葛根芩连汤及葛根素对脂多糖诱导小鼠小肠粘膜微血管内皮细胞分泌一氧化氮和内皮素的影响

为探索葛根芩连汤及葛根素对脂多糖(LPS)诱导小鼠小肠粘膜微血管内皮细胞(MIMVECs)分泌一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)的影响,本实验将葛根芩连汤、葛根素分别与LPS加入细胞板中,降低对原代MIMVECs的病理损伤,在不同时间,采用硝酸还原酶法和ELISA检测MIMVECs分泌的NO和ET-1。结果显示:在3 h~12 h,葛根芩连汤实验组与LPS对照组分泌的NO和ET-1的含量差异显著(p0.05);葛根素实验组与LPS对照组分泌的NO和ET-1的含量差异显著(p0.05)。表明葛根芩连汤和葛根素均能够对LPS损伤MIMVECs起到拮抗的作用,为进一步研究葛根芩连汤及其有效成分对LPS损伤MIMVECs的机理奠定基础。     

葛根芩连口服液体外抑菌及体内免疫调节作用的试验

试验研究葛根芩连口服液体外抑菌及体内免疫调节作用。选用21日龄仔猪40头,随机分为4组,每组10头。Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为饮水中添加葛根芩连口服液,添加量分别为0.2,0.4,0.7 m L/L,同时采用双倍稀释法,测定葛根芩连口服液对大肠杆菌、沙门菌及肠球菌的药敏试验。结果表明,体外抑菌初步考察结果显示,葛根芩连口服液对肠球菌、沙门菌、大肠杆菌均有抑制作用,其MIC值分别为20.83μg/m L、41.7μg/m L、62.5μg/m L,抑菌效果强于单独的葛根、黄芩、黄连提取液及硫酸粘杆菌素。同时仔猪血清中IL-1、IL-4、TNF-α、TNF-γ细胞因子水平有不同程度的提高(P0.05)。结果提示,葛根芩连口服液能提高仔猪血清中细胞因子水平及机体免疫功能,并且对大肠杆菌、沙门菌、肠球菌具有良好体外抑菌作用。     

基于Box-Behnken设计-响应面法优化改良葛根芩连汤提取工艺研究

优化和评价改良葛根芩连汤的提取工艺,为提高其临床适用性以及开发新兽药奠定基础。采用Box-Behnken设计-响应面法,以葛根素含量为评价指标,对提取次数、煎煮时间、加水量3个影响因素进行考察,并对响应面条件下17批样品进行定量分析,得出各因素对葛根素提取率的影响程度。通过Box-Behnken中心组和设计建立数学模型分析回归模型方差以及响应面曲面图,获得改良葛根芩连汤最佳提取工艺为：提取3次,提取时间2 h,加水量9倍。通过工艺验证测得葛根素含量平均值为0.810 8 mg/mL,与预测值0.811 0 mg/mL接近。优化的改良葛根芩连汤最佳提取工艺特征有效成分溶出率高,稳定可行,可为该复方制剂的进一步研究提供理论依据。     

加味葛根芩连汤对湿热泄泻仔猪肠道炎症和损伤修复的作用

通过用加味葛根芩连汤治疗仔猪的湿热泄泻,探讨其对湿热泄泻仔猪肠道的修复作用.选取8～15日龄未断奶仔猪(大白×长白)30头,其中健康仔猪6头,为对照组;有粪色黄褐而臭、小便短赤、舌质红等症状的泄泻仔猪24头,分为湿热泄泻组、加味葛根芩连汤低剂量组、加味葛根芩连汤中剂量组和加味葛根芩连汤高剂量组,每组6头.对照组和湿热泄...     

吡丙醚的残效期及低浓度添食对家蚕结茧影响试验

为探讨大田农药吡丙醚对蚕茧生产的影响,进行了低浓度吡丙醚添食试验。结果表明,吡丙醚对家蚕结茧影响较大,5龄第4天添食1.00×10~(-3) mg/L、5.00×10~(-4) mg/L、2.50×10~(-4) mg/L的吡丙醚24 h,对家蚕的结茧有影响,但到5龄第14天能够全部结茧;用1.00×10~(-2) mg/L、1.00×10~(-3) mg/L的吡丙醚,在5龄不同时间分别添食24 h,添食越晚,结茧率越低;从5龄第4天连续添食6.25×10~(-5) mg/L、3.13×10~(-5) mg/L的吡丙醚、从5龄第5天连续添食6.25×10~(-5) mg/L的吡丙醚,均可造成家蚕不结茧。吡丙醚在桑叶上的残效期超过47 d。     

FQ-PCR法分析葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道肠球菌数量的改变

为了检测葛根芩连汤在治疗抗生素相关性腹泻(AAD)时对模型肠道肠球菌的影响,试验采用氨苄西林灌胃巴马小型猪复制AAD模型,通过制备标准品DNA、构建标准曲线以建立检测肠球菌的FQ-PCR法,利用建立的FQ-PCR法检测对照组(3头)、模型组(3头)、葛根芩连汤7 d治疗组(3头)和葛根芩连汤14 d治疗组(3头)的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠内容物中肠球菌的数量。结果表明:通过标准曲线的构建得到肠球菌的标准曲线方程;与对照组相比,模型组肠道内肠球菌含量显著降低(P0.05);与模型组相比,葛根芩连汤治疗组肠球菌在各个肠段中数量明显上升(P0.05)。说明FQ-PCR法可以用于AAD模型治疗前后肠道肠球菌的数量检测。     

加味葛根芩连汤对湿热泄泻仔猪肠道炎症和损伤修复的作用

通过用加味葛根芩连汤治疗仔猪的湿热泄泻,探讨其对湿热泄泻仔猪肠道的修复作用。选取8~15日龄未断奶仔猪（大白×长白）30头,其中健康仔猪6头,为对照组;有粪色黄褐而臭、小便短赤、舌质红等症状的泄泻仔猪24头,分为湿热泄泻组、加味葛根芩连汤低剂量组、加味葛根芩连汤中剂量组和加味葛根芩连汤高剂量组,每组6头。对照组和湿热泄泻组仔猪灌服生理盐水,药物组仔猪灌服加味葛根芩连汤（按生药量,低、中、高剂量组药物添加量分别为2.5、5.0和10.0 g·d^-1）,连续5 d。在服药的第0、3、5天记录各组仔猪的粪便评分。取对照组、湿热泄泻组、加味葛根芩连汤中剂量组仔猪十二指肠、空肠、回肠和结肠进行组织切片和H.E.染色,取十二指肠进行增殖性细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色;用荧光定量PCR检测对照组、湿热泄泻组、加味葛根芩连汤中剂量组仔猪空肠TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达量变化。湿热泄泻严重破坏了仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠结构,尤其是十二指肠和空肠,十二指肠隐窝处PCNA表达量显著升高（P<0.05）。与对照组相比,湿热泄泻组仔猪空肠TLR4（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-6（P<0.05）mRNA表达量显著升高。相比于湿热泄泻组,加味葛根芩连汤显著降低了仔猪的粪便评分（P<0.05）。中剂量加味葛根芩连汤组仔猪的小肠和结肠的组织结构得到显著改善,十二指肠的肠腔中有不断脱落的绒毛团,绒毛中的PCNA表达量极显著升高（P<0.01）。与湿热泄泻组相比,加味葛根芩连汤中剂量组空肠TLR4（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-6（P<0.05）mRNA表达量显著降低。综上表明,加味葛根芩连汤可通过促进隐窝干细胞的增殖和降低炎症反应对湿热泄泻造成的仔猪肠道损伤进行修复。     

杭白菊水提物对猫肾细胞（F81）的影响

研究菊花水提物对猫肾细胞(F81)的影响。制备杭白菊水提物,采用MTT法检测菊花水提物对F81的形态和增值的影响,用不同浓度的菊花水提物(分别为0 mg/mL,3.910×10~(-3)mg/mL,7.810×10~(-3)mg/mL,1.563×10~(-2)mg/mL,3.125×10~(-2)mg/mL,6.250×10~(-2)mg/mL)于6孔板中处理对数生长期F81细胞,后使用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率。结果发现,菊花水提液组和对照组相比,细胞外观无明显改变,两者的细胞相对增值率基本一致,并且二者细胞周期、凋亡率的测试结果在统计学上无差异。说明菊花水提物对F81细胞的增殖无抑制作用,对细胞的形态无影响,并且对细胞的周期、凋亡率也无影响,菊花水提物在合理的剂量范围对F81细胞无影响,是安全的。     

黄芪水煎液诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖以及分泌IFN-γ的研究

为了探讨黄芪水煎液能否诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)表达IFN-γ,采用MTT和双夹心ELISA分别检测了黄芪水煎液对体外培养的RIMMVECs增殖以及表达IFN-γ的影响。结果显示,黄芪水煎液在25mg/L~3 200mg/L时促进RIMVECs增殖。为更好的研究黄芪水煎液诱导效果,将不同浓度的黄芪水煎液(0.1、1、6、30mg/mL)诱导RIMVECs 6、12、24h检测IFN-γ含量,结果显示,在各检测时间点0.1、1mg/mL组和空白组差异显著(P0.05),6mg/mL组差异极显著(P0.01),30mg/mL组差异不显著(P0.05)。说明黄芪水煎液的抗病毒作用可能与诱导微血管内皮细胞表达IFN-γ有直接的关系,为黄芪"益气解毒"功效的现代阐释提供了试验依据。     

1α,25-二羟维生素D_3对大鼠成骨细胞增殖分化及周期的影响

在SD大鼠成骨细胞(Osteoblast,OB)体外培养体系中添加不同浓度1α,25-二羟维生素D_3(0、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol/L),作用24、48、72 h,测定OB增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性,作用48 h流式细胞仪测定OB周期.结果显示,10~(-9)mol/L 1α,25-二羟维生素D_3作用24、48、72 h均促进OB增殖(P<0.05或P<0.01),抑制ALP活性(P<0.01);10~(-8)、10~(-7)mol/L作用24、48 h,OB增殖率与对照组差异不显著(P>0.05),但24 h时ALP活性均明显升高(P<0.05或P<0.01),48 h则抑制了ALP活性并使OB滞留在G_2/M期(P<0.05或P<0.01);72 h时10~(-7) mol/L组OB增殖率极显著低于其余各组(P<0.01),并使ALP活性升高(P<0.01).表明低浓度1α,25-二羟维生素D_3能促进OB增殖,抑制其分化;高浓度1α,25-二羟维生素D_3能抑制OB增殖,促进其分化,并使细胞滞留在G_2/M期.     

葛根芩连汤对小鼠血清及粪便代谢的影响

为了探索葛根芩连汤对小鼠血清色氨酸及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸的影响,试验通过葛根芩连汤灌胃小鼠,分别在干预7 d和14 d后采集样本,运用高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UVD)法测定小鼠血清中犬尿氨酸(Kyn)、色氨酸(Trp)与5-羟色胺(5-HT)浓度,气相色谱(GC)法测定小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量。结果表明:与空白组相比,用药组小鼠血清Kyn和5-HT浓度明显升高(P0.05),Trp无明显变化(P0.05);给药7 d后粪便中丙酸浓度上升(P0.05),用药14 d后乙酸、丙酸和丁酸浓度极显著升高(P0.01)。说明葛根芩连汤对小鼠血清Trp及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸存在一定的影响。     

葛根芩连注射剂的提取工艺研究

为优化葛根芩连汤的提取工艺,以提取液澄明度和葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量作为考察指标,采用正交试验法对葛根芩连汤的提取、方法进行优化、选择.结果表明,葛根芩连注射剂的最佳提取工艺为:葛根、黄芩、炙甘草3味药混合提取,而黄连单独提取.提取工艺均为11倍量的水、提取2次、每次1.5h.葛根、黄芩、炙甘草3味药合煎,黄连单煎后单个成分的提取率较高,保证了葛根芩连注射剂的质量,有利于大生产.     

马钱子水煎液对兔离体小肠运动性能的影响

为了观察不同浓度的马钱子水煎液对家兔离体小肠运动性能的影响,笔者采用离体器官试验法,将家兔离体肠管置于恒温(38±0.5℃)平滑肌槽中,向平滑肌槽中加入浓度为5 g/L、10 g/L、15 g/L、20 g/L和25 g/L马钱子水煎液,记录给药前后十二指肠、空肠平滑肌运动性能的变化。结果表明,与用药前比较,5 g/L、10 g/L浓度时能促进十二指肠运动性能,15 g/L、20 g/L和25 g/L浓度时抑制十二指肠运动性能;在10 g/L浓度的时促进空肠运动性能;25 g/L时抑制空肠运动性能。说明马钱子水煎液对离体十二指肠和空肠收缩张力,收缩振幅和收缩频率的作用表现为低浓度兴奋、高浓度抑制。     

美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及受体介导机制探究

为了探究美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制,试验采集健康母猪卵巢中的卵母细胞,采用免疫荧光检测猪卵母细胞MT受体表达情况;在体外成熟培养液中分别加入不同浓度的美洛托宁(0,1×10~(-5),1×10~(-6),1×10~(-7) mol/L),筛选对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的最适浓度;根据最佳美洛托宁添加浓度,成熟液中分别添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁、MT受体激动剂、 MT受体颉颃剂和1×10~(-6) mol/L MT受体颉颃剂+1×10~(-6) mol/L美洛托宁,检测美洛托宁及其受体激动剂和颉颃剂对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响;收集添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁24 h处理组、空白对照组、MT受体颉颃剂处理组、美洛托宁和MT受体颉颃剂组母猪卵母细胞复合物,利用试剂盒检测卵母细胞cAMP和cGMP含量。结果表明:当美洛托宁浓度为1×10~(-6)mol/L时,猪卵母细胞的分裂率和囊胚率均达到最高,分别为76.26%和31.48%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L美洛托宁和1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂,两组细胞极体排出率均较高,与空白对照组相比差异显著(P0.05),1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂和1×10~(-6)mol/L美洛托宁的分裂率分别为75.16%和75.33%,囊胚率分别为30.04%和30.36%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L的美洛托宁可以显著降低cAMP的含量和显著升高cGMP的含量(P0.05)。说明美洛托宁通过与细胞膜G蛋白偶联受体结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进猪卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

Ghrelin对猪小肠上皮细胞增殖的影响

以体外分离培养的猪小肠上皮细胞为试验材料,通过分别添加1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9和1×10-10mol/L的Ghrelin液,来测定Ghrelin对猪小肠上皮细胞增殖的影响。试验结果表明,Ghrelin的浓度在1×10-7-1×10-6mol/L时能够显著促进体外培养的猪小肠上皮细胞的增殖(P<0.05),且在刺激后第5天达到增殖高峰。     

葛根芩连汤对感染大肠杆菌小鼠血常规、血液内毒素及炎性细胞因子含量的影响

旨在研究葛根芩连汤预防及治疗感染大肠杆菌K_(88)小鼠的血常规、血液内毒素及炎性细胞因子含量的影响。统计小鼠的死亡率,血常规检测小鼠血液中白细胞、红细胞及血小板的变化,以及采用显色基质鲎试剂法和ELISA方法检测感染小鼠血液里内毒素及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量变化。结果显示,预防试验中葛根芩连汤组小鼠死亡率为20%,治疗试验中葛根芩连汤组死亡率为30%,均极显著地低于模型组(P0.01),且与氟苯尼考组相比没有差异;葛根芩连汤组小鼠血液中白细胞指标均极显著地低于模型组(P0.01),红细胞及血小板指标均极显著地高于模型组(P0.01);葛根芩连汤组小鼠白细胞、中性粒细胞及血小板数目极显著的高于氟苯尼考组(P0.01),葛根芩连汤组小鼠内毒素及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均极显著地低于模型组(P0.01)。结果表明:葛根芩连汤对感染大肠杆菌K_(88)小鼠具有预防与治疗作用,而且在抑制早期炎性因子的释放,降低机体炎症反应水平方面优于氟苯尼考。     

中药黄芩苷体外抗马立克氏病病毒作用的研究

探讨黄芩苷体外抗马立克氏病病毒(MDV)作用,应用细胞病变观察法(CPE)观察MDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的影响,采用Reed-Muench法计算MDV细胞半数感染量(TCID50),以CEF为宿主细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法从黄芩苷对MDV的增殖抑制、感染阻断以及直接灭活3个给药途径探讨黄芩苷抗MDV作用。结果显示:MDV对CEF的TCID50为10-4.5/0.1 m L;3种给药途径下,黄芩苷浓度在312.5~78.13μg/m L范围都具有较好的抗MDV感染作用,并且感染阻断途径下黄芩苷浓度为312.5~156.25μg/m L时能够促进细胞的生长,直接灭活途径下黄芩苷浓度为312.5μg/m L时能够促进细胞的生长。其中感染阻断与直接灭活途径给药比增值抑制途径给药的抗MDV感染作用效果要好,直接杀灭途径给药时的病毒抑制率最高。     

鸡蛋储存过程中细菌生长繁殖规律分析

试验旨在研究新鲜鸡蛋在常温与冷藏保存条件下细菌生长繁殖规律,为鸡蛋的合理保存与消费提供参考。新鲜鸡蛋分2组,分别进行常温与冷藏储存,检测各组鸡蛋0、7、14、21和28 d蛋壳表面及蛋内容物细菌总数。结果显示:蛋壳表面的细菌总数,保存前(0 d)为8.5×10~3cfu/m L,常温与冷藏条件下均出现稳定增长,常温保存增长较快。28 d时常温与冷藏保存细菌总数分别达到3.99×10~4cfu/m L和3.25×10~4cfu/m L(P0.05);蛋内容物中细菌总数,保存前(0 d)与冷藏保存7 d均未检出细菌,常温保存14 d后细菌总数快速增加,常温和冷藏条件下28 d分别达到3.97×10~3cfu/m L和8.15×102cfu/m L(P0.01)。蛋壳表面与内容物细菌总数随保存时间延长呈上升趋势,低温保存能够抑制细菌生长,延长鸡蛋的保质期。     

LDL对小鼠精原干细胞冷冻复苏的影响试验

本试验以7d雄性昆系小白鼠为试验材料,采用非渗透性冷冻保护剂低密度脂蛋白(LDL),以1mg/m L、2mg/m L、3mg/m L和4mg/m L四种不同的浓度梯度添加到基础液中,分别在冷冻后1d、3d、和7d时检测小鼠精原干细胞的冻后复苏率。结果表明,-80℃超低温冰箱冷冻保存小鼠精原干细胞时,冷冻1d时,基础液中添加2mg/m L的LDL精原干细胞的复苏效果最高,达到86.39%,与基础液中添加1mg/m L的LDL组差异不显著,但显著优于其他组(P0.05)。当冷冻7d时,基础液中添加2mg/m L LDL时精原干细胞的复苏率显著高于其他组(P0.05)。     

黄芪提取物对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成的影响

通过中药黄芪提取物对小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3增殖,细胞周期及胶原合成的影响,为黄芪在创伤愈合中的作用提供依据。试验以体外培养小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3,细胞传代,随机分为两组,对照组和药物干预组,加入不同浓度的黄芪提取物干预细胞24 h,分别采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期比例,羟脯氨酸试剂盒检测细胞胶原分泌含量。试验结果表明,黄芪提取物浓度为6.5X10^(-5)g/L时,吸光度与对照组相比,差异显著(P<0.05),当黄芪提取物浓度为8×10(-5)g/L时,吸光度与对照组相比,差异显著(P<0.05),当黄芪提取物浓度为8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L,3.2×10(-3)g/L,3.2×10^(-4)g/L时,干预细胞24 h,吸光度较对照组差异极显著(P<0.01)。采用流式细胞术检测细胞周期同样证明了在浓度8×10(-4)g/L时,干预细胞24 h,吸光度较对照组差异极显著(P<0.01)。采用流式细胞术检测细胞周期同样证明了在浓度8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L,3.2×10(-3)g/L,3.2×10^(-4)g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P<0.01),羟脯氨酸试剂盒检测黄芪提取物干预细胞合成胶原含量均有增加,且8×10(-4)g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P<0.01),羟脯氨酸试剂盒检测黄芪提取物干预细胞合成胶原含量均有增加,且8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L浓度时,差异极显著(P<0.01)。从而表明,黄芪提取物能促进NIH-3T3细胞增殖,促进胶原合成。