蛋白酶和木聚糖酶对肉仔鸡生长性能、血液指标和消化机能的影响

以蛋白酶和木聚糖酶分别作为消化酶(或内源酶)和非消化酶(或外源酶)的代表,研究小麦型日粮中添加不同水平蛋白酶和木聚糖酶对1~21日龄肉仔鸡生长性能、血液指标、消化器官指数及肠道组织学形态的影响,为酶制剂在家禽日粮中的合理使用提供理论依据。1日龄健康肉仔鸡972只,随机分为9个处理,每处理9个重复,每重复12只,采用双因子完全随机试验设计,分别饲喂在基础日粮中添加不同水平蛋白酶(0、4 000、32 000 U/kg)和木聚糖酶(0、1 000、8 000 U/kg)的试验日粮,试验期21 d。结果表明,4 000 U/kg蛋白酶+1 000 U/kg木聚糖酶组显著降低肉仔鸡采食量(P<0.05),32 000 U/kg蛋白酶添加水平趋于提高采食量(P=0.080),但对饲料转化率无显著影响(P>0.05)。32 000 U/kg蛋白酶添加水平显著降低血糖含量(P<0.05)。1 000 U/kg和8 000 U/kg木聚糖酶水平均趋于提高回肠指数(P=0.051)。32 000 U/kg蛋白酶组趋于降低空肠绒毛高度(P=0.081)。与8 000 U/kg木聚糖酶组相比,32 000 U/kg蛋白酶组显著增加...     

液体发酵制备木聚糖酶及其对育肥猪生长性能与血液生化指标的影响

采用黑曲霉菌3.3162液体发酵制备木聚糖酶,研究发酵条件对酶活力的影响,按优化条件扩大发酵制备木聚糖酶干粉,研究其添加到小麦日粮中对育肥猪生产性能和血液生化指标的影响。选择杜长大三元猪60头,随机分成3个处理组,分别饲喂玉米型日粮和两种小麦加酶日粮(将日粮中玉米的60%直接用小麦代替,酶制剂添加量均为0.18g·kg-1,一组为试验中自制木聚糖酶,另一组为市售复合酶木聚糖酶54000U·g-1,葡聚糖酶42000U·g-1)进行饲养试验。结果表明,利用黑曲霉菌进行液体发酵是理想的木聚糖酶生产工艺,最适发酵条件为pH6、麦麸比例2%、吐温80添加量0.1%与摇瓶装液量50mL。动物试验证明,小麦代替玉米并添加酶制剂饲喂猪可以获得理想的生产性能,但会引起一些血液生化指标的变化。     

流加氨水提高木聚糖酶活力初步研究

用正常产酶培养基和流加氨水产酶培养基培养Aspergillus niger J506,测定木聚糖酶的活性、酸性蛋白酶的活性和pH值。结果表明,用正常培养基培养时,木聚糖酶的活性在78~82 h达到产酶高峰,酶活力为226 U/mL。流加氨水培养,发酵液的pH值控制在4.0以上,木聚糖酶活力在86~90 h达到产酶高峰,活力为319 U/mL,比正常发酵提高了41.15%;而流加氨水条件下酸性蛋白酶活性从64 h开始比正常培养有明显降低。蛋白酶活力的降低和木聚糖酶活力的提高可能有一定关系。     

果胶裂解酶、木聚糖酶及果胶裂解酶、木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

运用RT-PCR技术,从绿色木霉(AS3.3711)mRNA中扩增出木聚糖酶基因xyn2,并与质粒pPIC9K相连,构建了表达载体pPIC9K-xyn2,转化毕赤酵母GS115,并且将pPIC9K-xyn2和pPIC9K-PelC(果胶裂解酶)同时转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,分别得到一株高表达木聚糖酶毕赤酵母菌株X5和一株同时高表达木聚糖酶和果胶裂解酶毕赤酵母菌株PX6。同时,将一株高表达果胶裂解酶毕赤酵母菌株P2保存。重组酶酶学性质分析表明,P2和PX6分泌果胶裂解酶,X5和PX6分泌木聚糖酶最适温度均为50℃;P2分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为14.2U/mL;X5分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为5.8U/mL;PX6分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为12.6U/mL,分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为4.2U/mL。     

低能日粮中添加木聚糖酶对肉仔鸡生产性能和养分利用率的影响

为了验证自产木聚糖酶的添加效果并确定其适应添加量,将180只健康且体质量接近的1日龄AA肉仔鸡,随机分为6组,每组6个重复,每重复5只。分别添加5个水平(0、500、1 000、1 500和2 000 U/kg)的自产木聚糖酶及1 000 U/kg的商品酶,研究其对肉仔鸡生产性能、养分利用率的影响,并比较自产酶与商品酶饲养效果。结果表明,与对照组比较,添加1 000 U/kg自产木聚糖酶可显著提高日增体质量、蛋白质利用率、能量利用率及粗纤维利用率(P<0.05),并显著降低平均日采食量和料肉比(P<0.05)。添加自产木聚糖酶1 000 U/kg与商品酶1 000 U/kg相比,日增体质量、采食量、料重比和蛋白质、能量及粗纤维利用率均没有显著性差异(P>0.05)。     

一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究

采用基因克隆方法获得酸性蛋白酶基因,在毕赤酵母KM71表达系统中进行表达,并将重组酵母酸性蛋白酶rPrA经过浓缩后研究其酶学性质,初步探究了rPrA对大豆蛋白和酪蛋白的水解情况.结果表明:经过异源表达后的重组毕赤酵母酸性蛋白酶分子量约为44 ku,在pH3.0的发酵条件下酶活最高,可达46.92U/mL.该酸性蛋白酶的最适pH值为3.0,最适温度为35℃.Mn2+对该酶活性有激活作用,多种金属离子对该酶有抑制作用;0.1 mmol/L的Pepstain A即可完全抑制酶活,说明此重组酶的活性中心有天冬氨酸残基.对大豆蛋白和酪蛋白的初步水解试验可知,当E/S为4 000 U/g时,此重组酶对大豆分离蛋白和酪蛋白的水解度分别为9.0％和8.34％.优化发酵条件以及与多种蛋白酶进行复配,该重组蛋白酶将在蛋白水解中有很好的应用前景,有望应用到畜禽饲料加工行业.     

杨树落叶对绵羊的饲喂价值

杨树落叶是北方农区反刍动物潜在的饲料资源,但所含单宁是限制其利用的一个重要因素,本试验通过绵羊消化代谢试验和用聚已二醇-6000去除单宁的方法,对杨树落叶的营养价值及所含单宁对营养价值的影响进行了评价。结果表明,杨树叶随着落叶期的临近,总能、有机物、中性洗涤纤维的含量变化不大,但粗蛋白和总磷显著地下降,酸性洗涤纤维明显地增加。当日粮100％为杨树落叶时,绵羊每公斤代谢体质量每日的采食量为56．53g,杨树落叶干物质的消化能和代谢能分别为7．10和5．82MJ／kg;添加PEG后,对干物质、能量、有机物、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维的消化率无显著的影响,但粗蛋白质的消化率显著提高（P〈0．05）。当绵羊日粮中含有66％和33％的杨树落叶时,添加PEG对尿氮排出量无显著的影响（P〉0．05）,但有降低粪氮排泄量和提高粗蛋白质消化率和氮存留率的趋势。因此,可以推断绵羊日粮中添加100％的杨树叶时,其所含单宁在一定程度上抑制了绵羊对氮的利用,但添加比例在66％以下时,对氮利用抑制作用不显著,可以安全饲喂。     

日粮中添加木聚糖酶对肉鸡生产性能、养分利用率及血液生化指标的影响

将448只1日龄科宝肉鸡随机分为4个处理,每处理7个重复,每重复16只。分别添加4个水平的木聚糖酶(0、5001、0001、500 U/kg),研究其对肉鸡生产性能、养分利用率及血液生化指标的影响。结果表明,与对照组相比,添加500和1 000 U/kg木聚糖酶可显著提高日增量、蛋白质利用率、能量利用率,并显著降低平均日采食量和料肉比(P0.05)。添加1 000 U/kg木聚糖酶可显著提高血液中T3、T4、胰岛素和葡萄糖含量(P0.05)。添加1 500 U/kg木聚糖酶未能显著提高日增量、蛋白质利用率、能量利用率、T3含量和血糖含量。建议在肉鸡玉米-豆粕型日粮中木聚糖酶的添加量为1 000 U/kg,过量添加则对肉鸡生产性能及相关血液指标无明显改善。     

体外消化技术对玉米-豆粕型饲料中添加木聚糖酶作用效果的评定

研究从木聚糖酶生产优选菌黑曲霉FnD5-2出发,制备木聚糖酶,并进行木聚糖酶活力衰变周期测定和体外消化试验.试验结果表明,木聚糖酶在4、25℃条件下,酶活力半衰期分别为30和14d;体外消化试验表明,在玉米-豆粕型饲料中添加木聚糖酶能显著提高干物质、木聚糖和粗蛋白质消化率,其中木聚糖酶800 U· kg“能提高干物质消化率12.2％、木聚糖消化率60.2％、粗蛋白质消化率2.6％（P＜0.05）.     

酸处理·酶制剂对杏鲍菇菌渣还原糖和纤维素降解的影响

为探究酸处理(酸浓度、时间、温度)、酶制剂(纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶)对杏鲍菇菌渣的影响,以河北采集的杏鲍菇菌渣为原料,以总还原糖含量为研究指标,通过主成分分析方法研究影响杏鲍菇菌渣酸处理的因素;以中性洗涤纤维减少量和酸性洗涤纤维减少量为响应值,开展正交试验,分析酶制剂对其的影响。结果表明：40℃条件下,2%和3%酸浓度处理随时间的延长会降解总还原糖;60℃条件下,酸浓度的增加可以减缓总还原糖的降解;80℃条件下,1%和2%酸浓度处理可以促进多糖的降解,提高总还原糖含量。根据主成分分析结果可知,温度与总还原糖含量呈正相关,是影响杏鲍菇菌渣多糖降解的最主要因素。正交试验结果表明,木聚糖酶添加量和纤维素酶添加量是影响中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维降解的最主要因素,最优酶解配方为纤维素酶85 U/mL、木聚糖酶220 U/mL、葡聚糖酶40 U/mL,说明菌渣经酸、酶处理后可作为反刍饲料。     

小麦-玉米-豆粕型日粮中木聚糖体外酶解的研究

采用体外模拟仔猪胃肠道环境的方法,用不同比例(0%~100%)的小麦替代玉米-豆粕(65∶25)型日粮中的玉米,并添加不同水平(0~10000 U/kg)的木聚糖酶,研究了小麦-玉米-豆粕型日粮中木聚糖的体外酶解。结果表明:在3种饲料原料中,小麦可溶性木聚糖含量最高,豆粕次之,玉米最低;随着日粮组合中小麦替代玉米比例的增加,日粮中可溶性木聚糖含量和总木聚糖含量均逐渐增加;各日粮组合中适宜的木聚糖酶添加水平均为6000 U/kg;以1/4玉米-3/4小麦-豆粕日粮组合较佳。     

木聚糖酶在肉鸡日粮中的应用效果研究

[目的]探讨木聚糖酶在玉米-豆粕型日粮中的应用效果及其适宜添加量。[方法]研究在玉米-豆粕型日粮中添加木聚糖酶对肉鸡生长性能、代谢性能、血液指标和消化酶活力的影响,建立木聚糖酶与饲料利用率的定量关系。[结果]在玉米-豆粕型肉鸡日粮中添加800、1 200 U/kg木聚糖酶,能显著降低肉鸡料肉比,提高肉鸡对日粮的蛋白利用率,提高肉鸡前肠食糜中的淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性。但是,添加木聚糖酶对肉鸡血液中葡萄糖含量无显著影响。玉米-豆粕型肉鸡日粮中木聚糖酶的适宜添加量为1 200U/kg。[结论]该研究可为木聚糖酶在肉鸡日粮中的进一步合理应用提供依据。     

植酸酶和木聚糖酶对仔猪钙、磷代谢及骨骼发育的影响

试验采用完全随机设计,将90头35日龄断奶仔猪分为5组,每组设3个重复,每个重复6头,研究在饲粮中添加植酸酶和木聚糖酶对断奶仔猪钙、磷代谢及骨骼发育的影响。5组分别饲喂：①玉米-豆粕基础饲粮（正对照组,PC）;②基础饲粮降低75％磷酸氢钙（负对照组,NC）;③负对照组饲粮＋植酸酶（植酸酶组,phy）;④负对照组饲粮＋木聚糖酶（木聚糖酶组,xy）;⑤负对照组饲粮＋植酸酶＋木聚糖酶（植酸酶-木聚糖酶组,pay—xy）,植酸酶的添加量为750U·kg^-1,木聚糖酶的添加量为4000U·kg^-1。结果表明：单独添加植酸酶和木聚糖酶或两者同时添加均使磷消化率极显著提高（P〈0.01）、排出量显著降低（P〈0．05）,血液磷浓度达到正常磷水平;添加酶的各组钙的消化率显著高于负对照组（植酸酶组、植酸酶一木聚糖酶组P〈0．01;木聚糖酶组P〈0．05）;添加酶的各组猪掌骨灰分均显著高于负对照组（P〈0．05）,但与正对照组无显著差异;添加植酸酶或木聚糖酶仔猪的酿骨强度均显著高于负对照组（P〈0．05）,但木聚糖酶组猪的跟骨强度仍显著低于采食正常磷饲粮的正对照组（P〈0．05）。因此,在断奶仔猪低磷饲粮中添加植酸酶或木聚糖酶都不同程度地促进了钙、磷的消化利用和骨骼生长,但两种酶同时添加没有显著的协同效应。     

木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌中的高效表达

参照Genebank中疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A基因序列,以引物拼接方式,人工合成采用大肠杆菌优势密码子的基因xynA,插入pET-20b载体,获得重组表达载体pET-20b-xynA。重组菌在16℃下诱导效果最好,10 h酶活达到42.05 U/mL,重组酶占全细胞蛋白的47%,粗酶在65℃和pH 5～8条件下很稳定。     

Expression and Characterization of a Thermostable Xylanase Gene xynA from a Themophilic Fungus in Pichia pastoris

The gene of xylanase (xynA) was amplified by RT-PCR from the total RNA of a themophilic fungus Thermomyces lanuginosus SY2. The sequence analysis showed that gene coding region of mature peptide contained 0.585 kb, which coded 194amino acids. The putative amino acid sequence and DNA sequence of xylanase from T. lanuginosus SY2 (GenBank no.:GU166389) were 98.97 and 99.49% identical to the other T. lanuginosus (GenBank no.: U35436). A recombinant plasmid pPIC9K-xynA was constructed by inserting gene xynA into Pichia pastoris secretory vector pPIC9K. Linearized pPIC9K-xynA was transformed into P. pastoris GS115 with the method of electroporation. The recombinant strain was identified by G418 selection and confirmed by PCR analysis. It was induced by 1.0% methanol at 28℃ to express the recombinant xylanase. The results showed that the recombinant xylanase was secreted into extracellular fermentation liquid. The highest enzyme activity of 113.5 IU mL-1 and protein content of 889.7 μg mL-1 were detected for 216 h of induction. The optimal pH value and temperature of the enzyme activity was 5.5 and 65℃, respectively. The xylanase activity retained above 80% from pH value 2.5 to 8.5 for 48 h. The enzyme activity was above 85% at incubation temperature of 55℃.     

绿色木霉固态发酵生产纤维素酶条件优化与酶的固定化

以麸皮与秸秆粉为主要原料,对影响绿色木霉固态发酵的因素如麸皮与秸秆粉的比例、发酵温度、时间、含水率、初始pH值、氮源浓度等进行研究。在单因素实验的基础上,采取正交实验设计,结果表明最佳固体发酵条件为：麸皮与秸秆比例4∶1,含氮量2%,培养温度28℃,培养时间72 h,起始pH 5,接种量10%,含水率175%（相对于固体发酵底物）。在此条件下,CMC 酶活达到1 1325 U·g-1,比未优化条件下酶活6124 U·g-1,提高了849%。利用包埋、交联和交联包埋三种方法对纤维素酶进行固定化,其中交联包埋法效果较好。     

饲料中添加木聚糖酶对刺参幼参生长、消化和体腔液酶活力的影响

为探讨木聚糖酶添加量对刺参Apostichopus japonicus生长、体成分、消化酶和体腔液酶活力的影响,在饲料中添加不同水平(0、0.03%、0.06%、0.09%、0.12%和0.24%)的木聚糖酶制成6种等氮等能试验饲料,试验设6组,每组设3个平行,每个平行放体质量为(7.73±0.09)g的幼参50头,分别用6种饲料进行投喂,共进行56 d养殖试验。结果表明:饲料中添加木聚糖酶显著提高了幼参增重率和特定生长率(P0.05),且0.09%木聚糖酶添加组显著高于其他各组(P0.05),各添加组增重率与对照组相比均显著提高(P0.05);木聚糖酶添加组幼参体壁粗蛋白质含量显著高于对照组(P0.05),0.06%~0.24%木聚糖酶添加组幼参粗脂肪含量显著高于对照组(P0.05);0.06%~0.12%木聚糖酶添加组肠道蛋白酶活力显著高于对照组(P0.05),0.24%添加组淀粉酶活力显著高于其他各组(P0.05);幼参体腔液中溶菌酶、过氧化氢酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力均随木聚糖酶添加量的增加呈先升高后降低的趋势,0.06%~0.12%添加组显著高于对照组(P0.05)。研究表明,饲料中添加木聚糖酶可显著提高刺参生长、体成分、消化酶和体腔液酶活力,以增重率为评价指标,折线回归分析得出,对平均体质量为(7.73±0.09)g的刺参,其饲料中木聚糖酶最适添加量为900 mg/kg。     

小麦日粮中添加木聚糖酶对肉仔鸡生产性能、免疫、消化器官发育和血液代谢激素水平的影响

360只AA肉仔鸡用于研究小麦基础日粮添加木聚糖酶对肉仔鸡生产性能、免疫、消化器官发育和血液代谢激素水平的影响。结果表明:添加木聚糖酶后肉仔鸡0~28 日龄平均日增重提高9 12%(P<0 05),料肉比降低10 87%(P<0 05),平均体重提高9%(P<0 05)。木聚糖酶使肉仔鸡的脾脏、胸腺和法氏囊的相对重量均提高(P>0 05),死淘率下降60%(P<0 05)。木聚糖酶还能降低胰脏、肝脏、小肠、肌胃和腺胃消化器官的相对重量(P>0 05),降低肠道食糜黏度30%(P<0 05)。血液代谢激素结果表明,28 日龄小麦基础日粮肉仔鸡血液T3、TSH、GH、INS代谢激素水平均低于玉米基础日粮(P>0 05),T4、GLU水平高于玉米日粮。添加木聚糖酶对T3、GH、INS激素水平表现出增高趋势(P>0 05),而T4、TSH和GLU水平加酶后有所降低(P>0 05)。     

一种来源于Bispora betulina的酸性木聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究

利用简并PCR和TAIL-PCR技术从嗜酸性真菌Bispora betulina中克隆得到一个酸性木聚糖酶基因xyn11BB。该基因全长1 207 bp,含有三段内含子、一段外显子和一个终止密码子,编码由297个氨基酸组成的蛋白质,推测蛋白质含有一个CBM1结构域。将不带原基因信号肽编码序列的cDNA基因以正确阅读框架克隆到表达载体pPIC9上,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中诱导表达,其表达活性达121.15 U/mL。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为4.5,在酸性条件下具有良好的活性和稳定性,可作为饲料用酶的备选。