α-亚麻酸对猪颗粒细胞胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响

本试验旨在探究α-亚麻酸(ALA)对猪颗粒细胞(GCs)胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响。试验收集150日龄健康母猪卵巢GCs,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot和流式细胞术探究ALA对猪GCs胆固醇合成、类固醇激素分泌及其凋亡的影响。结果表明：1)50μmol/L ALA处理极显著抑制了雌二醇(E₂)的合成(P<0.01),但对孕酮(P₄)的合成没有显著影响(P>0.05);2)50μmol/L ALA处理显著下调了胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著下调了CYP11A1和类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的蛋白相对表达量(P<0.05);3)50μmol/L ALA处理显著下调了关键胆固醇合成基因3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、清道夫受体B类成员1 (SCARB1)和胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)的mRNA相对表达量(P<0....     

水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定

研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24 h后开始零星增殖,3~5 d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。     

水牛卵泡颗粒细胞对卵母细胞体外成熟的影响

为了系统研究颗粒细胞对水牛卵母细胞体外成熟的影响,使用颗粒细胞条件液处理或单层颗粒细胞和卵母细胞共培养的方法,探讨颗粒细胞共培养对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响.结果显示,添加颗粒细胞传代接种第2天收集的20％颗粒细胞条件液到水牛卵母细胞成熟液中能显著提高水牛卵母细胞体外成熟率和囊胚发育率(P＜0.05);然...     

白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol, RES)对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。【方法】用不同浓度(0(对照组)、1、10、20、30、40、50和60μmol/L)RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇(estradiol, E₂)和孕酮(progesterone, P₄)的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,在体外培养24～36 h内,1、10和20μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10μmol/L RES组细胞增殖能力和E₂、P₄的分泌显著增加(P<0.05);10μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3(PTX3)、前列腺素...     

槲皮素缓解内质网应激(ERS)介导的水牛颗粒细胞凋亡

内质网应激(ERS)在颗粒细胞的凋亡中起重要作用,颗粒细胞的凋亡又是诱发卵泡闭锁的关键因素。槲皮素(QC)做为一种植物源性黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎等生物活性。研究表明QC可通过内质网应激保护细胞。为了解QC对水牛颗粒细胞的保护作用,初步阐明QC通过内质网应激缓解水牛颗粒细胞的凋亡机制。分析QC对细胞活力的影响,利用CCK-8试剂检测细胞活力,发现低质量浓度(1.0～2.5 mg/L)的QC能够增加细胞活力;使用内质网应激诱导剂衣霉素,在体外构建内质网应激模型,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,q-PCR检测内质网应激相关基因表达量情况,发现2.5 mg/L的衣霉素可促使内质网应激相关基因表达显著上升,细胞凋亡也显著增加;随后,探究QC对内质网应激条件下水牛颗粒细胞的保护作用,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,q-PCR和Western blot检测内质网应激以及细胞凋亡相关基因和蛋白的表达情况,发现QC预处理后,内质网应激相关基因的表达显著降低,细胞凋亡情况也得到缓解。综上,QC能缓解内质网应激诱导的细胞凋亡。     

α-亚麻酸对产蛋鸡肝脏ACC的影响

本试验旨在研究日粮中添加4.0%α-亚麻酸(ALA)对罗曼粉壳蛋鸡生产性能和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)酶活和基因表达的影响。试验设2个处理,基础日粮(对照组)和添加4.0%ALA日粮,每个处理组设5个重复,每个重复10只24周龄罗曼粉壳蛋鸡。试验期28d。结果表明:①添加ALA可提高蛋重,降低料蛋比;第28天ACC活力下降(P<0.01);②日粮添加4.0%ALA组第14天ACC基因表达下降33.99%(P<0.01)。添加ALA可提高蛋鸡生产性能,ALA对产蛋鸡脂质代谢的调节与降低ACC基因表达和酶活有关。     

瘦素对水牛体外卵泡颗粒细胞凋亡的影响

为探讨瘦素(leptin)对水牛体外卵巢卵泡颗粒细胞(GCs)凋亡的影响,用三组含不同浓度(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)leptin的培养基体外培养水牛卵泡颗粒细胞,以不含leptin的培养基做对照。采用An-nexin V法通过流式细胞仪检测其卵泡颗粒细胞的凋亡率。结果发现leptin浓度在100ng/ml时颗粒细胞凋亡率显著降低,其他浓度组与对照组的凋亡率之间无显著性差异,提示一定浓度的瘦素对卵泡颗粒细胞凋亡有抑制作用。     

添加α-亚麻酸对产蛋鸡内分泌激素和肝脏HMGR的影响

本试验旨在探讨日粮中添加4.0%α-亚麻酸(ALA)对罗曼粉壳蛋鸡脂质代谢的影响。采用单因素试验设计,设基础日粮(不添加ALA,对照组)和添加4.0%ALA两个处理,每个处理组设5个重复,每个重复10只24周龄罗曼粉壳蛋鸡。试验期28 d。结果表明,与对照组相比,添加4.0%ALA的处理组蛋鸡血清胰岛素增加极显著(P<0.01),雌二醇第2周增加显著(P<0.05);肝脏HMGR酶活显著下降(P<0.05),HMGR mRNA表达丰度下降(P>0.05),甘油三酯(TG)极显著下降(P<0.01)。本研究表明,添加4.0%ALA可通过改变内分泌激素、肝脏HMGR酶活、基因表达和TG来调节产蛋鸡的胆固醇代谢。     

探讨富含α-亚麻酸的添加剂对奶牛脂肪代谢及免疫功能的影响

在奶牛泌乳中期日粮中添加4.5%(精料的9.0%)富含α-亚麻酸的添加剂,探讨其对泌乳牛血清有关生化指标及其脂肪代谢与免疫功能的影响,结果表明(1)使血清HDLc(P＜0.01)浓度明显增加,而血清LDLc(P＜0.05)和vLDLc(P＞0.05)浓度降低,同时使血清TG、NEFA和CHO含量降低(P＞0.05);(2)增加血清Pr(P＜0.05)、INS(P＜0.05)、CH(P＞0.05)和T3(P＞0.05)浓度,而降低T4(P＜0.05)浓度显示具有很强的营养再分配功能,即泌乳牛物质合成代谢转向有利于泌乳的组织肝脏和乳腺;(3)提高红细胞膜PUFA组成(P＜0.01),而降低其TSFA组成(P＜0.01);(4)提高血液CD2+T细胞(P＜0.01)、CD4+T细胞(P＜0.05)和CD8+T细胞(P＜0.05),而降低血波CD4+/CD8+比值(P＞0.05),显示具有很强的免疫阳性.     

姜黄素对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响

本试验研究了添加姜黄素对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中增殖、凋亡自噬及间隙连接等生物学过程的影响。设置不同浓度(1,5,10,25,50,100μg/m L)的姜黄素,对颗粒细胞的凋亡、增殖、自噬和间隙连接等基因与蛋白的表达进行定性与定量检测,发现高浓度姜黄素会导致细胞凋亡标记Caspase-3及自噬基因Beclin-1的基因表达量上升,间隙连接蛋白Cx43基因表达量下降,细胞增殖标记PCNA表达量无显著变化。研究结果为姜黄素在调节卵巢颗粒细胞功能提供了一定的理论依据。     

α-亚麻酸对产蛋鸡胆固醇、甘油三酯含量和脂肪酸组成的影响

采用单因素试验设计,研究了日粮中,添加α-亚麻酸00、.5%、1.0%、2.0%、3.0%和4.0%对海兰褐产蛋鸡饲喂4周后蛋黄、卵泡和肝脏中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)以及蛋黄脂肪酸(FA)的影响。结果表明:蛋黄中亚油酸、亚麻酸、EPA和DHA的含量与日粮中α-亚麻酸添加量呈显著直线或二次曲线增加(P<0.10);蛋黄、各种卵泡中TC均与日粮中α-亚麻酸添加量显著直线或二次曲线降低(P<0.10);蛋黄、卵泡和肝脏的TG以及肝脏的TC与ALA之间的线性和二次曲线降低均不显著(P>0.10)。可见日粮中添加α-亚麻酸能降低胆固醇,提高鸡蛋中PUFA的含量。     

氯丙嗪对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

本试验旨在通过氯丙嗪对颗粒细胞凋亡影响的研究,探讨氯丙嗪对雌性大鼠性腺毒性的作用机制。对未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的氯丙嗪(0、0.1、1、10 μmol/L)染毒细胞,细胞培养24 h。染毒结束后采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechest 33258检测颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2和P53 mRNA的表达。在本试验所设置的剂量范围内,与对照组比较,氯丙嗪能极显著促进颗粒细胞凋亡(P＜0.01),呈浓度依赖关系;RT-PCR检测则显示氯丙嗪能引起Bcl-2、Bax、P53 mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值升高,除低剂量组的Bax mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值无明显改变外,其余各组与对照组相比均差异极显著(P＜0.01)。氯丙嗪可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡。     

猪卵巢颗粒细胞的体外培养

颗粒细胞是猪卵泡的重要组成,其生长及形态功能变化伴随着卵泡的整个发育过程,同时也是研究细胞增殖、分化、信号转导等重要的细胞模型。本试验旨在筛选和摸索原代培养颗粒细胞的理想培养基及培养过程,分别使用DMEM高糖、DMEM/F12、M199、1640完全培养基(86%培养基+12%胎牛血清+1%双抗+1%庆大霉素两性霉素混合液)接种猪卵巢颗粒细胞,置于37℃、体积分数5%的CO2、饱和湿度的细胞培养箱中进行培养,每12 h观察细胞生长状态及形态特征,建立体外培养体系。结果显示,DMEM高糖培养基中,细胞增殖速度快,细胞状态好,细胞形态清晰,培养效果最佳,同时,经FSHR免疫荧光鉴定,分离的细胞为猪卵巢颗粒细胞,且纯度大于98%,说明DMEM高糖培养基在建立体外原代细胞培养体系中效果明显。     

镉对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响研究

为探讨镉对雌性生殖机能的影响,幼鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),48 h后腹腔注射不同剂量的氯化镉,用琼脂糖凝胶电泳及TUNEL法对卵巢颗粒细胞进行凋亡检测;免疫组织化学法检测颗粒细胞的bax表达。结果显示注射氯化镉后48 h的高、中、低剂量组卵巢颗粒细胞(GC)凋亡率分别为(13.887 1±1.329 9)%、(10.757 3±1.229 3)%(、10.020 8±0.983 7)%,均显著高于对照组(0.637 8±0.387 2)%(P<0.01);96 h对照组GC凋亡率显著升高,高剂量组与其它组间差异明显,中、低剂量组与对照组差异不明显。凝胶电泳仅96 h高剂量组呈现梯状带。48 h、96 h各剂量组bax表达明显高于对照组(P<0.01)。可见镉对卵巢颗粒细胞的凋亡有促进作用,并有一定的剂量相关性;TUNEL法检测细胞凋亡优于电泳法,当细胞凋亡率较低时(<20%),电泳检测不到DNA梯状带;卵巢颗粒细胞凋亡和bax的表达有一定的相关性,随凋亡率的升高bax表达呈上升趋势。     

饲粮中添加α-亚麻酸对产蛋鸡载脂蛋白B和血脂的影响

本试验旨在研究饲粮中添加α-哑麻酸(ALA)对蛋鸡载脂蛋白B(apoB)和血脂的影响.选取210 日龄海兰褐蛋鸡150只,随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复5只鸡.采用单因素试验设计,日粮中分别添加0(对照组)、0.5%、1.0%、2.0%、3.0%和4.0%ALA.试验期4周.结果表明,添加ALA显著降低了各试验组第4周血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)含量(P<0.05).4.0%ALA组各周血清apoB的含量显著下降(P<0.05或P<0.01),而第2周肝脏中apoB的含最极显著增加(P<0.01).结论:饲粮中添加ALA能降低血脂水平,增加肝脏apoB的含量.     

饲粮中添加α-亚麻酸对产蛋鸡生产性能和肝脏AMPK的影响

本试验旨在探讨日粮中添加α-亚麻酸对海兰褐商品蛋鸡生产性能和肝脏AMPK的影响。采用单因素试验设计方法,在日粮中分别添加α-亚麻酸0.0%(对照组)、0.5%、1.0%、2.0%、3.0%和4.0%6个处理,每个处理组设5个重复,每个重复3只30周龄海兰褐商品蛋鸡。试验期28d。结果表明:添加α-亚麻酸使平均蛋重增加,添加α-亚麻酸3.0%组增加最大(P<0.05);料蛋比降低,第4周添加α-亚麻酸4.0%组降低最大(P<0.01);肝脏重、肝脏/体重、卵巢重、卵巢/体重、腹脂重和腹脂率减少,均以添加α-亚麻酸3.0%组最低(P>0.05)。AMPK酶活增加,添加α-亚麻酸1.0%组达极显著(P<0.01)。结论:添加α-亚麻酸可提高蛋鸡生产性能,增加AMPK酶活。     

哺乳动物卵泡颗粒细胞体外培养研究概况

卵泡颗粒细胞在卵泡的发育过程中起着重要作用,在卵泡颗粒细胞的增殖分化同时又受到多种生殖激素和细胞因子的调节。卵泡颗粒细胞作为研究动物生殖生理的一种理想的细胞模型,作者对哺乳动物卵泡颗粒细胞的体外培养及其在动物生殖生理中的作用作一简要概述。     

饲粮中添加α-亚麻酸对产蛋鸡脂质利用及蛋壳质量的影响

采用单因素试验设计,研究在日粮中添加0(对照组)、0.5%、1.0%、2.0%、3.0%和4.0%的α-亚麻酸(ALA),对海兰褐商品蛋鸡的蛋壳质量和脂质利用的影响。试验期28d。结果表明:添加α-亚麻酸,与对照组相比,各周鸡蛋蛋壳重、蛋壳强度和蛋壳厚度增加;鸡蛋胆固醇下降;4.0%ALA组第1周和第2周血清极低密度脂蛋白(VLDL)、第2周注射肝素后血浆中脂蛋白脂酶(LPL)活性下降极显著(P<0.01)。这说明添加α-亚麻酸可提高蛋壳品质,增加外周组织对脂质的利用。     

玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响

以原代培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,设立玉米赤霉烯酮(ZEA)对照组(0.0 mg/L)及高(80.0 mg/L)、中(20.0,40.0mg/L)、低(0.2,2.0mg/L)剂量组,比较不同质量浓度ZEA对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响。形态学观察发现,随着ZEA质量浓度的增加,颗粒细胞呈散在生长,体积缩小变圆,数量减少;高剂量组(80.0mg/L)中,76.96%细胞均已脱壁死亡。MTT法表明,ZEA对卵巢颗粒细胞具有生长抑制作用;免疫荧光结果显示随ZEA质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高,高质量浓度组细胞增殖率仅为1.01%;Western blot检测结果显示经ZEA处理,Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达量均明显上调,且存在质量浓度-效应关系。结果表明,ZEA能诱导卵巢颗粒细胞凋亡,并显著上调Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达,可通过死亡受体通路介导卵巢颗粒细胞发生凋亡。