畜禽TLR4基因抗病研究进展

畜禽的抗病力作为实际育种与生产的重要目标性状之一,已引起科研人员和广大养殖户关注。TLR4基因作为革兰氏阴性菌细胞壁外膜成分中脂多糖(LPS)的主要受体,在畜禽机体免疫应答过程中发挥重要作用,对畜禽抗病力具有较大影响。主要叙述TLR4基因的作用、主要表达细胞、作用机理及其与畜禽抗病性的关系,并对TLR4基因作为畜禽抗病候选基因在实际生产育种中进行了展望。     

鸡TLR4基因抗沙门氏菌的研究进展

沙门氏菌不仅给畜禽机体带来了严重的危害,也给养殖业带来巨大的经济损失,而且也是人类食源性疾病的主要病原菌之一,严重地损害人类的身体健康。而Toll样受体4基因(TLR4基因)是连接天然免疫与特异性免疫的桥梁,在抵抗沙门氏菌感染中具有重要免疫功能。本文综述了TLR4基因的结构分布及其研究进展,对其应用前景进行了展望,以期为家禽抗病育种提供理论依据。     

家禽TLR5的研究进展

Toll样受体(TLRs)是最早发现的哺乳动物天然免疫模式识别受体家族,也是研究最广泛的模式识别受体(PRRs),其研究极大地丰富了免疫生物学内涵。TLRs和其他PRRs识别病原相关分子模式(PAMPs),可以激活细胞信号通路,产生各种炎症细胞因子,趋化因子和Ⅰ型干扰素(IFNs),从而迅速触发一系列抗微生物免疫反应。文章主要讨论家禽TLR5基本结构特点、信号通路及其抗感染作用,以为家禽TLR5的深入研究提供新的科学线索。     

TLR4在妊娠异常终止中的作用机制和研究进展

Toll样受体（toll-like receptors,TLRs）作为一种病原模式识别受体在免疫反应中起着重要的作用。TLR4是最早发现的TLRs成员,它是革兰氏阴性菌胞壁成分脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）的识别受体。LPS与TLR4在胞外结合后,通过MyD88依赖和非依赖途径引起炎症反应。TLR4在生殖道炎症反应中具有重要作用,临床上可通过对利用TLR4信号转导通路的阻断来获得治疗效果。作者概述了TLR4的分子结构、组织表达和细胞内信号转导,以及在生殖系统病变状态下的表达,在此基础上提出了TLR4在生殖临床医学应用上可能的意义。     

鸡TLR3、TLR4和TLR21单核苷酸多态性的生物信息分析

试验旨在筛选鸡TLR3、TLR4和TLR21基因中的功能性nsSNPs。利用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER、PMut和PROVEAN五种软件方法分析引起的氨基酸替换nsSNPs是否可能影响基因的功能。进一步对三个基因氨基酸序列进行翻译后修饰位点及进化位点保守性的预测,使用easymodeller和SWISS-MODEL构建了其野生型及突变型蛋白质的空间结构,并计算突变前后的RMSD。结果表明:TLR3的K240T、T767S、D849N,TLR4的F427V、K714R和TLR21的T455A、Y553H、L602P、W926S可能严重影响蛋白质的结构功能。     

兔TLR2、TLR3和TLR4部分cDNA序列的克隆及分析

用RT-PCR技术从日本大耳白兔脾脏组织克隆出兔Toll样受体2、3、4基因（拟命名为RTLR2、R TLR3和RTLR4）的cDNA序列并进行测序,获得的3个Toll样受体基因序列长分别为128、150和139bp,并将其测序结果与GenBank中登录的穴兔（Oryctolagus cuniculus）的Toils核苷酸序列进行比对,发现本次克隆到的RTLR2与穴兔TLR2的基因序列（NM_001082781）相似性为99％,而RTLR3与TLR3（NM_001082219）和RTLR4与TLR4（NM_001082732）相似性均为100％。Protein Blast同源性结果显示,RTLR2、RTLR3和RTLR4的氨基酸序列与穴兔TLR2、TLR3和TLR4的同源性皆为100％,与马、人、野猪等其他8种动物TLRs的比较,与RTLR2同源性最高的是马的80％,其他的只有61％～78％;与RTLR3同源性最高是马和野猪的97％,其他也较高达93％～95％;而RTLR4与其他8种动物的同源性均较低75％以下。结果表明：RTLR2、RTLR3和RTLR4分别为免TLR2、TLR3和TLR4的部分cDNA基因序列;TLRs在不同物种的进化过程中存在种属特异性。     

TLR4/My D88/NF-κB信号通路与乳腺炎的研究进展

TLR4/My D88/NF-κB信号通路是炎症反应过程中的关键通路,广泛存在于各种细胞中。研究发现TLR4/My D88/NF-κB信号通路在乳腺炎发生时引起的乳腺损伤、氧化应激的发展中发挥了重要的作用,TLR4/My D88/NF-κB信号通路中的关键节点可望成为乳腺防控研究中的调控靶点。本文就TLR4的结构、信号通路及其与乳腺炎发生发展转归的相互关系的最新研究进展作一综述,为临床上奶牛乳腺炎的生物防治提供参考。     

牛TLR4基因生物信息学分析

为了更加深入地了解牛TLR4基因的功能、结构及与该基因有关联的疾病识别及其致病机理,利用牛TLR4基因的氨基酸序列对其编码蛋白的基本理化性质、蛋白质译后的磷酸化位点和糖基化位点以及跨膜结构域和蛋白质结构进行预测。结果显示,牛TLR4基因一共编码841个氨基酸,负电荷残基总和(Asp+Glu)为84,正电荷残基总和(Arg+Lys)为76,不稳定指数小于40,表明该基因编码产物稳定性较好。在该基因整个编码产物中,亲水氨基酸占比较多,平均分值为-0.011,由此得知TLR4基因编码的蛋白质是一种易溶蛋白。有9个潜在的N-糖基化位点;78个磷酸化位点以及存在一个跨膜蛋白和存在信号肽,其切割位点在第25和第26个氨基酸之间。蛋白质的二、三级结构预测结果显示,二级结构和三级结构均由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成,其在生物合成、基因表达与调控等方面有重要作用。本研究结果可为牛TLR4基因深入研究提供理论基础。     

雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

蒙古马不同组织器官TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA转录水平研究

根据GenBank中马Toll样受体基因序列设计特异性引物,建立检测马Toll样受体（TLRs）mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测TLR4、TLR2、TLR1和TLR6在蒙古马不同组织器官中的转录水平。4种TLRs在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、空肠、盲肠和骨髓中均有转录。其中,TLR4mRNA除在空肠和肝脏外,在其他组织器官中的表达水平均高于TLR2、TLR1、TLR6。免疫器官中,TLR4、TLR1mRNA在骨髓中表达量高于脾脏,而TLR2、TLR6mRNA在脾脏中表达量高于骨髓。各肠段,TLR4、TLR2、TLR1、TLR6mRNA表达水平之间在空肠的差异不是很大,而在十二指肠和盲肠中差异很大。结果表明,TLRs mRNA在马各组织器官转录水平差异较大,可能与其对病原体的识别和抵抗能力有关。     

金定鸭不同组织和血液中TLR1、TLR2、TLR4、TLR5的表达差异分析

试验旨在研究不同Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）在鸭不同组织中的表达情况,选取300日龄雄性金定鸭10只,解剖后采集其血液及脾脏、肝脏、睾丸、肺脏、下丘脑、垂体、皮肤、腿肌、心脏、肾脏、胸肌、盲肠、小肠、胸腺,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,并用实时荧光定量PCR法检测TLR1、TLR2、TLR4、TLR5在不同组织中的相对表达情况。结果显示,各基因扩增产物的熔解曲线均有一特异性的单峰,无其他杂峰,说明引物的特异性较强,可以准确定量。4种目的基因与内参基因的扩增效率在101.4%~105.0%之间,均接近100%,相关系数（R²）为0.98~1.000。TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 4种TLRs在金定鸭不同组织和血液中均有表达,但每种TLR受体在各组织中表达水平略有差异,其中TLR1在下丘脑中表达量最低,在胸肌中最高;TLR2在小肠中的表达量最低,在肺脏中最高;TLR4、TLR5在睾丸中的表达量最低,在皮肤中最高。以上结果说明,鸭TLRs在多种组织中能够广泛表达,本试验结果可为TLRs在鸭源感染过程中的作用机理研究提供科学依据。     

猪TLR4基因可变剪接体的鉴定

为合理、有效地利用民猪资源进行抗病育种,本研究利用重叠延伸RT-PCR结合巢式PCR法扩增民猪TLR4基因,寻找可变剪接体;利用竞争性RT-PCR方法研究各可变剪接体的组织表达情况。获得了猪TLR4基因3个可变剪接体(其中2个是未见报道的),并且鉴定出一类特殊的剪接模式——外显子内部的部分片段被单独剪除,该类型在动物中尚属首次发现;组织表达分析表明3个可变剪接体普遍表达。TLR4基因存在着复杂的剪接机制,也暗示着其功能的复杂性。     

朗德鹅TLR4基因的生物信息学分析

为研究鹅TLR4的特征与功能,采用生物信息学方法对朗德鹅TLR4进行分析。结果表明,TLR4蛋白分子式为C₄₃₆₄H₆₈₆₇N₁₁₃₅O₁₂₃₉S₃₂,定位于细胞膜,存在信号肽;含有8个LRR、1个LRR＿CT、1个跨膜结构域以及胞内区的TIR;具有12个潜在的N-糖基化位点和89个磷酸化位点,可能与TIRAP和S100A9等具有相互作用。高级结构预测显示,该TLR4由α-螺旋、β-转角、延展链以及无规则卷曲组成。进化树分析表明朗德鹅与禽类亲缘关系较近,与其他物种则较远。研究表明朗德鹅TLR4蛋白是一种疏水偏碱性蛋白,符合TLRs家族典型结构,但在不同物种间存在一定差异性。     

猪TLR4基因的变异位点分析

Toll样受体4(TLR4)主要识别革兰氏阴性菌表面的脂多糖,其基因变异可能改变宿主对脂多糖(LPS)的免疫反应.研究利用克隆、测序的方法在TLR4基因的外显子3寻找变异位点,并利用PCR-SSCP方法对寻找到的部分错义突变进行群体遗传学分析,确定不同基因型在猪种间的分布规律.结果表明:共寻找到11个点突变,其中8个是...     

不同温度条件下斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达分布

斑马鱼是重要的新型模式动物,在动物免疫、生殖、畜牧兽医等生命科学领域具有重要研究价值。本文应用免疫组织化学反应,探究低温(16℃)和常温(30℃)条件下,斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达分布特征。结果显示,斑马鱼精巢为成对的狭长器官,生精小管的生殖上皮由生精细胞和支持细胞组成,它们构成不同的精囊,每个精囊的精子发生过程为同步进行。低温条件下精巢生精小管边缘的间质及支持细胞TLR2阳性反应强烈;精原细胞、间质细胞与支持细胞中呈现TLR4阳性反应。但常温下斑马鱼精巢TLR2/4阳性反应微弱。从细胞形态学角度表明,低温能够诱导斑马鱼精巢及其细胞表达TLR2和TLR4,进而可能增强斑马鱼精巢的固有免疫力。     

兔TLR2 TLR4部分cDNA克隆及其在组织中的分布

从日本大耳白兔的脾脏组织克隆出Toll样受体基因2(RTLR2)和Toll样受体基因4(RTLR4),并对其在兔的17种组织中的表达分布进行了检测。RTLR2和RTLR4核苷酸序列与GenBank中登载的穴兔(Oryctolagus cuniculus)TLR2序列(NM_001082781)、TLR4序列(NM_001082781)的相似性分别为99%和100%;推导氨基酸序列的同源性比对发现,与人、马、野猪、猫、猩猩、牛、绵羊和鼠等8种动物相比,RTLR2与马的同源性最高,为80%,与鼠最低,为61%,而RTLR4与这几种动物的同源性在62%~75%之间;兔的胸腺、盲肠、睾丸等15种组织中均检测到TLR2和TLR4 mRNA的转录产物,但骨骼中未发现TLR2和TLR4,TLR4在皮肤中也未见表达。     

母体脂代谢对子代骨骼肌生长发育的研究进展

骨骼肌是一种动态多样化组织,是动物体维持正常生长发育必不可少的组成部分,其生长发育过程受多重因素调控.已有相关研究证实母体脂代谢在子代骨骼肌生长发育过程中的重要作用.文章综述母体脂代谢对子代骨骼肌生长发育的影响,旨在为畜牧生产及后续研究提供参考.