猪流行性腹泻免疫抗体的ELISA检测及其与琼脂扩散试验相关性分析

为了解不同免疫程序对母猪初乳中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平的影响,以及PEDV抗体的ELISA与琼脂扩散试验(琼扩试验)检测相关性,选取5家免疫程序不同的大型猪场,用PEDV IgA抗体ELISA检测试剂盒对其初乳抗体水平进行检测,并根据检测结果,选OD值大小不同的5组初乳样本,琼扩法检测其PEDV抗体效价并分析。结果显示,5家猪场初乳PEDV IgA抗体阳性率均较高,阳性率为94.00%~100%,阳性样本平均OD值为1.858 8~2.148 0,差异不显著;PEDV抗体琼扩几何平均效价与ELISA检测的OD值存在正相关性。分析表明,母猪产前进行猪流行性腹泻活疫苗和灭活苗各一次的组合免疫较为合理;对PEDV抗体检测琼扩法一定程度上可做为ELISA法的替代。     

竞争ELISA法检测布病终止反应后影响OD值的因素探讨

在用竞争ELISA法检测布鲁氏菌病过程中,影响因素有很多,试验终止反应后这一步骤常被忽略,本文就该步骤影响OD值的因素进行探讨.结果 表明,气泡的存在及静置时长均会增大反应孔的OD值,从而影响结果的准确性.     

间接ELISA检测奶牛宫颈黏液ASA免疫不孕

为建立检测奶牛宫颈黏液ASA免疫不孕的间接ELISA方法,以精子膜蛋白为包被抗原,进行奶牛宫颈黏液ASA的间接ELISA的优化试验。对27头ASA阳性不孕和29头ASA阳性可孕奶牛进行了间接ELISA检测标准的确定试验;对137头奶牛的宫颈黏液ASA免疫不孕进行间接ELISA临床检测。奶牛宫颈黏液ASA的间接ELISA优化条件为:抗原包被量为5μg/mL,宫颈黏液稀释度为1:5,宫颈黏液反应时间1h,二抗反应时间1.5h;奶牛宫颈黏液ASA免疫不孕检测的判定标准为:当样品OD490nm值大于0.513时判定为ASA阳性免疫不孕,当样品OD490nm值小于0.410时可孕,当样品OD490nm值介于0.410~0.513时为ASA阳性疑似,重复试验的变异系数均小于10%。对临床137份宫颈黏液样品进行检测,发现13头ASA阳性免疫不孕奶牛都不能受孕,而98头阴性结果牛中有89头怀孕。结果表明,间接ELISA可以有效检测奶牛宫颈黏液ASA免疫不孕。     

血清冻融次数对猪瘟抗体效价的影响

为研究反复冻融是否对猪瘟抗体效价产生影响,选取了60份不同抗体水平的猪瘟抗体阳性血清,每份血清分装6管作不同冻融处理。对不同冻融处理的血清进行物理性状观察和ELISA检测,并采用随机化区组设计资料秩和检验方法对检测OD值进行比较分析。结果发现不同次数冻融处理的血清物理性状观察无明显差异,ELISA检测OD值无统计学差异,表明短期内可完成ELISA检测的血清可直接于4℃冷藏保存或-20℃冻存,多次冻融不会造成血清猪瘟抗体效价的显著降低。     

猪口蹄疫O型免疫后不同时间抗体检测与分析

为了更好了解猪口蹄疫O型免疫后不同时间的抗体水平,选取4个规模化猪场共120头仔猪,用口蹄疫（FMD）O型抗体ELISA检测试剂盒进行口蹄疫O型免疫后不同时间抗体水平检测,获得首免及二免后不同时间血样的OD值及检测结果,并对检测结果进行分析总结,以期为今后猪口蹄疫O型抗体评价及科学防控提供参考依据。     

牛结核病刺激上清液在布病检疫中的应用

牛结核病和布病的检疫常称之为"两病"检疫。近年来牛结核病γ-干扰素酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用日益增加,为了简化"两病"检疫,笔者尝试将牛结核病检测样品即牛型结核菌素(PPD)刺激上清液用于布病检测,用虎红平板凝集试验(RBT)、间接ELISA(i ELISA)试验和试纸条试验同时检测90头牛的血清样品和刺激上清液样品。结果表明:在RBT中,牛型PPD刺激上清液样品均呈非特异性阳性反应;在i ELISA试验中,血清样品的S/P值(样品OD值/阳性对照OD值×100%)平均值(194.84%)显著高于刺激上清液样品的平均值(183.57%,P0.05),调整刺激上清液样品的判定标准后进行卡方检验,两种样品的结果差异不显著(P0.05);在试纸条试验中,刺激上清液样品的阳性率(43.33%)显著大于血清样品的阳性率(28.89%,P0.05)。说明牛结核病γ-干扰素ELISA检测样品不能作为布病RBT和试纸条试验的样品,但可以作为布病i ELISA试验的样品。     

抗牛白血病试验羊肿瘤细胞膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立4株分泌抗牛白血病试验羊肿瘤细胞膜抗原(TAA)单克隆抗体细胞株,用抗鼠 Ig 亚类标准血清双扩证明4株均为 IgG,轻链为 K,染色体数平均为104.3次克隆,4次复苏,4个月传代培养,细胞分泌抗体稳定.用 TAA 包被的 ELISA 检测证明免疫鼠血清、单克隆抗体呈阳性反应,健康鼠血清呈阴性反应.中和试验 OD值与健康对照相同,抑制试验单抗 OD 值明显下降.建立了完整细胞包被的 ELISA 和间接免疫荧光检测试验羊肿瘤细胞的方法,并证明瘤细胞膜呈阳性反应,而健康羊外周淋巴及淋巴结中的淋巴细胞呈阴性反应,表现了很高的特异性,为提高牛白血病肿瘤细胞诊断和研究其肿瘤细胞发生提供了新试剂.     

狂犬病病毒核蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

将狂犬病病毒核蛋白(N)与麦芽糖结合蛋白(MBP)在大肠杆菌中融合表达。采用Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该重组融合蛋白的抗原性,并建立了间接ELISA方法检测狂犬病病毒特异性抗体。ELISA结果与快速荧光抑制试验(RFFIT)检测的中和抗体进行比较,RFFIT检测的中和效价与ELISA检测的OD值相关性很好(r=0.943 6),并且ELISA的敏感性和特异性分别为93.4%和100%。     

猪全血溶血对猪瘟抗体检测的影响

为研究猪全血溶血是否对猪瘟抗体效价产生影响,在明溪县某规模养殖场选择注射过2次猪瘟疫苗的肉猪20头,抽取全血各2份,共40份,相同条件保存,使其中1份溶血。将进行溶血处理和未处理的全血离心出的血清进行物理性状观察和ELISA检测,并对检测的OD值进行比较分析。结果发现,是否溶血对ELISA检测的OD值无统计学差异,表明短期内只要保存得当,是否溶血不会造成猪瘟抗体效价的显著降低。     

法氏囊疫苗免疫效果三种不同评价方法的比较

为了选出法氏囊疫苗免疫效果评估的合适方法,本研究使用酶联免疫吸附试验(ELISA)、琼脂糖扩散试验(AGP)和中和抗体检测3种方法对6种法氏囊灭活疫苗免疫后28 d的抗体水平进行评估,同时,对采血鸡进行攻毒,攻毒后4 d剖检所有鸡,观察法氏囊病变,评估3种抗体水平与攻毒保护之间的相关性;结果显示,ELISA和AGP方法检测免后血清结果相对较高,中和试验方法检测免后抗体值较低;ELISA和AGP方法检测疫苗免后抗体水平与攻毒保护结果基本一致,使用中和试验方法检测免后抗体与攻毒保护相关性较差;建议在实际生产中使用ELISA和AGP方法进行法氏囊疫苗免疫效果的评估。     

WCA-ELISA检测猪链球菌2型抗体

本试验应用菌体包被间接ELISA分别对70份假定阳性血清和70份假定阴性血清进行1:100、1:200、1:400、1:800稀释检测,利用血清流行病学原理对检测结果进行分析,确定了检测方法的最佳单一稀释度,以及判定阳性血清和阴性血清的OD值。并利用建立的间接ELISA对1997年采集的江苏地区的猪血清进行了检测。试验结果发现在1998年猪链球菌大暴发的前期,阳性率高达48%,尤其是双甸马塘地区,阳性率高达72.4%。     

用ELISA测定炭疽保护性抗原免疫家兔的抗体水平

用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炭疽保护性抗原免疫的家兔的抗体水平,敏感性和特异性高,重复性好。被免疫兔血清OD值与相应的动物对强毒炭疽杆菌攻击的耐受力呈正相关(r=0.89)。OD值为0.25时,保护率为44.4%;OD值为0.4时,保护率83%;OD值为0.9时,保护率达90%。试验还证明,用保护性抗原油乳剂苗和铝胶苗一次免疫注射,油乳剂苗免疫家兔血清OD值平均数为0.739,而铝胶苗免疫的血清OD值均数为0.221,两者的差异非常显著(p≤0.001)。     

异源抗原在建立间接酶联免疫试验(ELISA)检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文利用vero细胞增殖的IBDN抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）抗体。该法快速，敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过30份血清样品ELISA致价（ET）的对数值，（logET）与血清P／N值（待检血清OD也与阴性血清OD值之比）的线性回归分析，得直线方程y=3．0589＋0．0739x（r=0．9174），从而血清样品的ET可通过血清单一稀释度的P／N值来计算。用不同抗原来源作ELISA表明，从vero细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（CEF）细胞增殖的抗原可提高检测血清OD值近20％，表现出异源抗原县有更高的特异性。     

检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体间接ELISA方法的建立

本研究以纯化的鸭坦布苏病毒WR株为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体的间接ELISA方法。经优化后确定检测样品的结果P/N([样品孔OD450nm-空白孔OD450nm)/(阴性孔OD450nm-空白孔OD450nm)]≥2.1判为阳性,<1.5者为阴性;1.5≤P/N<2.1者判为可疑,重检后仍可疑者定为阴性。以建立的间接ELISA方法对H9亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸭瘟病毒和大肠杆菌卵黄抗体进行了检测,结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。经重复性试验表明,该方法重复性好。本方法的建立对开产种鸭和蛋鸭坦布苏病毒疫苗免疫效果的评价具有十分重要的意义。     

同源血浆及血清中蓝舌病病毒抗体ELISA检测结果比较

为简化动物血液样品中蓝舌病病毒（BTV）检测及研究方法,采用2种酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自云南省德宏州芒市一家肉牛养殖场的30对牛同源血浆及血清样品进行BTV总抗体及VP7抗体检测。BTV总抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为100%,ΔPI在±5%以内的样品占87%;VP7抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为93%,ΔOD在±0.05范围内的样品占87%。结果表明：利用ELISA检测动物血样中BTV抗体时,血浆样品可替代血清样品;血浆样品的溶血程度不影响检测结果,但粗制血浆中的非溶解性杂质可能影响检测结果,需要使用离心除杂后的血浆样品。     

用PPA-ELISA间接法检测兔病毒性出血症(RHDV)肝脏抗原及血清抗体的研究

在应用PPA—ELISA间接法检测兔病毒性出血症血清抗体的基础上,将标准阳性血清用肝脏抗原进行吸收,以标准阳性血清OD值的变化来判定有无肝脏抗原。本试验共检测血清171份,肝脏57份。试验结果表明,本方法简便、特异性强、灵敏度高、结果便于判定。     

蔗糖密度梯度法定量口蹄疫完整病毒粒子（146S）的特异性研究

为验证蔗糖密度梯度法检测口蹄疫完整病毒粒子（146S）的特异性,选择pH值6．0、5．0、4．0PBS酸解处理3批提纯后的146S灭活抗原液,并将酸解后样品进行146S检测,发现8至11级份OD259峰值消失,146S含量由酸解前的1．77、6．60、3．67μg／mL至酸解后完全不能检测到。同时对3批不含病毒的细胞液按抗原纯化灭活工艺处理后进行146S检测,结果显示3批细胞液在8至11级份均没有明显吸收峰,而且其OD259值与PBS空白对照OD259值基本平行一致,说明不含病毒的细胞液对检测结果没有明显干扰。试验证明,蔗糖密度梯度法定量FMD病毒液中146S含量具有很好的特异性。     

应用干血纸ELISA诊断猪囊虫病的研究

对试验猪用猪囊尾蚴细胞抗原免疫前、感染前、免疫后及用猪带绦虫卵感染后每隔10d经前腔静脉采血1次，分离血清，同时制备全血干血纸，分别用血清ELISA和干血纸ELISA进行检测。结果免疫组猪均在免疫后12d检出抗体；攻击感染组猪在攻击虫卵20d检出抗体，21d抗体水平达高峰，并一直持续到32周；阴性对照组的OD值一直在0.24～0.65。2种样品的检测结果基本一致。     

猪瘟免疫程序的研究

采用HRP—SPA—ELISA方法,在同一猪场相同的饲养条件下,对5种常用猪瘟免疫程序免疫后不同时间的猪瘟免疫抗体水平进行了研究.结果表明:超前免疫,1月龄1次免疫,2月龄1次免疫和1月龄、2月龄2次免疫猪均有良好的免疫应答,90日龄检测80倍稀释血清的ELISA OD值均在0.30以上(0.31～0.48),120～240日龄血清ELISA抗体一直保持在较高水乎(OD值0.42～0.66);而超前、2月龄2次免疫猪的免疫应答明显低于前4种免疫程序,120日龄时的ELISA OD值仅为0.25,此后上升也较缓慢,至240日龄时才达0.43.根据本研究结果,综合过去的报道,建议在“猪瘟控制地区”采用1月龄1次免疫或2月龄1次免疫,在“猪瘟未控制地区”采用1月龄1次免疫或超前免疫.     

水貂循环免疫复合物检测方法的建立及应用

本试验建立了检测水貂循环免疫复合物(CIC)的微量PEG沉淀比浊法和固相C_(1q)—SPA—ELISA.用这两种方法检测了38例健康水貂血清、126例阿留申病(AD)病貂血清.微量PEG沉淀比浊法的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.081±0.042,AD病貂0.198±0.066;固相C_(1q)—SPA—ELISA的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.245±0.057,AD病貂0.503±0.167,敏感性为0.25μg/mL.经统计学处理,健康水貂与AD病貂血清OD值之间呈极显著差异(P<0.01),表明水貂阿留申病的病理过程与CTC有关.建立的两种方法均具有快速、简便、重复性好和敏感性高等特点,两种方法的相关性显著.