解条件为底物浓度5%(W/V)、加酶量5万单位/g蛋白质、温度50℃、pH值10、酶解时间5.5h。蛋白质水解率达到25%,平均肽链长度为4.0。制得大豆肽粗蛋白质含量66.83%(DM)。并对制得大豆肽和原料豆粕的氨基酸含量进行分析。     

功能型水牛奶乳饼制作工艺的研究

本试验以水牛奶为原料,利用贯筋藤蛋白酶制作乳饼,以Tricine-SDS-PAGE对乳饼蛋白肽进行检测并研究乳饼蛋白肽的抗氧化性。结果表明,酶解辅助酸凝乳乳饼最佳工艺为:加酶量0.03g/kg、酶解时间60min、加酸量20mL/kg,成品率达(23.3±2.54)%。电泳检测酶解辅助酸凝乳(MS-RB)乳饼中有肽水解出来,且该蛋白肽的清除ABTS自由基、DPPH自由基活力和还原能力均高于酸凝乳饼(S-RB)。研制具有功能活性肽的乳饼对云南特色乳制品的开发利用具有一定意义。     

牦牛奶渣蛋白肽的提取及其抗氧化活性研究

以香格里拉牦牛奶渣为原料,经贯筋藤蛋白酶水解后,在单因素实验的基础上,利用响应面法优化提取牦牛奶渣蛋白肽的工艺条件,并研究牦牛奶渣蛋白肽的抗氧化活性。牦牛奶渣蛋白肽的提取工艺为:牦牛奶渣超微粉碎→加水溶解→超声波破碎→振荡水浴酶解→离心→取上清液→冷冻干燥;最佳酶解条件:时间70min、温度65℃、料液比1:110(g/mL)、酶的添加量为底物质量的12%;抗氧化活性:DPPH自由基清除能力(61.63±1.12)μg/g, ABTS自由基清除能力(195.13±1.83)μg/g,还原能力(108.6±0.49)μg/g。研究表明,牦牛奶渣蛋白肽具有一定的抗氧化功能,本研究为其应用于生物制剂、保健食品及医药品等相关产品的研发提供了科学依据。     

猪肠膜双酶分步酶解工艺的研究

以猪小肠黏膜提取肝素后的滤渣为原料,利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对猪肠膜进行双酶分阶段水解。在单因素试验的基础上采用正交试验对水解条件进行优化。结果表明:木瓜蛋白酶和中性蛋白酶双酶分阶段水解的最佳酶解工艺为:木瓜蛋白酶-中性酶的加酶量比为1:2,总酶量8000U/g蛋白,底物浓度为5%,pH7.0,温度55℃,酶解时间3h。通过喷雾干燥生产出成品,其蛋白质含量为37.5%。     

酶解蚕蛹蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的工艺优化

采用碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白,制备血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,是蚕蛹蛋白深度开发的途径之一。以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶解温度、酶解pH和加酶量等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性影响程度由大到小依次为酶解pH、酶解温度、加酶量。获得碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度50.8℃,酶解pH 9.0,加酶量3 500 U/g。在此条件下,蚕蛹蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达96.67%,验证值为96.49%±1.75%,IC50值为0.102 mg/mL,预测模型可靠性高,可应用于蚕蛹ACE抑制肽的酶法制备。