内生拮抗放线菌防治番茄灰霉病的研究

从番茄植物组织内分离到一株对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)有拮抗作用的放线菌株No.37,此菌株产生的抗菌物质能显著抑制番茄灰霉病菌的菌丝生长和孢子萌发,对盆栽番茄幼苗的预防保护作用和治疗作用分别达到89.7%和80.3%,10倍稀释液的田间防治效果达到84.1%。     

番茄灰霉病菌拮抗稀有放线菌的分离及其抑菌物质分析

为筛选新型有效的番茄灰霉病菌天然抑制产物,采用平板对峙法和菌丝生长速率法从44株采自辽宁各地的放线菌中筛选植物病原真菌拮抗放线菌,通过孢子萌发生长法和系统发育树分析番茄灰霉病菌拮抗放线菌的抑菌活性和分类地位,测试高抑菌活性菌株无菌发酵液活性物质的稳定性,并以高分辨率飞行质谱扫描鉴定稀有放线菌发酵液的抑菌产物。结果表明,筛选到13株具有抑菌活性的放线菌,其中SA32、SA33、SA37、SA39、SA45、SA51这6株菌对番茄灰霉病菌的生长及其孢子萌发有抑制效果,SA37和SA45对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率分别高达75.13%和79.27%,对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制率分别高达86.25%和93.43%。系统发育树分析表明,SA45聚类于稀有放线菌北里孢菌属,其余5株菌均聚类于链霉菌属。对比高活性菌株SA37和SA45发酵液在-20～120℃、pH值1～14和3种酶(蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶)处理条件下的抑菌稳定性表明,SA45发酵液的抑菌活性和稳定性均高于SA37。高分辨率质谱分析不同溶剂提取的SA45活性物质表明,SA45发酵液中不存在已报道的活性物质。综上所述,北里孢菌SA45发酵液对番茄灰霉病菌具有高效和稳定的抑菌活性,可能存在新型抑菌物质,其菌株及发酵液具有较高的应用价值和研究价值。     

番茄叶霉病拮抗内生放线菌的筛选及其生防效果初报

采用皿内对峙试验从175株植物内生放线菌株中筛选具有生防效果的拮抗菌株,然后通过盆栽试验和田间试验,对筛选出的生防菌的生防效果进行了研究。结果表明,皿内对峙试验共筛选出对番茄叶霉病菌和番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌有拮抗作用的内生放线菌株26株;菌株BAR1-5对番茄叶霉病的防治效果最佳,相对防效达到49.7%,接种番茄叶霉菌前和接种后喷施BAR1-5发酵上清液的相对防效分别达到62.6%和50.6%;BAR1-5菌株发酵液原液和5倍液的相对防效分别达到42.5%和33.1%。试验结果表明,菌株BAR1-5对番茄叶霉病具有较好的防治效果,是1株很有生防潜力的内生放线菌株。     

番茄内生放线菌Fq24发酵条件的优化

【目的】确定番茄内生放线菌Fq24的最佳发酵液培养基配方和最佳发酵条件。【方法】通过测定Fq24菌株发酵液对灰葡萄孢的抑菌作用,研究了Fq24菌株在不同发酵培养基、培养时间、接种量、装液量、起始pH、培养温度、碳源、氮源条件下的生长情况及其代谢物活性,以确定其最佳发酵条件。【结果】Fq24发酵液培养基的最适配方为:葡萄糖20 g,黄豆饼粉20 g,玉米面30 g,淀粉10 g,牛肉膏1 g,KNO32 g,NaCl 2 g,MgSO40.3 g,CaCO36g,KH2PO40.2 g,H2O 1 000 mL;筛选出的最佳发酵条件为:培养时间7 d,接种量10%,500 mL容量瓶中装液量100mL,起始pH值6.5,培养温度28℃,碳、氮源分别为葡萄糖和KNO3。【结论】在最佳发酵液培养基和培养条件下,Fq24菌株发酵液对灰葡萄孢的抑菌率可达到92.1%。     

番茄灰霉病内生拮抗菌的筛选及抑菌物质研究

[目的]筛选番茄灰霉病内生拮抗菌并研究其抑菌物质。[方法]从65株健康番茄植株中分离到内生拮抗细菌46株,在此基础上通过PDA培养基打孔扩散法进行复筛,获得了1株强烈抑制灰葡萄孢菌的抑菌物质产生菌。研究了该抑菌物质对灰葡萄孢菌菌丝和孢子的抑制作用,并经酸沉淀、Sephadex G-50凝胶层析纯化、琼脂糖凝胶电泳分析对其进行了初步鉴定。[结果]显微镜观察发现该抑菌物质具有列膜抑菌机制,初步鉴定抗菌物质为3.3 kDa左右的多肽类物质。[结论]为开发新的生防制剂奠定了基础。     

6株野生植物内生放线菌防病促生作用的初步研究

为了寻找具有内生习性的植病生防放线菌,从采自秦岭的14种野生植物中分离得到29株内生放线菌,对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验和温室防病促生试验。结果发现,有6株菌表现出显著的抑菌活性,其中菌株SF1对粉红聚端孢、SF4对苹果炭疽菌、SF20对灰葡萄孢均有较强的抑制作用;菌株SG2的代谢产物具有很高的抑菌活性,其发酵滤液对茄链格孢的抑菌圈直径达到35 mm;菌株SG2对温室番茄早疫病的防治效果达到89.72%,菌株SF4对黄瓜白粉病的温室防效达到89.61%,菌株SF20对番茄和黄瓜具有明显的促生作用。可见,从野生植物中分离具有内生习性和抑菌作用的放线菌,直接用于生物防治是可行的。     

番茄灰霉病菌对嘧霉胺抗药性的试验

从辽宁省不同地区保护地采集番茄灰霉病菌。经单胞分离获得代表性菌株35株，彩菌丝生长速率法测定各菌株对嘧霉胺的敏感性。结果表明，番茄灰霉病菌已对嘧霉胺产生中等水平抗药性，抗性频率为22.9%。不同地区存在差异，嘧霉胺使用较多的锦州和瓦房店地区抗药性频率较高。在离体条件下，抗药性菌株具有良好的遗传稳定性，与敏感菌株相似适应能力。     

重寄生放线菌F46和PR对灰葡萄孢的抑制作用

测定了2株重寄生放线菌对灰葡萄孢的作用效果。结果表明,重寄生放线菌F46(Streptomycessp.)和PR(Streptomycessp.)对灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用,镜检可以观察到F46和PR在灰葡萄孢菌丝上产生附着胞、缠绕靶标菌丝,使靶标菌丝畸形等现象;诱发接种后2株重寄生放线菌对苹果、草莓、番茄采后灰霉病均有不同程度的控制作用,在低温下的防效优于高温,提前诱发接种的防效优于同时接种。     

放线菌KN37菌株代谢物对番茄灰霉病的防治

采用离体和活体试验,研究KN37菌株代谢物对番茄灰霉病的防治效果,并利用分子手段对KN37菌株进行了初步鉴定。结果表明,放线菌KN37菌株代谢物可强烈抑制番茄灰霉病菌的菌丝生长和孢子萌发,对细菌性斑点病菌、番茄早疫病菌和油菜菌核病菌的抑制率达到90%以上,且对葡萄灰霉病具有较好的防治效果。由此可见,放线菌KN37菌株代谢物具有较好的开发潜力。     

番茄灰霉病生物防治措施研究概况

番茄灰霉病（Botryis cinerea Pers）是弱寄生病原菌,属于半知菌亚门,丝孢纲丝孢目淡色菌科葡萄孢属的灰葡萄孢菌,有性阶段为富克尔核盘菌（Sclerotinia fuckeliana=Botryotinia fucheliana de Bary）。番茄灰霉病是一种世界性重要病害,该病的致病菌灰葡萄孢菌可侵染几百种植物的花、果及绿色组织部分,主要为害葫芦科和茄科蔬菜,对菜豆、韭菜、洋葱也有为害。灰霉病菌以菌丝体、分生孢子、菌核在病残体或土壤中越冬。     

番茄灰霉病菌生物防治菌的筛选试验

采用多种筛选方法，从保护地土壤和番茄病果上，分离筛选对灰霉病菌有营养竞争和抑制作用的菌株。结果表明，在分离获得的细菌165株、真菌93株、放线菌210株中，细菌、真菌以营养和空间竞争作用为主，而放线菌生长缓慢，以产生抑菌物质为主，约有20％的放线菌表现出有抑菌作用；离体叶筛选灰霉病生防菌结果表明，细菌x24、x28，真菌z45、z120与放线菌f15、f111、f163均具有较好防治效果。     

设施番茄灰霉病菌孢子扩散动态与田间病情相关性

以捕捉孢子的方法观察设施番茄灰霉病菌分生孢子扩散的时间和空间动态,结果表明番茄灰霉病菌分生孢子在温棚内扩散是随机的,不同高度孢子捕捉量没有明显差异.番茄灰霉菌分生孢子扩散主要集中在白天,从8：00到20：00,孢子捕捉量占全天总量的88.4 % ,而8：00以前和20：00以后孢子捕捉量较小,仅占全天总量的11.6% ,每日10：00 后捕孢量开始迅速增加,而16：00 后明显下降以10：00～16：00 的捕孢量最多最稳定,1d中最大捕孢量出现在12：00～14：00 时.分生孢子捕捉量与对应田间病情指数呈显著正相关（R=0.8850,P〈0.01）,因此通过捕捉分生孢子,并监测其扩散动态,预测番茄灰霉病的发生期及防治适期具备可行性.     

番茄灰霉病生物防治菌株的筛选

从土壤中筛选出对番茄灰霉病菌(Botrytis cineren Pers．)有较强拮抗作用的生物防治菌株94株，其中拮抗细菌22株，分离率为17.6％；拮抗放线菌53株，分离率为11．7％；拮抗木霉菌19株，分离率为28.8％。研究发现，拮抗细菌可产生抗生素类物质，且在121℃高温下处理30min不失活，放线菌的抗生物质大多不耐热。拮抗木霉菌具较强的营养竞争及重寄生作用．温室接种试验表明对番茄叶部灰霉病的防治效果达67．18％。     

百合灰霉病高效杀菌剂的筛选和联合作用研究

在室内采用菌丝生长速率抑制法测定了6种杀菌剂对百合灰霉病菌的毒力。结果表明:1)异菌脲,百菌清,多菌灵,苯霜灵,已唑醇,腈菌唑6种原药对百合灰霉病菌的EC50值分别为130.7528、1.2479、3.9247、34.524 0、7.9625和10.1775 mg/L。其中,百菌清的毒力最高,其EC50为1.2479 mg/L,多菌灵次之,其EC50为3.924 7 mg/L,异菌脲的毒力最低,其EC50为130.7528 mg/L。2)不同配比的的腈菌唑和异菌脲混剂均对百合灰霉病菌有抑菌活力,但不同配比,对百合灰霉病菌的抑制率不同,当m(腈菌唑)与m(异菌脲)的配比为2∶8时,菌丝的菌落直径最小,抑菌效果最佳,为最佳配比。3)测定异菌脲和腈菌唑混剂对百合灰霉病菌的毒力回归,并计算EC50,以异菌脲为标准杀菌剂,计算各复配剂的共毒系数,m(异菌脲)和m(腈菌唑)以2∶8的配比混配,其共毒系数为130大于100,具有明显的增效作用。     

不同生物防治菌株对番茄灰霉病防治效果的影响

采用室内筛选的11个生物防治菌株进行盆栽和田间小区防治番茄灰霉病试验结果表明，细菌B27，真菌F45和F120，放线菌A15和A111，具有较好的预防效果，防治效果均在60％以上，其中放线菌A15菌株，防治效果达70％以上。菌株组合真菌F20＋F45和F20＋F120，F45＋F120和细菌B24＋B28具有增效作用。其中F45＋F120和B28＋B24组合．防治效果分别为69．2％和70.2％。     

80%腐霉利可湿性粉剂对番茄灰霉病的防效研究

为选用适宜用量的药剂防治番茄灰霉病,以番茄品种东农707为试材,研究了4个剂量的80%腐霉利可湿性粉剂对番茄灰霉病的防效。结果表明:80%腐霉利可湿性粉剂对番茄灰霉病的防效较好,均达68.5%~89.3%,使用时推荐剂量为80%腐霉利可湿性粉剂750g·hm-2,于番茄灰霉病发病前或发病初开始喷药,间隔7d喷药3~4次。     

大丽轮枝孢和灰葡萄孢生防放线菌的分离筛选

采用诱捕分离法从土壤中分离到28株放线菌,以大丽轮枝孢(Verticillium dahliae)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)作为靶标菌,通过皿内拮抗试验从中筛选出效果明显的SW6,SW9,SW16,SW20 4株生防菌株,其发酵原液对靶标菌的抑制效果明显高于发酵滤液和菌丝初提液。其中,菌株SW20的发酵液对2种靶标菌均有较强的抑制作用。抗药性测定结果表明,4株生防菌株对链霉素最为敏感,对供试杀菌剂抗性较强。     

番茄灰霉病菌拮抗菌D2-4发酵条件的研究

对拮抗番茄灰霉病菌的 D2 - 4菌株培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明 ,在 2 8℃ ,180 r· min- 1 振荡培养条件下 ,最佳发酵时间为 96 h左右 ,培养 2 0～ 2 4 h的种子液以 7%的接种量转接有利于提高抑菌活性 ,装液量为6 0 m L· 2 5 0 m L- 1 三角瓶 ,均匀设计试验得出 ,最佳培养基配方为 (10 0 m L发酵培养基中含 ) :黄豆饼粉 1.10 g、葡萄糖 2 .71g、蔗糖 1.0 0 g、Na Cl0 .10 g、酵母膏 0 .10 g、p H6 .6 1。     

枯草芽孢杆菌对番茄茎基腐病菌和葡萄灰霉病菌的抑制作用研究

利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在室内对番茄茎基腐病和葡萄灰霉病进行了防效测定。结果表明,枯草芽孢杆菌对番茄茎基腐病和葡萄灰霉病均有较好的防效,分别为:93.37 % 和93.07 %。同时还对枯草芽孢杆菌的抑菌机理进行了初步研究,结果表明该拮抗菌可以溶解致病菌菌丝。