转hTERT基因的山羊胎儿成纤维细胞的生物学特性及其表达分析

用脂质体介导法将hTERT基因转染到山羊胎儿成纤维细胞中,以期获得永生化的山羊胎儿成纤维细胞系。对转染后的阳性细胞进行细胞学和分子学相关检测。结果显示,导入hTERT的阳性细胞形态正常,并已传至第58代;未转染组细胞经长期传代后（30代）,增殖缓慢,部分细胞表现衰老和凋亡的迹象。RT-PCR检测转染组细胞中有hTERT基因表达。生长曲线绘制结果显示转染组（30代和50代）山羊胎儿成纤维细胞生长速度稍快于未转染组（5代）细胞,但差异不显著（P〉0.05）。转染组细胞生长旺盛,细胞接种后第6天,基本覆盖培养孔。而未转染组（30代）细胞一直生长缓慢,差异显著（P〈0.05）。未转染组（30代）山羊胎儿成纤维细胞处于S期细胞和G1期细胞分别为28.9%和60.8%,而转染组（30代）分别为45.2%和45.0%。说明外源性hTERT基因可促进山羊胎儿成纤维细胞由G1期向S期转变,并提高细胞增殖能力。转染组（50代）山羊胎儿成纤维细胞染色体核型正常,未发生变化。未转染组（30代）细胞凋亡率和死亡率分别为39.7%和29.4%,而转染组（30代）分别为11.0%和12.7%,差异极显著（P〈0.01）。hTERT蛋白在转染组（30代）山羊胎儿成纤维细胞中表达,蛋白相对分子质量为127 000。说明外源性hTERT基因可以延长胎儿成纤维细胞在体外培养的寿命,降低细胞凋亡率。     

成纤维细胞生长因子对动物的营养研究

成纤维细胞生长因子是广泛存在于机体组织细胞的一类生长因子。它对动物具有十分重要的营养作用。它可以促进动物生长、刺激骨骼肌细胞增殖、抑制胫软骨发育不良等作用，现已知ＦＧＦ家族至少有１８名成员。该家庭存在２类受体：高亲和力受体具有酷氨酸蛋白激酶活性；抵亲和力受体为肝素样受体，它们对机体内激素的分泌以及多种细胞的生长和分化有一定的影响。     

成纤维细胞生长因子21及其受体1、2在小鼠毛囊形成期的定位和表达

本试验旨在通过研究成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)及其受体FGFR1、FGFR2在胚胎小鼠毛囊形成阶段中的定位与表达,从而探究其在小鼠毛囊形成中的作用。试验采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR及Western blotting方法研究FGF21、FGFR1、FGFR2蛋白和mRNA在胚胎期13～18d(E13～E18)小鼠皮肤中的表达。结果显示:(1)FGF21蛋白在E13主要表达于表层细胞、基底层细胞及结缔组织中,E14表达于表层细胞和基板,E15在毛芽中有微量表达,E16、E17表达于毛钉中,E18主要表达于未成熟毛囊细胞;FGFR1和FGFR2蛋白在E13～E18于表层细胞、基底层、基板、毛芽、毛钉、未成熟毛囊和结缔组织中均有表达。(2)实时荧光定量PCR及Western blotting结果显示:FGF21mRNA和蛋白在E14相对表达量最高;FGFR1mRNA及蛋白在E16～E17相对表达量较高;FGFR2mRNA及蛋白的相对表达量在E13至E18均呈上升趋势,在E18相对表达量最高。结果提示:在小鼠胚胎期毛囊形成和发育过程中,FGF21可能在诱导毛囊启动过程中发挥一定的作用;FGFR1可能促进毛钉形成;FGFR2可能在毛囊形成和成熟中发挥重要作用。     

成纤维细胞生长因子21及其受体1、2在小鼠毛囊形成期的定位和表达

本试验旨在通过研究成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)及其受体FGFR1、FGFR2在胚胎小鼠毛囊形成阶段中的定位与表达,从而探究其在小鼠毛囊形成中的作用。试验采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR及Western blotting方法研究FGF21、FGFR1、FGFR2蛋白和mRNA在胚胎期13～18d(E13～E18)小鼠皮肤中的表达。结果显示:(1)FGF21蛋白在E13主要表达于表层细胞、基底层细胞及结缔组织中,E14表达于表层细胞和基板,E15在毛芽中有微量表达,E16、E17表达于毛钉中,E18主要表达于未成熟毛囊细胞;FGFR1和FGFR2蛋白在E13～E18于表层细胞、基底层、基板、毛芽、毛钉、未成熟毛囊和结缔组织中均有表达。(2)实时荧光定量PCR及Western blotting结果显示:FGF21mRNA和蛋白在E14相对表达量最高;FGFR1mRNA及蛋白在E16～E17相对表达量较高;FGFR2mRNA及蛋白的相对表达量在E13至E18均呈上升趋势,在E18相对表达量最高。结果提示:在小鼠胚胎期毛囊形成和发育过程中,FGF21可能在诱导毛囊启动过程中发挥一定的作用;FGFR1可能促进毛钉形成;FGFR2可能在毛囊形成和成熟中发挥重要作用。     

山羊成纤维生长因子受体（FGFR1）基因的多态性检测

选择与羊同源性较高的牛FGFR1基因组序列（NM_001110207）设计3对特异性引物,采用DNA池PCR直接测序法快速检测黔北麻羊FGFR1基因的多态性,并以内蒙古白绒山羊和关中奶山羊比较,结果表明：在引PCR产物中只有黔北麻羊检测到多态,分别处于外显子5和内含子5的T133C和C211T的碱基突变,而其他2个品种...     

表皮生长因子及其受体在山羊胎儿皮肤发育中的表达特征

运用组织学和免疫组化方法对山羊皮肤发育的组织学特点、山羊皮肤发育过程中表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)的分布及变化规律进行了系统研究.结果显示:(1)表皮结构形成于胎儿发育的6周龄左右,开始为单层上皮,而后逐渐增殖为复层、厚度不断增加,15周龄后逐渐变薄;真皮层在10周龄时形成,11周龄后陆续有皮肤衍生结构从中发育形成.随着胚胎的继续发育,皮肤各部分结构的发育渐趋完善.(2)在胎儿发育的第6周就出现EGF与EGFR的较弱表达,以后随着胎龄的增加,EGF与EGFR表达量逐渐增加.从表达分布看,在胎儿发育的11周前,EGF阳性反应主要定位于表皮基底层细胞、毛囊上皮细胞和真皮成纤维细胞等的胞质内,EGFR则主要位于相应细胞的膜上;11-16周,EGF和EGFR表达量逐渐增高,分布范围从表皮的基底层细胞、棘细胞、毛囊上皮细胞和成纤维细胞扩展到血管内皮细胞、汗腺上皮细胞和竖毛肌,EGF主要定位于这些细胞的胞质,EG-FR则主要分布于细胞膜;17周至出生,随着表皮的明显变薄,EGF及EGFR主要分布于表皮基底层细胞和毛囊上皮细胞,阳性反应继续增强.皮肤发育期间,EGF及EGFR的表达量总体呈增长趋势,只是EGFR的表达相对滞后,两者的表达曲线一致、相关性极显著.表明EGF及EGFR在皮肤及其衍生结构的发育中发挥着重要作用.     

绵羊内皮生长因子siRNA载体构建及其在成纤维细胞中的表达

研究旨在构建绵羊血管内皮因子(VEGF)基因小干扰RNA(siRNA)载体并对其在成纤维细胞中的表达进行探索。实验构建了以VEGF基因片段为靶位点的3个siRNA质粒载体,即PGC-1、PGC-2、PGC-3,通过脂质体介导转染方法将干扰载体转入绵羊成纤维细胞中,利用ELISA测定3个干扰载体转染入成纤维细胞后细胞中VEGF的表达量。结果表明:各组转染后细胞中VEGF的表达量分别为47.78、24.45、8.36、13.99 pg/mL,转染载体PGC-2的成纤维细胞中VEGF表达量最少。上述结果说明,在绵羊成纤维细胞中可发生RNA干扰现象,且干扰载体PGC-2的干扰效率最高,RNA干扰技术有效改变了VEGF的基因表达。     

羊口疮病毒感染对山羊皮肤成纤维细胞circRNA表达谱的影响

旨在探究羊口疮病毒（orf virus,ORFV）感染对山羊皮肤成纤维细胞（goat skin fibroblast,GSF）环状RNA(circular RNA,circRNA)表达谱的影响。以ORFV感染的GSF和未感染细胞为对象构建6个cDNA文库进行转录组测序,利用生物信息学方法进行circRNA鉴定、circRNA差异表达分析、差异circRNA的GO和KEGG功能富集分析,最后挑选9个差异circRNA进行qPCR和Sanger测序验证。结果发现,在未感染组和感染组分别鉴定到9 979和10 844个circRNA,共有151个circRNA差异表达,其中59个circRNA表达上调,92个circRNA表达下调;GO富集分析表明,差异circRNA主要富集在炎症应答、上皮结构维持、细胞迁移正调控、泛素蛋白转移酶活性等生物学过程;KEGG富集分析表明,差异circRNA主要富集在紧密连接、黏着斑、血管平滑肌收缩、内吞作用、细胞因子受体相互作用等信号通路;circRNA1001,circRNA1684,circRNA3127和circRNA788表达量与转录组测序结果一致。本...     

家蚕核型多角体病毒成纤维细胞生长因子基因的表达和定位

为了解杆状病毒基因组中成纤维细胞生长因子基因(fgf)的功能,分离纯化了BmNPV DNA,采用PCR方法获得了BmNPV的fgf基因,并克隆至原核表达载体pET28 a,构建了高效原核表达质粒pET28 af-gf。通过IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE检测证实了在27 kD左右有一特异条带,与预测的蛋白质分子量大小一致,并通过N i2+-NTA离子交换树脂亲和纯化了目的蛋白。同时构建了融合GFP的真核表达载体pCDNA3.1-gfp-fgf,通过脂质体转染进入COS-7细胞进行表达和定位观察。fgf基因产物定位于细胞核。     

成纤维细胞生长因子信号通路在小鼠牙齿发育中的表达及其作用

小鼠牙齿发育是一个外胚层来源的上皮和神经嵴来源的间充质相互作用的过程.在这个相互作用过程中,成纤维细胞生长因子(FGFs)信号通路在牙齿发生位置的确定,牙齿发育的起始、细胞的增殖分化和牙齿的形态建成等方面都发挥着重要作用.该家族由23个配体(Fgf1-23)组成,通过4种特异性受体(FGFR1-4)来发挥作用.本文综述FGFs信号通路的配体和受体在小鼠牙齿发育中具体的表达模式及其作用.     

牛碱性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的生物学活性

采用巢式PCR方法克隆了牛18ku-bFGF基因完整的编码序列,并构建了原核表达载体pET-28a-bFGF,将其转化大肠杆菌BL21,在25℃低温条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达5 h,用Ni-NTA亲和纯化细胞裂解上清液,经Western-blotting检测,结果显示,在特定的诱导条件下,重组牛bFGF基因在大肠杆菌中获得了表达,并且主要以可溶性状态存在于细胞中。经检测,纯化后的重组蛋白能显著促进成纤维细胞的增殖（P〈0.05）,其活性与商品用重组人18ku-bFGF没有差异（P〉0.05）。表明,所获得的可溶性重组牛18ku-bFGF蛋白具有较高的生物学活性,可用于后续研究工作。     

碱性成纤维细胞生长因子及其对生殖的影响

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）是成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）家族中的主要成员，广泛分布于动物机体中，影响细胞的生长、分化和功能。本文在系统介绍ｂＦＧＦ的生化特性、来源、分布以及一般生物学效应的基础上，着重介绍了ｂＦＧＦ对生殖调控方面的研究进展。     

酸性成纤维细胞生长因子与肿瘤细胞生长的相关性

将 p RSV- a FGF(含 a FGF基因的劳斯肉瘤病毒载体 )与 HL - 6 0细胞 (人急性早幼粒细胞白血病细胞系 )悬液直接转移至裸鼠背部肌肉 ,11d后出现了可视肿瘤。比较病理学观察结果显示 ,试验组肿瘤组织内血管再生明显增多 ,2例裸鼠肝脏出现转移性 HL- 6 0细胞 ,表明酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)具有促进肿瘤组织内血管形成的作用 ,从而促进了 HL - 6 0细胞生长与转移。提示应用 FGF抗体对抑制肿瘤的生长与转移可能有一定的作用     

成纤维细胞生长因子信号通路与小鼠肺发育

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类参与多种生物生命活动的多肽类物质,在哺乳动物多个器官发育中具有调控细胞增殖、迁移和活化等生物功能。已有研究表明,不同的FGFs参与调控小鼠肺发育过程,其表达异常可引起肺癌、肺纤维化等,同时在肺损伤修复中发挥关键作用。论文系统总结了FGFs信号通路相关配体和受体在小鼠肺发育过程及相关肺疾病中发挥的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子及其对生殖的影响

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）是成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）家族中的主要成员，广泛分布于动物机体中，影响细胞的生长，分化和功能，本文在系统介绍ｂＦＧＦ的生化特性，来源，分布以及一般生物学效应的基础上，着重介绍了ｂＦＧＦ对生殖调控方面的研究进展。     

牛肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的分子结构与特性研究

本试验分离了编码肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的全长cDNA,用生物信息学分析其基因结构、功能、进化关系、并预测其结合位点及三维结构。实时定量PCR(Q-PCR)结果发现,TWEAK和FN14在牛的多种组织中为组成型表达。用酵母双杂交对牛TWEAK和Fn14的相互作用进行了分析,结果发现,TWEAK-FN14通路在进化上高度保守。这将有助于开展TWEAK/Fn14系统在这个重要动物模型中的生物学作用的研究从而对TWEAK和Fn14家族的分子进化进行更深入的了解。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子的药效试验

上海白种猪经麻醉后灼伤造模 ,形成单位创面直径 2 .5ｃｍ ,深Ⅱ度烫伤 ,作为药效学观察之动物模型 ,以进口Ｐｒｏｍｅｇａ产品为阳性对照。每天肌肉注射重组人碱性成纤维细胞生长因子ｂＦＧＦ注射剂 ,每日 1次 ,连续 1 0天。注射后第 3天就可观察到创面愈合程度的差异性 ,给药组与空白对照组呈现显著差异 ,给药组中与进口对照的同剂量组显现出相似的愈合效果。1　材料与方法以小型精猪制成深Ⅱ度烫伤模型 ,观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的药效 ,并以进口Ｐｒｏｍｅｇａ产品为阳性对照。1 .1　受试药物ｒｈｂＦＧＦ由中国人民解放军第一…     

德国牧羊犬成纤维细胞培养及其生长特性研究

试验旨在探讨犬耳部和腹部皮肤成纤维细胞体外培养和纯化方法,为下一步犬体细胞核移植提供基础。结果表明,在组织块培养后的4 d,耳组织周围开始有细胞出现,8~10 d呈优势生长,2周后可长满细胞瓶。腹部皮肤组织则要6~7 d方可见有细胞沿组织块周围爬出,10 d左右可以在组织块周围形成成片细胞,20 d左右可以长满整个细胞瓶。腹部皮肤成纤维细胞建系初期生长速度低于耳成纤维细胞,但传代至第4代时,两种细胞的生长曲线基本相同。     

波尔山羊耳成纤维细胞的分离培养与保存

本文研究了波尔山羊耳成纤维细胞的体外培养,包括分离纯化和生长特征,同时还研究了成纤维细胞的冷藏和冷冻保存.结果表明,波尔山羊耳成纤维细胞贴壁生长,一般经历潜伏期、指数增生期和平台期;4℃体外冷藏时间为5 d;冷冻保存时4℃平衡1 h、-80℃过夜,然后直接投入液氮中,解冻后培养得到61.6%的贴壁率.     

GDF9慢病毒载体的构建及其在山羊原代成纤维细胞中的稳定表达

试验旨在构建山羊生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）慢病毒载体,并使其在山羊原代成纤维细胞中稳定表达。利用全基因合成法克隆了绵羊GDF9基因的CDS全长片段,长约1 362 bp,编码453个氨基酸。利用双酶切和连接,将GDF9基因片段亚克隆至慢病毒载体中,构建了过表达GDF9的慢病毒载体。将慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞后,获得了滴度为1×10⁶ TU/mL的慢病毒。利用制备的GDF9慢病毒感染山羊原代成纤维细胞后,观察荧光表明,60%以上的细胞能够观察到红色荧光,说明制备的慢病毒对山羊原代成纤维细胞具有较高的感染效率。经过嘌呤霉素筛选后,所有的细胞均能观察到红色荧光。实时荧光定量PCR分析表明,制备的细胞系中GDF9表达水平比对照组高12.17倍,说明成功获得了稳定表达GDF9的山羊成纤维细胞系。本试验结果为进一步研究GDF9基因的生物学功能,以及山羊未来的种质资源创新奠定基础。