1株大肠杆菌噬菌体vBEcoPGN07的分离鉴定及全基因组分析

【目的】探究大肠杆菌噬菌体vB＿EcoP＿GN07的生物学特性和全基因组特征,为开发噬菌体“鸡尾酒”制剂防治致病性大肠杆菌病提供生物学材料。【方法】采用双层平板法从广西南宁某养鸡场分离到1株大肠杆菌裂解性噬菌体vB＿EcoP＿GN07;通过透射电镜观察、宿主谱测定、pH和温度稳定性评估、最佳感染复数(MOI)测定、一步生长曲线测定、全基因组测序等方法了解噬菌体的形态学、生物学特性和全基因组特性。【结果】透射电镜显示,vB＿EcoP＿GN07头部直径为45 nm±5 nm,尾部长约25 nm,属于短尾噬菌体科,宿主特异性强;在4～60℃可以保持效价稳定,在pH 3.0～11.0可以保持噬菌体活性;该噬菌体的最佳MOI为10^-2;一步生长曲线显示该噬菌体潜伏期为60 min,裂解量为560 PFU/cell;测序结果显示其属于双链线型DNA,长度为70 120 bp, GC含量为42.8%;噬菌体vB＿EcoP＿GN07共有81个开放阅读框,其中23个为已知功能蛋白。经BLASTN比对显示,vB＿EcoP＿GN07与NCBI数据库中其他噬菌体相似性较低,符合N4-li...     

1株大肠杆菌噬菌体EPH11的分离鉴定及生物学特性分析

【目的】拟分离1株对大肠杆菌具有良好抑菌效果且适应性广泛的噬菌体,为开发新的大肠杆菌防治方法提供基础。【方法】以大肠杆菌H11为宿主菌,采用双层琼脂平板法从污水样品中分离纯化1株大肠杆菌噬菌体,电镜下观察噬菌体的形态,测定噬菌体的效价、宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、pH稳定性与温度敏感性,对噬菌体的全基因组进行分析和序列比对,并探究该噬菌体在液体培养基中对H11的抑制效果。【结果】成功分离到1株裂解性大肠杆菌噬菌体,命名为EP＿H11(登录号：OP688485)。双层琼脂平板法结果显示,该噬菌体能够形成大小一致、中间有透明亮点、周围有光晕的噬斑,噬菌体裂解效价可达10⁹～10¹⁰ PFU/mL。电镜观察显示噬菌体EP＿H11头部呈规则的多面体状,直径约85 nm,尾部直径约23 nm,长度约109 nm。以大肠杆菌H11为宿主菌测得EP＿H11的最佳感染复数是0.1,一步生长曲线结果显示其潜伏期为40 min,爆发期为80 min,裂解量为200 PFU/cell。该噬菌体在pH 4.0～10.0的环境中至少可以存活2 h以上,并能够在...     

高效裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体筛选方法探究

本试验以11株兔源致病性大肠杆菌为宿主菌,利用滴定法和双层平板法从莱芜和青岛规模化兔场污水中分离到2株噬菌体v B-Eco M-t E6和v B-Eco M-tE10。通过透射电镜观察,两株噬菌体均属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。噬菌体v B-Eco M-tE6和v B-Eco M-t E10的效价为5.42×10⁸ PFU/mL和8.26×10⁹ PFU/m L,能够裂解5种以上的兔致病性大肠杆菌,裂解性强、效价高、裂解谱广泛,具有较高的开发和利用价值。     

烈性噬菌体KM104对不同血清型鸡源沙门菌的防治效果评价

【目的】研究烈性噬菌体KM104株对不同血清型鸡源沙门菌雏鸡感染的防治效果。【方法】测定KM104株体外裂解谱及体内安全性，确定攻菌剂量和最佳感染复数(MOI);按噬菌体的不同使用时间、频率和滴度分组，构建白羽蛋鸡3个不同血清型鸡源沙门菌感染防治模型，通过记录试验动物存活数及存活率、生长性能、临床症状及病理变化，测定肛拭子排菌量、脾脏载菌量和脏器系数等指标，综合评价KM104的防治效果。【结果】噬菌体KM104对5个血清型沙门菌的综合裂解率为80.65%(50/62),在体外具有较好的抑菌效果，且对雏鸡无明显致病作用；最佳治疗方式：针对鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的治疗剂量分别为7.96×10⁷、1.26×10⁴和1.68×10⁷ PFU/mL,采用连续3 d灌喂高滴度噬菌体的方式雏鸡存活率最高(分别为90%、80%、90%),与攻菌后不处理对照组相比，有效减轻试验雏鸡的临床症状及脏器损伤，增重显著上升(P<0.05)、肛拭子排菌量、脾脏载菌量及脏器系数显著降低(P<0.05)。【结论】噬菌体KM1...     

沙门氏菌高效价宽谱噬菌体的分离纯化及生物学特性测定

为探索控制沙门氏菌感染的新途径,本试验进行了高效价宽裂解谱噬菌体的分离。首先利用点斑试验和成斑率（EOP）测定法对环境样品进行了沙门氏菌噬菌体的分离纯化及裂解效价和裂解谱的测定,然后对其中1株效价较高、裂解谱较广的噬菌体进行了电镜形态特征观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定及温度、pH和紫外线敏感性的测定。结果显示,该株噬菌体对不同沙门氏菌的裂解率不同,裂解效价在10⁹~10¹² PFU/mL;对检测的32株沙门氏菌菌株的裂解率为59.4%;透射电镜下观察到该噬菌体为头部直径约70 nm、尾部长约140 nm的长尾噬菌体;以鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028为宿主菌测得最佳感染复数为0.01;在宿主菌鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028中的一步生长曲线显示,潜伏期为20 min,暴发期为100 min,暴发量为113 PFU/cell;在40~60 ℃效价稳定在10¹⁰ PFU/mL,pH 5.0~13.0效价在10⁶ PFU/mL以上,紫外线照射50 min效价仍有10⁶ PFU/mL。综上可知,该株噬菌体分离株具有效价高、裂解谱宽且对温度、pH、紫外线稳定性良好等特性,符合噬菌体制剂的相关特征,具备作为噬菌体制剂后备菌株开发的潜力。     

噬菌体RAP44感染鸭疫里默氏菌的电镜观察

为了解噬菌体RAP44对鸭疫里默氏菌的侵染及裂解过程,本研究应用透射电镜进行观察。结果显示,噬菌体RAP44头部外廓呈六边形,平均直径约60nm,尾长约210nm,尾宽约8nm。RAP44与宿主菌混合后,5min内即能通过尾丝吸附于鸭疫里默氏菌的中部,开始感染过程;40min后细菌裂解,释放子代噬菌体。本研究为噬菌体作为抗生素替代品治疗鸭疫里默氏菌感染的研究提供了形态学依据。     

1株禽大肠杆菌噬菌体的分离及杀菌效果评估

【目的】 探索噬菌体作为控制养殖环境致病性大肠杆菌的新手段。【方法】 本研究进行了大肠杆菌噬菌体的分离及相应指标评估。通过双层平板法从养殖环境中分离禽致病性大肠杆菌裂解性噬菌体。通过电镜及酶切鉴定、温度及酸碱稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线及其在模拟环境中的杀菌效果对该噬菌体进行综合性评估。【结果】 分离得到的噬菌体具有正多面体的头部和细而长的尾部结构, 头部直径约98 nm, 尾部长约123 nm, 结合酶切鉴定结果初步判定该噬菌体为肌尾科双链DNA噬菌体。该噬菌体的温度耐受范围为37~50 ℃; 酸碱耐受范围为pH 3.0~11.0。当感染复数为0.00001时产生的子代噬菌体滴度最高; 一步生长曲线测定结果显示, 该噬菌体潜伏期为20~40 min, 裂解时间为80~100 min, 裂解量为4 133 PFU/cell。从该噬菌体对模拟环境中宿主大肠杆菌的杀菌效果可看出, 浓度为1×10⁴~1×10⁶ PFU/mL的噬菌体ФECP2-1对液体中目标大肠杆菌作用1~6 h, 杀菌率均在99.9%以上; 浓度为2×10⁴~2×10⁶ PFU/g的噬菌体ФECP2-1对鸡粪中目标大肠杆菌作用5~10 h, 杀菌率均在99%以上, 该噬菌体对鸡粪中目标大肠杆菌杀菌效果略低于对液体中目标大肠杆菌的杀菌效果。【结论】 ФECP2-1符合噬菌体类消毒剂相关特征, 是一株具有良好应用前景的噬菌体, 可作为一种生物消毒剂应用于养殖环境中禽大肠杆菌的防控。     

环丙沙星对噬菌体RAP44裂解鸭疫里默氏杆菌的影响

为探明环丙沙星(CIP)对噬菌体裂解鸭疫里默氏杆菌的影响,采用微量稀释法测定CIP对鸭疫里默氏杆菌RAf71株的最小抑菌浓度(MIC),在亚MIC CIP下,测定不同浓度噬菌体RAP44对RAf71生长的影响、RAP44噬菌斑的形成、增殖效果、不同噬菌体株对RAf71的裂解效果。将RAf71人工感染番鸭,比较噬菌体(皮下注射噬菌体1×109pfu/只)、CIP(治疗剂量,浓度为250 mg/L CIP饮用)、噬菌体和治疗剂量CIP联合、噬菌体和减半治疗剂量CIP联合的治疗效果。结果显示:CIP对RAf71株的MIC为16μg/mL,亚MIC的CIP可以使噬菌体RAP44对RAf71的抑制作用提高2～8倍,不影响噬菌斑的形成,能促进RAP44的增殖,使部分噬菌体株获得对RAf71的裂解能力;RAP44可以降低RAf71株攻击引起的死亡,治疗剂量CIP与RAP44合用能起到协同作用,进一步降低死亡率。研究表明,治疗鸭疫里默氏杆菌感染,噬菌体和CIP具有协同作用。该研究为治疗鸭疫里默氏杆菌病提供了一种新的方法。     

噬菌体对感染鸭疫里默氏菌鸭的疗效

为观察5株鸭疫里默氏菌敏感的烈性噬菌体对传染性浆膜炎的治疗效果,将鸭疫里默氏菌RAf71人工感染樱桃谷鸭的同时皮下注射噬菌体,结果显示,不同的噬菌体能对鸭疫里默氏菌的人工感染提供不同程度的保护,噬菌体RAP44的保护率最高;噬菌体RAP44的含量越高,保护率越高。试验表明,噬菌体RAP44具备临床应用潜力,可作为生物防...     

产气荚膜梭菌噬菌体鉴定及其环境消减效果评价

分离获得1株禽源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)噬菌体,拟鉴定其生物学特性及裂解力,并在环境中应用评价其对Cp的消减效果。通过双层及单层平板法从肉鸡肠道组织样品中分离并纯化1株Cp噬菌体。运用透射电镜观察该噬菌体形态,分析其MOI、一步生长曲线、pH及温度耐受特性、宿主谱及体外抗菌活性。通过基因组测序分析其基因组信息,最终在模拟环境下评价噬菌体对Cp污染量消减效果。扫描电镜结果显示,该噬菌体为长尾噬菌体,潜伏期<20 min,爆发量为28.5 PFU·cell^-1,最佳MOI为0.01,能够特异性裂解禽源Cp菌株,对待检的43株Cp裂解率高达83.72%。基因组分析表明,该噬菌体为双链DNA噬菌体,全长41 590 bp,拥有59个开放阅读框,其中33个ORF与已知功能蛋白具有一定同源性,将该噬菌体命名为vB＿CpeS＿SD72。小亚基末端酶构建进化树分析表明,噬菌体与Clostridium phage vB CpeS-CP51同源性较高。在环境消减测试中观察到噬菌体作用0.5 h,杀菌效率可达98.36%;2 h能够抑制...     

肉鸡弯曲杆菌噬菌体的筛选及应用

试验旨在筛选肉鸡弯曲杆菌特异性裂解型噬菌体并对其在肉鸡生产中的合理应用进行探讨。从肉鸡屠宰场收集弯曲杆菌噬菌体筛选样本,通过与当地肉鸡弯曲杆菌流行株共孵育、增殖、纯化获得特异性弯曲杆菌噬菌体。对上述弯曲杆菌噬菌体生物学特性（宿主范围、致死曲线、形态学特征等）进行鉴定;将筛选得到的弯曲杆菌噬菌体作为饲料添加剂,以5×10⁷、1×10⁸、5×10⁸、1×10⁹和5×10⁹ PFU/d 5个添加量添加于38日龄雄性罗斯308肉鸡饲粮中,观察不同噬菌体添加量对肉鸡盲肠内容物中弯曲杆菌的清除效果;最后通过比较2种噬菌体不同配比条件对肉鸡弯曲杆菌清除率及对肉鸡生长性能的影响建立使用方案。结果显示,试验从当地肉鸡屠宰场以空肠弯曲杆菌标准株L26为宿主菌共分离到12株空肠弯曲杆菌噬菌体,与从肉鸡养殖场分离的7株空肠弯曲杆菌共孵育,并选择裂解谱广且噬菌斑大的噬菌体BP11和BP12进行纯化和增殖。经形态学鉴定,2株噬菌体均符合肌尾噬菌体科（Myoviridae）特征,并具有较宽的裂解谱,但二者对相同宿主菌的裂解能力表现差异性;BP11添加量为1×10⁹ PFU/d,BP12添加量为5×10⁸ PFU/d时均能达到显著裂解效果;BP11与BP12混合添加组在不影响屠宰指标的前提下可显著降低肉鸡泄殖腔弯曲杆菌携带量。本研究结果为肉鸡生产过程中弯曲杆菌污染的防控及噬菌体的合理利用奠定理论基础。     

鸡源大肠杆菌噬菌体LHE71的生物学特性和全基因组序列分析

为了获得具有高效广谱裂解特征的噬菌体,本试验以96株鸡源大肠杆菌(E.coli)临床分离株为宿主菌,用双层平板法从鸡场采集的5份粪便样品中分离纯化噬菌体,测定噬菌体的裂解谱,并对筛选到的噬菌体进行形态观察、生物学特性测定和全基因组序列分析。结果显示,从鸡场采集的粪样中分离到1株烈性大肠杆菌噬菌体,命名为LHE71,在菌苔上形成透亮带晕环的噬斑。透射电镜观察该噬菌体形态为长尾噬菌体,正二十面体的头部直径约为70 nm,弯曲的尾部长约150 nm。以E.coli K12为宿主菌增殖噬菌体,当感染复数为0.1时效价最高,可达到2.6×10¹⁵ PFU/mL;该噬菌体增殖的潜伏期约为40 min,爆发量约为10⁴ PFU/cell。噬菌体LHE71在60℃以下、pH 7～9的范围内活性稳定,对紫外线有一定的抵抗力。噬菌体LHE71基因组全长50 158 bp,预测到81个开放阅读框,其中24个编码已知功能蛋白,无tRNA,不含毒力基因和耐药基因。GenBank数据库中共有32株噬菌体与LHE71有同源性,基于噬菌体衣壳蛋白和末端酶大亚基的进化分析结果...     

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10¹⁰、5×10⁹、5×10⁸、5×10⁷和5×10⁶ CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD₅₀), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD₅₀为1.5×10⁸ CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10⁸ CFU时, 噬菌体剂量为1.5×10⁹ PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。     

一株裂解奶牛源致病性大肠埃希菌噬菌体的分离与鉴定

以实验室保存的21株致奶牛乳房炎大肠埃希菌为宿主菌,采用双层琼脂平板法从牛粪便中分离裂解性噬菌体。测定所得噬菌体的滴度、裂解谱、最佳感染复数（MOI）等生物学特性,分析其在不同 pH、温度、紫外线作用后的滴度变化,以及在－20℃条件下保存10个月的滴度变化。结果显示,分离到1株噬菌体,其滴度为7．75×1010 PFU／mL,裂解率为33．3％,最佳感染复数为10,pH 5～9范围内作用2 h、30℃～40℃时作用1 h 其滴度变化不显著,紫外线照射14 min 可被全部灭活,在－20℃条件下保存10个月仍保持活性。     

沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定及生物学特性的试验

从商品肉鸭场采集鸭粪及垫料,以实验室保存的沙门菌为宿主菌,采用双层平板法分离到1株烈性噬菌体。对分离到的噬菌体进行纯化、效价测定、裂解谱测定、形态观察,并且进行了最佳感染复数、温度跟p H值稳定性和一步生长曲线的生物学特性研究。结果表明,该噬菌体形成的蚀斑均匀透亮,效价能达到109PFU/m L以上,并能裂解多株沙门菌菌株,为宽裂解谱噬菌体,透射电镜显示,该噬菌体为长尾噬菌体;最佳感染复数为0.001;一步生长曲线测定表明,该噬菌体的潜伏期为15 min,暴发期为30 min,暴发量约为320;该噬菌体的温度、p H值耐受性良好;紫外线照射60 min后效价降低3个梯度,由此可见该噬菌体分离株可作为潜在开发的生物消毒剂菌株。     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌噬菌体P82的分离及特性研究

【目的】 为开发噬菌体"鸡尾酒"制剂防治奶牛乳腺炎提供生物学材料。【方法】 以实验室分离的奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌82为宿主菌,通过点滴法和双层平板法在奶牛场的污水、弃奶和粪便混合物中分离并纯化其噬菌体,通过噬菌斑及透射电子显微镜对该株噬菌体的形态特征进行观察。利用核酸酶处理分析该噬菌体核酸类型,并对其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性进行研究。【结果】 分离筛选出金黄色葡萄球菌82的裂解性噬菌体P82,电镜下观察其头部为二十面体,大小约为120 nm×83 nm,有一条带可伸缩尾鞘的长尾,长约126 nm,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其核酸类型为双链DNA （dsDNA）。噬菌体P82的最佳感染复数为0.001,对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌裂解率为36.51%（23/63）,宿主谱较广;其生长潜伏期约为25 min,爆发期约为45 min,裂解量约为74 PFU/cell;在pH 4.0~12.0时活性稳定,在pH 2.0和13.0时则完全失去活性。噬菌体P82热稳定性较高,在70 ℃作用60 min后仍有裂解能力,在80 ℃作用40 min时则失去裂解能力。【结论】 本研究分离的噬菌体P82效价较高、裂解能力强、增殖速度快、噬菌谱广,对不同温度和pH均有较好的耐受度,能作为专一性裂解奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的噬菌体候选株,可与其他噬菌体混合制成噬菌体"鸡尾酒"制剂用于防治奶牛乳腺炎,为奶牛乳腺炎的噬菌体疗法提供材料。     

某鸡场大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究

为了探究大肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,本研究以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为宿主菌,通过双层琼脂平板法从某鸡场污水和淤泥中分离纯化得到1株宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体,命名为Bp16,用2%磷钨酸负染后于透射电镜观察其形态结构,采用双层琼脂平板法测定其温度和pH稳定性、最佳感染复数（MOI）及一步生长曲线等生物学特性。透射电镜观察结果显示,分离得到的宽裂解谱噬菌体Bp16的头部为正二十面体结构,有尾且有尾丝,体长约为220 nm,根据《病毒分类——国际病毒分类委员会第9次报告》的分类特征,该噬菌体为有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科的成员;以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为指示菌,其裂解效率仅为12.73%;温度稳定性结果显示,在37~60 ℃作用30 min或1 h噬菌体效价基本保持不变,且在80 ℃作用1 h后效价仍能达到1×10⁴ PFU/mL以上,说明该噬菌体对温度的变化不敏感,具有耐热的特性;pH稳定性结果显示,在pH 5.0~10.0之间效价基本保持不变,对酸碱较耐受;最佳感染复数为1;根据最佳感染复数来绘制一步生长曲线,测得其潜伏期为20 min,暴发期为50 min,裂解量为73 PFU/cell。综上所述,噬菌体Bp16具有热稳定性、酸碱稳定性及裂解能力强等优点,为后续试验研制大肠杆菌噬菌体制剂奠定了基础。     

铜绿假单胞菌噬菌体的分离鉴定和全基因组序列分析

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种人兽共患的机会性病原体,给养殖业造成巨大经济损失,噬菌体在防治铜绿假单胞菌感染性疾病方面具有应用前景。本试验以实验室保存的铜绿假单胞菌临床分离株PA31为宿主菌,通过点滴法和双层琼脂平板法从水样中分离纯化噬菌体;以PA31和实验室保存的大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门菌(Salmonella)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)临床分离株作为宿主菌,通过点滴法分析噬菌体的裂解谱;利用负染法在透射电镜下观察噬菌体形态,双层平板法测定噬菌体的最佳感染复数和一步生长曲线,测定pH和温度对噬菌体稳定性的影响;采用Illumina NovaSeq平台测定噬菌体的全基因组序列,利用A5-MiSeq、SPAdes、GeneMarkS、Rfam、Diamond、BLASTp和MEGA 11.0生物信息软件进行拼接、注释和比较基因组学分析。结果显示,分离出1株铜绿假单胞菌噬菌体vB＿PaeM＿Ty,其仅能裂解宿主菌PA31和Escherichia coli-39、Enterococcus faecal...     

鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立

参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。