家蚕中肠上皮细胞增殖和分化的初步研究

通过分析家蚕自幼虫期到蛹期发育过程中肠上皮细胞的增殖与分化情况,鉴定家蚕中肠干细胞的潜在定位。采用苏木精和伊红(Hematoxylin and Eosin,H&E)染色与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色追踪变态和发育时期家蚕中肠的形态结构及细胞组成变化,结果显示,幼虫经历蜕皮及变态时,中肠形态结构以及中肠上皮细胞组成均发生明显变化:在幼虫每个龄期的盛食期肠壁较薄,眠前期(蜕皮前)明显变厚,至眠期其厚度达到峰值;中肠上皮层存在柱状细胞(CC)、杯状细胞(GC)和再生细胞(RC)3种细胞,3种类型细胞随龄期逐渐增多,其中各龄期柱状细胞持续增多,至眠期达到峰值,靠近基底膜的小细胞在眠前期增多。利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyUridine,BrdU)和磷酸化组蛋白(Phospho-histone H3,PHH3)免疫荧光染色检测到中肠上皮细胞,尤其是中肠上皮层靠近基底膜处的小细胞在幼虫各龄眠前期的增殖率最高。同时通过BrdU滞留标记实验在中肠上皮层靠近基底膜处发现了BrdU滞留阳性信号。研究结果发现家蚕幼虫蜕皮时中肠上皮层靠近基底膜处的小细胞发生快速增殖,推测这些小细胞中存在着潜在的家蚕中肠干细胞。     

家蚕中肠组织在变态发育不同时期的蛋白表达差异分析

分析了家蚕在变态期不同发育时段中肠组织蛋白表达差异的信息。SDS-PAGE电泳分析显示,从家蚕吐丝前1 d到化蛹72 h的中肠蛋白分离到相对明显的16条泳带,其中分子量约为30、45、70 kD的蛋白组分含量较大,且比较稳定,分子量约为50、60、62 kD的蛋白组分在不同时期存在着显著的表达差异。进而通过聚丙烯酰胺双向凝胶电泳分析,发现家蚕中肠组织蛋白的表达种类和差异蛋白数目的变化在化蛹1～3 d非常明显:蛋白表达种类的变化呈现2个高峰,分别为化蛹0 h和化蛹41 h;差异蛋白数目的变化呈现3个波峰,分别在吐丝98 h至化蛹0 h、化蛹30～41 h和化蛹41～58 h。在化蛹1～3 d,这种显著峰值变化的时期刚好与家蚕中肠组织发生旧肠壁细胞退化死亡和新生肠壁细胞分化增殖的盛期相吻合,从一个侧面反映了家蚕中肠组织在变态期活跃的发育进程。     

家蚕蜕皮变态的内分泌机制 二、蜕皮激素与前胸腺

<正> 昆虫、蜘蛛、螨类、虾类、蟹类等节肢动物都是蜕皮而生长,在由幼虫到蛹到成虫的变态时,都伴随着蜕皮。本世纪初证实,这种蜕皮变态是受激素调控的。Kopec、Wig-glesworth、Williams 和福田宗一等对变态的内分泌学说的确立作出了很大的贡献。70多年前,福田宗一偶而发现一个寄生在蚕蛹的(?)蛆(Sturmia sericariae)幼虫在钻出茧壳时被卡在茧层上,只有虫体前半部分钻出茧外并化蛹。取出此蛹,形如葫芦,蛹体中部如同用细线结扎。福田据此得到启发,对家蚕(Bombyx mori)幼虫作结扎处理,成为福田在昆虫内分泌学研究上的系列研究的发端。家蚕幼虫成熟后就开始营茧,     

猪流行性腹泻的病理学研究——胎猪肠上皮培养细胞感染吉毒株后细胞学与超微结构病变的观察

本实验观察了胎猪肠组织原代细胞培养物接种猪流行性腹泻病毒吾毒株后的细胞学和超微结构变化,以及病毒的形态发生。结果表明:以10~4TCID_(50)/0.％剂量感染细胞后,10小时出现超微结构改变;16小时经细胞学染色可见到细胞改变;不染色的可在22小时发现病变经胞。其主要变化为,活体观察见病变细胞肿胀变圆,折光性增强,肠上皮细胞从培养盘片上脱落而形成空隙区。细胞学染色见细胞核崩解、碎裂、胞浆空泡化,脂肪染色可见阳性颗粒。电镜检查见粗面内质网、线粒体、高尔基复合体等细胞器扩张,微绒毛短缩。病毒在肠上皮细胞的租面内质网中以出芽方式增殖,多生成形态、大小不同的病毒性包涵体,并以胞吐和细胞崩解等方式释出。在负染片中可见到完整的病毒颗粒,但经过冻结的标本,纤突损失较多,在超薄切片内,纤突不易被发现,只有处于胞吐阶段的病毒颗粒,才可见其表面纤突。     

柞蚕蛋白水解酶及抑制剂的初步研究

比较蓖麻蚕幼虫、家蚕幼虫和蛹及柞蚕蛹的血淋巴及中肠的蛋白水解酶的活力表明,家蚕幼虫中肠的酶活力较高:幼虫的酶活力高于蛹.测定了柞蚕蛹中几种组织和体液的蛋白水解酶活力,仅发育后期蛹的中肠有蛋白水解酶的活力.脂肪体及血淋巴均来测得明显的蛋白水解酶活力.柞蚕在不同的生长发育时期蛋白水解酶活力不同.成蛹初期,抑制剂活力较高,酶活力很低,随着蛹的发育,抑制剂活力逐渐下降,酶活力逐渐上升.此抑制剂对热稳定,既能抑制胰凝乳蛋白酶,也能抑制胰蛋白酶.将发育后期蛹的中肠匀浆进行层析,可粗分得两种蛋白酶组分,其一能被慈姑抑制剂抑制,而不能被柞蚕抑制剂(由蛹血淋巴中提取,属胰蛋白酶的抑制剂类)所抑制,推断此蛋白水解酶可能是胰凝乳蛋白酶的类似物.     

对中蜂囊状幼虫病的预防和治疗建议

中蜂囊状幼虫病又叫尖头病、囊雏病,是中蜂肠道病毒引起的幼虫传染病,它危害大,传染快。该病多流行于夏秋高温季节 ,当蜂群患病后 ,轻者影响蜂群的繁殖和采集 ;重者会造成全场蜂群覆灭。１症状中蜂囊状幼虫病的病毒最容易感染２～３日龄的幼虫。病毒在中肠细胞、脂肪细胞、王浆腺细胞和气管等组织中大量增殖,潜伏期４～６天,幼虫一般都死于封盖以后。死亡的幼虫呈尖头子,头部上翘,白色无臭味,体表失去光泽,表皮增厚。初发期,少数死虫被工蜂清理拖出,蜂王又重新产卵。因此,在同一巢脾面上出现卵、虫、蛹错杂的“花子”现象。２防…     

家蚕5龄幼虫后期核型多角体病毒的增殖/永田昌男等/日蚕杂,

在家蚕5龄幼虫各个时期注射核型多角体病毒(NPV)后,对幼虫血液中病毒浓度进行免疫法检测。通过对病毒增殖曲线的比较后发现,幼虫期病毒的增殖率在对数生长期几乎是恒定不变的,仅在病毒增殖的起始阶段有一些差异。虽然感染了NPV病毒的家蚕幼虫最后都会全部死亡,但感染后7天内的幼虫死亡率是随其时期不同而变化的。在     

猪流行性腹泻的病理学研究——人工感染乳猪的空肠上皮电镜组化研究

观察了人工感染流行性腹泻病毒乳猪的空肠上皮内碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、琥珀酸脱氢酶和5′—核苷酸酶的动态学变化。结果,肠上皮内碱性磷酸酶对病毒侵袭的反应最敏感,染毒18h后,乳猪肠上皮微绒毛排列整,碱性磷酸酶反应明显降低;45h后,断裂脱落的微绒毛内可见到较弱的酶反应;染毒18h后,肠上皮内的酸性磷酸酶的活性增强。酶反应见于整个溶酶体,溶酶体数量增多、体积变大,多位于细胞的游离缘和扩张的内质网附近,此种内质网中可见到病毒。染毒45h后,肠上皮的溶酶体内可见到亚细胞碎片。染毒13～45h后,肠上皮内线粒体扩张呈不整圆形、内嵴破损,但其外膜的琥珀酸脱氢酶的反应却增强。肠上皮内5′—核苷酸酶的活性以感染18h为高。以上四种肠上皮内酶反应,在感染96h后活性均明显降低或消失。     

柞蚕蛹期血淋巴蛋白质的等电聚焦分析

<正> 昆虫血淋巴是细胞外体液,浸润着虫体内所有组织和细胞。全变态昆虫的蛹期是重要的变态期,在此期间,进行着幼虫组织的分解和成虫组织形成。血淋巴中蛋白质种类的变化情况,是昆虫生理学者关注的问题之一。柞蚕是典型全变态昆虫,柞蚕蛹期里翅芽发育,与此同时,在雄蛹中睾丸进一步发育成熟,而在雌蛹中卵巢开始发育,直至完全成热。因此,有必要分析柞蚕蛹期血淋巴蛋白质种类及其消长变化特点,为逐步深入阐明蛹期成虫器官芽生长发育过程中,利用血淋巴中的蛋白质致使血淋巴蛋白质种类出现有关变化,提供分析资料。 关于昆虫血淋巴蛋白质的分析工作,过     

核型多角体病毒感染柞蚕幼虫细胞的电子显微镜观察

用电子显微镜观察了NPV对柞蚕幼虫的脂肪、血球、真皮、气管及中肠等组织细胞的侵入、增殖和细胞的变化。 观察到进入血液中的病毒粒子,随着血液的循环首先聚集于侵染细胞的周围,并以它的先端部吸附于细胞膜上,以它的外膜和细胞膜融通,病毒便钻入细胞质中。 被感染的细胞核内,首先出现染色质凝集现象,接着核膨大,并生成“网状构造”,看到了杆状病毒粒子的复制、成熟和多角体堆积的过程。 经口接种NPV的柞蚕幼虫,中肠皮膜细胞同其它易感细胞一样,容易被侵染;病毒在中肠皮膜细胞核内复制的过程,并不晚于其它易感细胞,但多角体的形成却晚于其它组织细胞。     

关于家蚕病毒病的高温疗法的研究

感染了软化病病毒(IFV),小型软化病病毒(SFV),还有细胞质多角体病毒(CPV)的蚕,用高温处理可以抑制其发病。在蚕的各令脱皮期放在37℃高温中处理24小时,虽对孵化幼虫接种致死量的IFV仍可以使之活到结茧。高温处理的适期是在眠中到脱皮后12小时内效果显著。脱皮24小时后处理则不见有活到结茧的。还有对脱皮后的幼虫虽作6小时高温处理,亦可见到治疗效果。将SFV感染幼虫放在37℃中处理,可以阻止SFV的增殖,脱皮期并在高温处理期中,中肠皮膜组织的SFV抗原量减少。另方面,就CPV而言,在37℃中明显阻碍多角体的形成。还有,感染了CPV的中肠细胞在脱皮期会脱落,而由新生细胞来填补。苏毕尔—1×苏毕尔—2和j—124×C—122。从健康的群体中选出蚕儿,在蚕篇内放剂量1.10~4的多角体添食,使不同品种和交杂种的蚕儿感染。将0.025毫升悬浮液的病毒用结核菌素接种法的注射器注射蚕蛹使其感染。用无菌的蒸馏水注射对照区蚕蛹。查明:桑蚕品种和交杂对于用特殊方法人工感染有核多角体病毒的抗性没有明显的不同。吃病毒叶片感染的蚕儿,对病毒的抗性因令期而不同。一令和二令蚕儿的敏感性最高,而五令蚕儿抗性最大。随令期的增加,蚕儿有核多角体的抗性逐步提高。     

重离子射线照射对家蚕造血器官的生理效应

用碳离子和氦离子射线局部照射家蚕 5龄第 3日幼虫的造血器官 ,调查了对循环血球密度和种类 ,以及其后生长发育和变态的影响。照射后家蚕变态困难 ,结茧率、化蛹率和羽化率显著降低 ;幼虫血液中血球密度在照射后 8～ 2 4h短暂上升 ,随后快速下降 ,5龄后期血球密度显著低下。上述变化程度随射线剂量增加而更加显著 ,而两种离子射线之间没有明显差异。血液中各种血球的比例虽然没有很大变化 ,但照射后出现了一种大型血球。     

家蚕消化管酶基因控制的研究

Ⅰ.研究目的在蚕幼虫消化管,已发现为分解饲料蛋白的强蛋白酶活性,但此酶到熟蚕期以后,激减,一旦消失,在蛹后期再次激增,并成为茧容解酶的供给源。此等幼虫期与蛹期蛋白酶的性质,有许多点相异。但据我们免疫学的研究(未发表),则蛹中肠及幼虫期中肠组     

蜕皮激素受体和超气门蛋白基因在柞蚕发育过程及激素诱导后的表达模式

昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白形成的异源二聚体介导蜕皮激素信号,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,从而使昆虫进入蜕皮和变态等生命过程。克隆了柞蚕的2个蜕皮激素受体相关基因,命名为Ap EcRB1(Gen Bank登录号:KY411159)和Ap USP1(Gen Bank登录号:KY411160)。2个基因的ORF序列全长分别为1 758 bp、1 401 bp,编码585个、466个氨基酸。半定量RT-PCR检测这2个基因除在柞蚕幼虫血淋巴中不表达之外,在其他组织中均有表达,在丝腺和脂肪体中的表达量较高。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析2个基因在幼虫蜕皮前及化蛹前后呈现大幅度上调表达的规律。注射20-羟基蜕皮甾酮(20E)诱导启动滞育蛹的发育,结果诱导组的滞育蛹经过17 d羽化,比对照组滞育蛹提早羽化。滞育蛹中2个基因的表达量在注射20E后均明显下降,其中Ap EcRB1在蛹发育后期的12 d内一直处于较低水平,但羽化前期其表达量急剧上升,蛹发育16 d(羽化前1 d)达到最高;Ap USP1基因的表达量从注射后8 d开始升高,至16 d时达到最高。以上研究结果丰富了柞蚕变态发育过程中蜕皮激素调控作用的分子信息。     

美国蜜蜂研究动态

蜂巢小甲虫的生物学特性据官方报道：蜂巢小甲虫（Ａｅｔｈｉｎａｔｕｍｉｄａ）１９９６年１１月在北美发现,美国已发生小甲虫破坏蜜蜂正常活动,而导致健康蜂群受损事件。成年甲虫被蜂巢内的蜂产品和蜜蜂气味吸引。Ｌｕｎｄｉｅ（１９４０）曾在南非报道了小甲虫的生活史,在蜂巢内,卵成团分布,卵期为２～３天;孵出的小幼虫为白色,靠取食箱内蜂产品为生,幼虫期１０～１４天,这时箱内可见很多日龄接近的幼虫。幼虫进入预蛹期,它们停止取食,转移到蜂箱外的土壤中化蛹,蛹期１个月。化蛹后的成虫又飞回蜂巢内,存活６个月。在南非小…     

家蚕蛹变态期蚕血蛋白的SDS-PAGE电泳分析

在熟蚕到蛹三天的蛹变态时间段,进行了蚕血的SDS-PAGE电泳分析。我们发现:在家蚕蛹变态时期,30KD蛋白和70KD蛋白是蚕血中的主要蛋白质。30KD蛋白在整个蛹变态期含量很大且稳定。70KD蛋白在吐丝前一天至吐丝61h的这段时间含量很大,而后含量急剧下降。分子量约50、45、40、5KD的四条蛋白带在整个蛹变态过程含量相对较低但比较稳定。分子量约140KD的蛋白在吐丝前一天和吐丝1h时含量较大,而在随后的时期含量很小而到预蛹后再度升高;分子量约100KD和约16KD的蛋白在吐丝前一天和吐丝1h出现。分子量约20KD的蛋白在吐丝61h前有一定含量,而后含量很少。     

家蚕幼虫发育中贮藏蛋白质的含量变化

昆虫贮藏蛋白是一类在昆虫变态期间起着重要作用的蛋白质(Thomson,1975;Wyatt和Pan,1978).这类蛋白质已在以双翅目和鳞翅目为主的许多种昆虫中发现,并明确了其分子特性及其变态期间的动态(RobertS和Brock,1981;Levenbook,1985).贮藏蛋白主要在幼虫脂肪体内合成并分泌到血液中(Sekeris等,1977;SekeriS和Scheller,1977).在末龄幼虫的血液中贮藏蛋白大量积累,并在幼虫～蛹转化期间被脂肪体所吸收(Tojo等,1978).贮藏蛋白的     

家蚕973项目李胜小组在昆虫激素调控方面取得重要进展

<正>2015年3月16日,《PLoS Genetics》发表了李胜研究员研究组题为"Methyl farnesoate plays a dual role in regulating Drosophila metamorphosis"的研究论文。昆虫的变态发育受蜕皮激素(20E)和保幼激素(JH)的协同调控:20E主导幼虫蜕皮和幼虫-蛹-成虫变态;JH则在幼虫蜕皮期拮抗20E作用而维持幼虫性状,从而阻止变态提前发生。经过20多年的努力,20E信号传导途径已被基本阐明;虽然发现JH至今已近80年,但     

生物改造②——我的丝绸之路

第二章 特大茧与特小茧一、蚕的一生蚕孵化成幼虫,食桑约4周后成为熟蚕,吐丝结茧.结茧后经4～5日化蛹,再经10～15日化蛾,经交配产卵,结束一生.在不到2个月的时间内,即发生卵一幼虫一蛹一蛾,明显的变态.昆虫的变态很早就为人们所注目,为解开这个谜作了不懈的努力,至今已完全清楚,昆虫的蜕皮与变态是由于激素作用的结果.这种激素是由脑,前胸腺和咽侧体所分泌的.     

不同发育阶段家蚕体内抗坏血酸含量的变化

抗坏血酸又称维生素C(Vc),是家蚕幼虫生长发育必需的营养物质。为探讨在非取食阶段家蚕体内还原型抗坏血酸(AsA)的来源,采用分光光度法测定家蚕在不同发育时期以及不同条件下体内的AsA含量和总抗坏血酸(TAA)含量变化,并采用实时荧光定量PCR检测AsA合成相关酶基因在家蚕不同发育阶段的表达量变化。滞育卵中AsA含量在产卵24 h内,TAA含量在产卵72 h内均有所增加,此后二者的含量均不同程度降低并一直保持相对稳定;即时浸酸解除滞育蚕卵的AsA含量在产卵24 h内显著增加,且在产卵48~144 h一直保持较高水平,到胚胎发育后期又明显下降,但AsA含量一直高于滞育卵。幼虫期取食桑叶或添加Vc的人工饲料之后,蚕体内AsA和TAA含量均增加,幼虫在眠中或取食缺乏Vc的人工饲料及饥饿一定时间后,体内的AsA和TAA含量均明显降低,尤其是饥饿后体内的AsA含量会下降到很低的水平。蛹期的TAA含量无显著变化,但雌蛹体内AsA含量在化蛹0~24 h显著升高,雄蛹体内AsA含量在化蛹0~144 h一直保持较高水平,到蛹后期才有较为明显的下降。编码AsA合成相关酶的4个同源基因BmG ULO_like1、BmG ULO_like2、BmA Lase_like1、BmA Lase_like2在中肠和脂肪体中的表达量总体上都是卵期及蛹期显著高于幼虫期,并且随卵和蛹的发育进程呈上升趋势。研究结果提示,家蚕胚胎发育期和蛹期的AsA来源途径,可能包括自身合成途径及由氧化型抗坏血酸(DHA)还原为AsA的途径,而在幼虫期主要从食物中吸收Vc,缺乏其他来源。