牛孤雌生殖胚与体外受精胚体外发育比较

从卵巢采集的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)经体外成熟培养24 h后,随机分为2组分别用于孤雌激活与体外受精.在相同培养条件下,比较孤雌生殖胚与体外受精胚的发育率和发育速度.结果表明将牛孤雌生殖胚与体外受精胚分别置于mSOFaa和mBECMaa培养液中培养,卵裂率(89.3%vs.80.1%;83.2%vs.82.5%)、囊胚发育率(27.5%vs.24.0%;28.9%vs.21.9%)和孵化率(58.7%vs.56.7%;51.5%vs.53.3%),均无显著差异(P＞0.05);孤雌生殖胚与体外受精胚在体外发育的速度基本相同.对孤雌生殖胚胎进行培养可以代替体外受精胚胎筛选最佳体外培养系统.     

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明,猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强度130V/min,脉冲时程80μs的1次脉冲激活,即130V/mm-80μs-1次,其囊胚(发育)率为18.92%±8.48%(P>0.05);离子霉素激活的最佳条件为15μmol/L、激活时间40min,其囊胚率为21.27%±8.54%(P>0.05);乙醇激活最佳参数以9%乙醇激活处理3min,囊胚率为13.33%±7.64%。进一步对比试验表明,电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P<0.05),而囊胚率和细胞数差异不显著(P>0.05)。     

不同共培养细胞类型对绵羊孤雌生殖胚发育的影响

体外成熟的绵羊卵母细胞经孤雌激活4 h后,分别在5种体细胞单层(成熟前颗粒细胞、成熟后颗粒细胞、输卵管壶腹部上皮细胞、输卵管峡部上皮细胞、子宫内膜细胞)中进行共培养,比较其对绵羊孤雌生殖胚体外发育的影响.结果表明:成熟前后颗粒细胞对绵羊孤雌胚体外发育的卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05);但输卵管壶腹部上皮细胞(27.5%)、子宫内膜细胞组囊胚率(27.7%)高于输卵管峡部上皮细胞和颗粒细胞(17.7%、20.3%),且差异显著(P<0.05);壶腹部上皮细胞与子宫内膜细胞在囊胚率上差异不显著(P>0.05).说明在绵羊孤雌生殖胚体外发育中,选择成熟前及成熟后的颗粒细胞都可达到相同的共培养效果;使用输卵管壶腹部上皮细胞、子宫内膜细胞进行共培养效果优于输卵管峡部上皮细胞和颗粒细胞,可以得到较高的囊胚率.     

电脉冲及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究

实验研究了不同电脉冲条件、6-DMAP作用不同时间以及二者联合使用时对注射hCG后18～19h采集的小鼠卵母细胞孤雌激活及发育的效果。结果表明：4、鼠卵母细胞电激活后，放入2mmol／L6-DMAP的CZB中作用6h，其激活率和囊胚率都显著高于单独使用一种激活方法。其中场强2．0kv／cm，脉宽80μS，3次脉冲结合6-DMAP组的激活率和囊胚发育率最高，与其他两组差异显著。     

成熟液和时间对绵羊体外孤雌胚发育的影响

颗粒细胞在卵母细胞体外成熟和体外受精进程中具有重要的作用,能显著提高卵母细胞体外成熟和体外受精率;但也有研究发现,颗粒细胞存在与否并不影响卵母细胞体外成熟和体外受精率,甚至还可显著降低其体外成熟率和体外受精率.     

激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响

系统探讨了几种激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响。体外成熟 (IVM) 2 6 h的水牛卵母细胞经 7%乙醇(EH)、钙离子载体 (A2 3187)或离子霉素 (Ion)激活处理 5 min后 ,在 2 m mol/ L 6 -甲二氨基嘌呤 (6 - DMAP)中培养 3～4 h,然后再继续培养 6～ 11d,观察其胚胎发育情况。结果发现 ,5μmol/ L Ion激活处理的水牛卵母细胞分裂率显著高于 EH处理的卵母细胞 (6 3.0 % vs5 4 .2 % ,P<0 .0 5 ) ,其原核形成率也显著高于 EH处理的卵母细胞。激活处理前 ,无Ca2 培养液孵育时间的长短 ,对水牛卵母细胞孤雌发育无显著影响 (P>0 .0 5 )。如用 A2 3187激活处理水牛卵母细胞 ,其激活分裂率则随着浓度的升高而提高。从而表明 ,5 μmol/ L Ion可有效激活水牛卵母细胞     

不同激活方法对绵羊胞质内显微授精的影响

为了研究激活方法对绵羊胞质内显微授精的影响,分别对卵子采用:①假注射,不激活;②注射精子,不激活;③假注射,Ionomysin+6DMAP激活;④注射精子,Ethanol+6DMAP激活;⑤注射精子,Ionomysin+6DMAP激活。结果表明:第1、2组无论注射精子与否,但都不激活,卵裂率(7.5%、5.3%)和囊胚发育率(0.94%、1.8%)都很低,差异均不显著(P>0.05)。第3组与第4、5组比较,卵裂率(65.7%、71.6%、75.6%;P>0.05)无明显差异,但囊胚发育率(5.7%、15.6%、26.0%;P<0.01)却明显低于4、5组。采用Ethanol+6DMAP和Ionomysin+6DMAP2种方法处理时,卵裂率差异不显著(71.6%、75.6%;P>0.05),但囊胚发育率前者要显著低于后者(15.6%、26.0%;P<0.05)     

季节效应对绵羊体外受精的影响

试验结果表明进行体外受精试验时，不同季节绵羊体外受精的结果差异很大。卵母细胞的成熟率、受精率、囊胚率均以秋季处理的为高，尤其是卵母细胞的体外成熟率（P＜0.01）秋季为80.78％。     

不同化学激活方法和电激活参数对猪体外成熟卵母细胞早期孤雌发育的影响

利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在体外成熟培养44～48 h后,对核成熟卵母细胞进行激活.试验1为不同化学激活方法10% 乙醇 10 mg/L 放线菌酮组、2.5 mmol/L 氯化锶 10 mg/L放线菌酮组、5 μmol/L离子霉素 2.5 mmol/L 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)组、200 μmol/L 硫柳汞 8 mmol/L二硫苏糖醇组和对照组(不用任何激活剂).试验2为用不同电场强度和脉冲时程进行电激活之后放入胚胎培养液中进行体外培养7 d.结果显示,(1)4种不同化学激活方法处理卵子的1原核形成率、2原核形成率和原核形成率都显著比对照组高(P＜0.05),其中离子霉素 6-DMAP组的2原核形成率和总原核形成率最高,分别为(23.1±3.5)%和(65.2±3.5)%,显著高于其他处理组(P＜0.05);(2)4种不同化学激活方法处理组的囊胚率都比对照组高(P＜0.01),其中离子霉素 6-DMAP组的卵裂率及囊胚率最高,分别为(46.6±18.5)% 和(5.6±4.2)%;(3)本试验所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响;(4)电场强度为1.7 kV/cm、脉冲时程为50、70 μs时猪体外成熟卵母细胞激活效果最好,卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数分别为(77.4±9.7)%、(12.4±3.7)%、(17.6±5.9)%和(75.1±10.6)%、(12.3±2.6)%、(19.1±8.1).以上结果说明本试验所用的4种化学激活方法均能有效激活猪体外成熟卵母细胞,其中离子霉素 6-DMAP的激活效果最理想;在本实验室条件下,采用1.7 kV/cm的电场强度、50～70 μs的脉冲时程均能有效地激活猪体外成熟卵母细胞;本试验所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响.     

不同采卵方式对绵羊卵母细胞质量、体外成熟及体外受精的影响

随着胚胎工程及胚胎相关技术的发展,绵羊卵母细胞和绵羊胚胎的需求量日益增加.获得尽可能多的结合型卵母细胞是体外受精的关键环节.本试验通过剖切法和抽吸法两种不同采卵方式获取卵母细胞并进行体外成熟培养.剖切法获得的卵母细胞数量高于抽吸法,所用时间相差不大.A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P＜0.05),抽吸法所采集的C级卵母细胞显著高于剖切法(P＜0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P＜0.05),受精后不同时期胚胎的发育率差异不显著(P＞0.05).表明剖切法是采集绵羊卵母细胞的理想方法.     

羊卵母细胞冷冻保存研究进展

近年来,绵羊、山羊胚胎工程技术的快速发展致使对卵母细胞的需求量越来越大。此外,作为家畜种质资源保护体系的组成部分,卵母细胞也是保存优秀雌性家畜遗传资源的重要方式之一。然而,作为胚胎生物技术的重要环节,由于其自身特殊的结构功能特点,卵母细胞对低温和冷冻极其敏感,其冷冻保存研究水平远低于胚胎。因此,如何提高冷冻保存卵母细胞质量是低温生物学和胚胎生物技术研究领域的热点和难点。针对目前绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存的最新研究进展和存在问题进行综述,同时针对如何进一步提高绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存质量提出建议,以期为之后的研究工作提供理论指导。     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较

比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响,以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较.结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27 h或30 h的囊胚发育率(19.0%、17.7%)明显高于体外成熟21 h或24h的囊胚发育率(12.3%、13.8%);Ion联合6-DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法;在相同条件下,孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异,其中卵裂率差异不显著,但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚.     

小鼠卵母细胞的电激活

采用宁波新科CRY 3 细胞融合仪及其配备的镀银电融合槽(电极宽度为0. 5mm)对影响小鼠卵母细胞电激活效率的诸多因素,如直流脉冲的强度(1. 0 kV/cm、1. 5kV/cm、2.0 kV/cm、2.5 kV/cm)、脉冲宽度(40μs、80 μs、100 μs、150 μs)和脉冲次数(1次、2次、3次)进行了比较研究,结果表明,卵母细胞激活率随电场强度的增加而升高,场强为2.0 kV/cm时,获得了较高的卵母细胞激活率和卵裂率(74.47%,77.14%),场强继续增加,卵母细胞的激活率和卵裂率反而开始下降。场强为2.0 kV/cm,脉宽为80μs时,卵母细胞的激活率最高(77.78%)。多次连续脉冲(3次,每次间隔10 min)处理卵子,可明显升高卵母细胞的激活率和囊胚发育率(89.58%,20.59%)。     

不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟是胚胎工程中的一项基础性研究。试验比较了不同添加成分对绵羊卵母细胞的体外成熟及其后续发育的影响。分析了EGF不同添加量、FSH∶LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明,①添加30ng/mLEGF的成熟率显著高于其他试验组（85.0%VS60.0%,71.7%,72.7%,P〈0.05）,并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;②成熟液中添加FSH1μg/mL,LH5.0IU/mL成熟率最高;③在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于20%小卵泡液的添加组（78.6%VS36.5%,P〈0.01）,显著高于3%小卵泡液的添加组和未添加组（78.6%VS60.0%,67.5%,P〈0.05）。     

湖羊肌肉营养成分组成及风味物质研究

选取5、10、18月龄及4岁湖羊各10只,屠宰后取背最长肌和肱三头肌分析常规营养成分;取10月龄湖羊背最长肌分析氨基酸;取肱三头肌测风味物质。结果表明:湖羊肌肉水分含量随年龄增长而降低(P<0.05),粗蛋白含量、粗脂肪、粗灰分的含量随年龄增长而增加(P<0.05)。湖羊肌肉蛋白质中8种必需氨基酸组成全面,与FAO模式比较,各种氨基酸评分均接近或大于1。湖羊肌肉脂肪中检测到的70种挥发性风味化合物,包括14种酸、7种酮、9种醛、5种醇、10种酯类、13种烃、12种其他化合物(包括呋喃、吡嗪、吡啶、吲哚等含氮硫氧等杂环化合物)。其中酯类含量最高,占肉中总风味物24.1%~28.3%,其次为烃和酸,分别占20.5%~21.2%和19.0%~20.0%。     

绵羊精液不同处理方法对体外受精效果的影响

试验通过开展绵羊低温保存精液和冷冻精液制备精子对体外受精效果影响的研究,旨在探讨制备绵羊IVF优质精液的新方法。结果表明:利用低温保存精液和冷冻精液,分别采用Percoll离心法和上游法制备精子进行体外受精,低温保存精液上游法的卵裂率78.6%显著高于低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法和60.2%、62.3%,(P<0.05),极显著高于冷冻精液上游法21.1%,P<0.01;低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法组间无显著(P>0.05)差异,但均显著(P<0.05)高于冷冻精液上游法。低温保存绵羊精液可用于制备IVF精子,上游法优于Percoll离心法,可显著提高体外受精效果。     

不同培养体系对牛胚胎体外发育的影响

采用离子霉素和6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)对牛体外成熟卵母细胞进行联合激活,激活后采用不同的培养体系进行体外培养,观察不同的培养液对牛孤雌激活胚体外发育能力的影响。3种培养体系分别为:A(0~48 h:CR1aa+3 mg/mL BSA;48 h~7 d:CR1aa+10%FBS),B(连续7 d均为SOFaa+3 mg/mL BSA),C(0~5 d:SOFaa+3 mg/mL BSA;6~7 d:SOFaa+10%FBS)。结果表明:3种培养液对卵裂率没有显著性影响,分别为87.22%,94.33%和91.30%,但囊胚发育率存在显著性差异,以A效果最好,其囊胚发育率为25.56%;C次之,囊胚发育率为11.80%;B最低,囊胚发育率为3.55%。之后选择最佳的培养液进行体外受精实验,结果表明CR1aa可用做牛胚胎体外生产的培养液。     

不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

卵母细胞孤雌激活是核移植的关键技术之一，卵母细胞激活率的高低直接影响核移植的效率。作者主要对卵母细胞孤雌激活的机制、激活途径及不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活进行概括性的分析。     

不同分离方法对绵羊睾丸间质细胞纯度的影响

旨在探寻一种分离纯度较高的绵羊睾丸间质细胞的分离方法。试验比较了3种不同的分离方法对绵羊睾丸间质细胞纯度的影响。结果表明,机械分离结合细胞筛过滤法,不仅操作简便,而且分离出的间质细胞纯度高于90%。