水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

根据水貂阿留申病毒（Aleutian mink disease virus,AMDV）基因序列（GenBank登录号：NC_001662.1）设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥10²拷贝/μL具有良好的特异性和重复性。同时利用该方法对8份疑似AMDV血清进行检测,结果6份阳性,阳性率为75%。本研究为水貂阿留申病的鉴别诊断及净群根除奠定了技术基础。     

水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用

为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒(AMDV)纳米PCR检测方法,根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物,对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,此纳米PCR的最佳退火温度为51℃,普通PCR为55℃;加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8nmol·L-1,纳米PCR与普通PCR产物测序相似性大于99%。特异性检测表明该纳米PCR方法只扩增AMDV而不能扩增犬瘟热病毒和水貂肠炎细小病毒。在粪尿样品检测中该纳米PCR敏感性比普通PCR高10倍。检测40份临床样品,结果表明该方法比对流免疫电泳检测敏感性提高,从而为用粪、尿等低病毒样品检测水貂阿留申病提供了一种新的有效方法。     

水貂阿留申病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、敏感检测水貂阿留申病毒(AMDV)的方法,本研究根据AMDV的VP2基因保守区设计特异性引物和MGB探针,并优化检测反应条件,建立了AMDV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL~1.0×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数(R~2)为0.998。该方法仅对AMDV的靶基因扩增呈阳性,而对猪细小病毒、犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好。该方法对AMDV检测的灵敏度为10拷贝/μL,为普通PCR灵敏度的100倍;组内和组间重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。应用建立方法和普通PCR方法分别对40份疑似临床组织病料样品进行检测,该方法检出率比普通PCR高约7.5%。本研究结果表明建立的AMDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于对AMDV的快速定量检测。     

水貂阿留申病的检测技术及应用效果

<正>为了有效地控制水貂阿留申病的发生,保护养貂业的健康发展,提高仔貂的产仔和成活率,提高经济效益,我们在2005年1月10日-2005年10月10日,用对流电泳免疫法对长江路街道办事处高家台养貂场进行了水貂阿留申病的检测试验。     

水貂阿留申病

<正> 养貂业的最大病害——水貂阿留申病,广泛流行于世界养貂国家,我国养貂场(点)也有发生。由于该病流行面广,发病、死亡率高,并伴发公貂性机能不全、无精子,母貂空怀、流产、死胎及感染子代等,给水貂养殖业造成较大的经济损失。该病最早在阿留申彩貂中发现,起初被认为是一种遗传性疾病。其特征是潜伏期长,多呈慢性经过,血清γ—球蛋白异常增高,持续性病毒血症,动脉炎,肾小球性肾炎和肝炎,浆细胞增多,因此又有γ—球蛋白增多症或浆细胞增多症之称。     

水貂阿留申病

阿留申病(Aleutian disease,下称AD),是水貂的一种慢性进行性病毒病,又称浆细胞增多症(Plasmaeytosis)。本病以体重减轻,口渴狂饮,齿龈溃疡性出血,排煤焦油样粪便,脾脏肿大,淋巴结炎,全身浆细胞增多症,高球蛋白血症,坏死性动脉管炎和免疫复合体介导性肾小球肾炎为主要特征。本病可以大大增加母兽的空怀率和新生仔兽的死亡率,降低产仔率,对养貂生产危害极大,是当前养貂业面临的最重要的一种传染病。阿留申病1941年最早发现于美国Oregon州一头具有特殊遗传性毛色基因的“阿留申”兰色水貂。由于其皮毛与阿留申狐相似而得名。稀有而昂贵的毛皮,使得这种兰貂在北美被广泛养殖,阿留申病也随之传开。     

水貂阿留申病

阿留申病是水貂特有的一种病程进展极为缓慢的传染病，发病率高，死亡率大，严重影响水貂繁殖机能，对养貂业危害极大。病的主要表现是浆细胞增多，血清中丙种球蛋白增高、持续性病毒血症、肾小球性肾炎，伴有母兽空怀显著增加和秋冬季节的大批死亡。长期以来本病被认为是一种遗传性疾病，1962年被证实为病毒性传染病。现世界各国均有发生。     

水貂阿留申病

阿留申病(Aleutian Disease,AD)是水貂的慢性、进行性,病毒性传染病,其特征是浆细胞增多,γ-球蛋白量增高,持续性毒血症,脾脏肿大,淋巴结出现病变,体重下降,坏死性动脉炎和增生性肾小球肾炎等。阿留申基因型(阿留申aa或Chediak-Higashi综合症C—HS型)比非阿留申     

水貂阿留申病

这是由阿留申病病毒引起的一种缓慢发展的进行性衰弱的疾病;侵害网状内皮系统,以浆细胞弥漫性增生,产生多量 r～球蛋白以及持续病毒血症为特征。该病病毒为 DNA 型。本病流行于全世界,有的饲养场,75%的水貂患有本病。除扑杀外,现无防治本病的有效方法。有些迹象提示人类也许对此病毒有某种易感性。被感染的水貂呈现食欲减少,进行性消瘦,严重衰弱和贫血,尿毒症,强烈的口渴。有     

水貂阿留申病的诊断方法

<正>阿留申病是水貂特有的一种病程进展极为缓慢的病毒性传染病,病的主要特征是潜伏期长,可垂直传播,终生病毒血症,浆细胞增多、血清丙种球蛋白增高,多发性动脉血管炎、肾小球性肾炎和肝炎,病貂繁殖能力明显下降,在秋冬季节有时可大批死亡。本病在欧、美、亚洲等20多个国家均有发生,我国有许多貂场均有本病。据国内有的研究调查报道,对12000头水貂统计,种兽群发病率为20%-30%,皮群兽高     

我国水貂阿留申病的检测及净化

水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,AD),是以水貂繁殖能力下降、消痩、自身免疫病、高免疫球蛋白血症、肾衰竭死亡为基本特征的一种病毒性传染病。目前该病在我国呈现较高的感染率(60%～70%),严重影响我国养貂业的健康可持续发展。文中针对我国水貂阿留申病的流行及危害现状,提出合理的检测方法,为提升并稳定阳性貂的生产性能,逐步建立国内优良水貂育种群提供参考。     

水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板,通过各反应条件的优化,初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板,按照本研究建立的ddPCR方法检测,评估其特异性;将1.43×10⁷拷贝/μL～1.43×10⁰拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测,评估该方法的敏感性;分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验,以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示,该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示,该方法仅可检...     

水貂阿留申病的检测技术总结

为了有效地控制水貂阿留申病的发生 ,保护养貂业的健康发展 ,提高养貂的经济效益 ,用对流电泳免疫法进行了水貂阿留申病的检测。1　材料与方法被检血清 :采自某养貂场自留种貂 440只 ,其中母貂 35 0只 ,公貂 90只。貂趾尖毛细血管采血 ,2 0 0 0～ 30 0 0 rpm离心 2～ 5 min,分离血清备用。抗原 :采用猫肾传代细胞培养的阿留申病毒国家标准毒株 vtah- 1研制而成 ,专供水貂阿留申病对流免疫电泳实验诊断用。由农业部动物检疫所提供。阿留申病阳性和阴性参考血清 ,用于对照 ,由农业部动物检疫所提供。琼脂糖凝板的制备 ,取 3mm厚 1 0× 9cm的普…     

水貂阿留申病免疫效果方法的确立及应用

用三种不同的生物制剂免疫阿留申病抗体阴性水貂，接种后如果循环免疫复合物含量较低（ＰＥＧ沉淀法的ＯＤ值为０．０９以下）可以获得一定的免疫力，抗体效价的高低不能决定其是否免疫；ＡＮＡＥ＾＋细胞百分率对判断阿留申产史疫确定或失败具有重要参考价值。     

秦皇岛地区水貂阿留申病的检测

为了确定秦皇岛地区水貂阿留申病的感染状况,采用对流免疫电泳法对该地区3个水貂养殖场送检的442个样品进行阿留申病检测。结果表明:水貂阿留申病阳性率为21.93%~71.70%,平均阳性率为31.67%,可见秦皇岛地区水貂阿留申病的感染比较严重。     

水貂阿留申病概述

主要对水貂阿留申病的病原学、流行病学、致病机理、临床症状、病理变化、诊断和防制等方面进行了概述,以便对该病诊断和防制提供参考。     

水貂阿留申病研究进展

主要对国内外阿留申病毒的分子生物学进展及阿留申病的病理进行了综述。     

水貂阿留申病调查报告

<正> 一、疫情调查 水貂阿留申病又称浆细胞增多症,是一种病毒性疾病。由于目前对本病尚无有效疗法和免疫学防制措施,一旦感染发病,不仅对繁殖有极大影响,还会引起病貂大量死亡。 某水貂场于1980年和1982年两次暴发水貂阿留申病,病情急剧,病貂大量死亡,死亡率分别为57.6％和50％。由于感染母貂空怀增多和流产、死胎、胚胎吸收的发生,使生产受到严重影响,1980年群平均产仔和仔貂成活率,分别由发病前(1979年)的4.29只和91.9％下降为1.02只和15％。据另一貂场资料统计,1981年发生本病,当年群平均产仔由1980年的4.21只下降到0.4只、仔貂成活率同时大幅度下降,该场全年亏损达15万元。     

水貂阿留申病研究进展

水貂阿留申病(AD)是由阿留申病毒(ADV)引起的水貂的一种慢性、进行性传染病。本病以病毒持续性感染、典型的获得性免疫缺陷综合症为特征。本病于1956年首次报道,但直到1973年才分离到病毒,1977年才在细胞上培养病毒成功。此后,对本病的研究工作进展迅速,获得了对本病更为全面、详细、深入的认识。现将近年来对AD研究的进展情况介绍如下。