鸡法氏囊中B淋巴细胞的发育

[目的]研究不同生长阶段正常鸡法氏囊内B淋巴细胞的动态变化规律。[方法]以海兰白鸡的200枚种蛋为试验材料,利用免疫组化法研究了IgM、IgG和IgA3种B淋巴细胞在法氏囊内的发育变化规律。[结果]在胚胎13日龄时,法氏囊内可检测到IgM＋和IgG＋2种B细胞,但IgM＋B细胞的数量显著高于IgG＋B细胞,而IgA＋B细胞在胚胎18日龄的法氏囊内才可检测到。随着日龄的增长,IgM＋、IgG＋、IgA＋3种B淋巴细胞整体变化呈上升趋势,并在21日龄时达到稳定。IgM＋、IgG＋、IgA＋3种B细胞分布部位相似,开始均出现在粘膜上皮内,随后分布在皮质中,而在成熟后主要分布在髓质中。[结论]在胚胎13日龄前,IgM＋B细胞可能在法氏囊内已经出现;鸡出壳后初期,法氏囊的体液免疫功能迅速增强,并在21日龄时达到成熟水平。     

中药"囊复康"对鸡IBD病理组织学影响的研究

将80只24日龄公雏随机分成A、B、C、D四组，观察各组鸡的临床症状，肌肉、肝、脾、肾及法氏囊特征病理变化。结果发现：攻毒后除A组轻微外，各组均出现腿肌条状或点状出血，肝、脾、肾及法氏囊肿大，但经治疗144h后剖解，A、B、C组肉眼病变消失，D组仍有病变且法氏囊萎缩。光镜观察，A、B、C组鸡的法氏囊病理组织学变化均明显好于D组，说明中药“囊复康”防治鸡IBD效果良好。     

禽法氏囊发育与免疫功能研究新进展

禽法氏囊的结构发育与其免疫功能密切相关,二者直接关系到禽养殖业的健康发展.为了解法氏囊发育与免疫功能的研究近况,采用文献综述和归纳总结的方法,阐述现阶段法氏囊发育与免疫功能的研究新进展.结果表明:1)法氏囊发育始于原基发生,最新研究发现该过程与内外胚层均相关;影响造血干细胞向法氏囊定向迁移的具体因素尚未完全理清,但趋化...     

鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达

为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。     

鸡T细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以鸡胸腺细胞免疫ＢＬＡＢ／ｃ小鼠,进行细胞融合,获得了１５株杂交瘤克隆株,其中有５株（１Ｂ６、１Ｃ５、３Ｅ４、９Ｈ６、５Ｅ１０）杂交瘤克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）只对鸡胸腺细胞和外周血Ｔ细胞发生特异性反应。ＷｃｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明,这组ＭｃＡｂｓ反应的膜抗原分子量为６０～６５ＫＤ,该抗原分布于６３３～７２４％的胸腺细胞、１７３％～２４５％的脾细胞,２３％～２７％的外周血淋巴细胞,而法氏襄细胞的反应性不超过１３％。以此ＭｃＡｂｓ作诊断试剂,对禽类Ｔ细胞分离、纯化及Ｔ细胞亚类鉴定提供了重要的研究手段。     

鸡法氏囊中血管活性肠肽的表达特点

运用免疫组织化学超敏SP法对鸡不同生长阶段法氏囊中血管活性肠肽(VasoactiveIntestinal Peptide,VIP)的表达特点进行了研究。结果显示,法氏囊中VIP的表达范围广泛,涉及黏膜、黏膜下层和肌层,尤以黏膜上皮细胞和法氏囊小结髓质的表达为典型;随着日龄增加,黏膜上皮细胞VIP表达逐渐减弱,囊小结髓质一直保持较强的VIP阳性着色,囊小结皮髓质交界处上皮细胞层内VIP强阳性细胞有逐渐增多的趋势。鸡法氏囊中VIP阳性反应物质的广泛分布,提示法氏囊是神经系统以外产生VIP的又一个重要部位,法氏囊中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统间的相互作用。     

传染性法氏囊病重组亚单位疫苗保存期试验

将14日龄SPF鸡分为5组,A、B和C组分别接种保存期为203、403、70 d的传染性法氏囊病重组亚单位疫苗,D和E组不接种。35日龄时,对A、B、C、D组的鸡以100倍法氏囊感染剂量的标准强毒株IBDV BC-6/85进行滴鼻。攻毒后第4天,将所有鸡致死,进行剖检,观察法氏囊眼观病变,取法氏囊组织以琼脂免疫扩散试验检测传染性法氏囊病毒抗原。法氏囊未见到明显肿大、变黄或胶冻样渗出物或出血等眼观病变及法氏囊中传染性法氏囊病毒抗原检测阴性判定为受到免疫保护。将各组的试验数据以x2检验进行统计分析。结果,A、B、C、D组的免疫保护率差别具有统计学意义,A与D组、B与D组、C与D组之间的免疫保护率具有极显著差异。结果表明,在2~8℃保存1年该疫苗的稳定性和免疫原性仍然相当好。     

传染性法氏囊病病毒变异E株对法氏囊淋巴细胞形态及功能的影响

利用透射电镜连续观察了传染性法氏囊病病毒变异株人工感染雏鸡后不同时期法氏囊淋巴细胞的超微结构变化,并对法氏囊内SIgM,SIgG,SIgA3种抗体生成阳性细胞数量和血液中IgM,IgA,IgG抗体水平进行检测。观察结果表明,IBDV感染后法氏囊淋巴细胞出现了严重变性、坏死,表现为核染色质浓缩、碎裂、溶解,线粒体溶解呈空泡样结构,其他细胞器破坏溶解,在法氏囊淋巴细胞、巨噬细胞、网状上皮细胞等细胞的胞浆中可见不同类型和排列方式的病毒粒子。IBDV感染后法氏囊内抗体阳性细胞数量和血清中抗体水平均呈现不同程度的下降,揭示雏鸡机体体液免疫功能严重抑制。     

EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗对减蛋综合征灭活油乳苗的免疫协同作用

利用所构建的减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因真核表达质粒pcDNA3-hexon和减蛋综合征灭活油乳苗,观察了EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗对减蛋综合征灭活苗的免疫协同作用。结果显示,7日龄时应用核酸疫苗和减蛋综合征灭活油乳苗联合免疫的鸡群,在14~56日龄整个观察期内,胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应,均明显强于单纯油乳苗免疫组(其中,除在接种后第7天两组鸡的B淋巴细胞增殖OD570值差异不显著外,其余各检测时间两组间均表现为显著或极显著差异);特别是T淋巴细胞增殖情况在接种第14天后均表现为差异极显著。而且,HI抗体效价水平也持续性高于单纯灭活油乳苗免疫鸡群,并在免疫接种后35~49 d时差异显著。说明EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗与灭活油乳苗联合免疫,可明显提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,产生很好的免疫协同作用。     

添加大麻籽粕对狄高肉鸡免疫的影响

 选择1日龄狄高鸡200羽,随机分5组,每组5个重复,每个重复8羽,A组为对照组,饲喂基础日粮,B～E组为试验组,分别在玉米-豆粕型日粮基础上添加大麻籽粕部分替换豆粕,分3个生理阶段（Ⅰ期：0~14日龄;Ⅱ期：15~35日龄;Ⅲ期：36~56日龄）进行为期8周的饲养试验,屠宰并测定其免疫指标。结果:试验组比对照组血清总蛋白量(TP)、血清白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLOB)和血清尿素氮(BUNC)含量降低;胸腺重量、胸腺指数、法氏囊重量、法氏囊指数等均以B组最高,而脾脏重量和脾脏指数则以C组最高。结果表明：在肉鸡日粮中按照Ⅰ期1.5%～6.0%,Ⅱ期2.0%～8.0%,Ⅲ期3.0%～9.0%的比例添加大麻籽粕部分替代豆粕不会对其血清免疫性能产生不利影响,是安全剂量;Ⅰ期1.5%,Ⅱ期2.0%,Ⅲ期3.0%的替代比例可促进B细胞的诱导分化和成熟,促进机体的体液免疫;Ⅰ期4.5%,Ⅱ期6.0%,Ⅲ期7.0%的替代比例机体对氮的利用效率提高,蛋白质沉积增加,是最佳剂量。     

鹌鹑主要免疫器官的组织学和细胞化学的研究

鹌鹑腔上囊的中间层与鸡比较不明显,淋巴滤泡皮质ＲＮＡ阳性率６２．５％,比髓质高,表明淋巴滤泡的皮质区是Ｂ淋巴细胞的活化区。胸腺的被膜下及小隔周围,有生长期较大的胸腺细胞,具有细胞免疫潜能,是Ｔ淋巴细胞的先躯。脾脏内的淋巴小结及淋巴组织鞘是Ｂ及Ｔ淋巴细胞的活化部位,此处ＲＮＡ的阳性率较高,为６１．３％。     

壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布

 【目的】以DPV gC基因疫苗（pcDNA-DPV-gC）为模型,采用复凝法制备壳聚糖/pcDNA-DPV-gC纳米微球,对其在雏鸭体内的抗原表达和分布进行初步研究。【方法】将壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗以肌注、滴鼻和口服3种途径免疫20日龄雏鸭,于免疫后不同时间点（4h、12h、1d、3d、5d、7d、2 w、4 w、6 w和10 w）分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、食道、十二指肠、盲肠和直肠,应用间接免疫组化检测DPV gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布。【结果】①肌注组免疫雏鸭1 d,肝脏、法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;滴鼻组免疫雏鸭12 h,肺脏出现阳性信号,1 d哈氏腺和法氏囊检测到DPV gC蛋白;口服组免疫雏鸭12 h,食道出现中等强度的阳性信号,1 d法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;②在3种免疫途径中,肝脏、肺脏、法氏囊、哈氏腺、食道、十二指肠、盲肠和直肠是DPV gC抗原表达的主要器官;阳性信号主要在肝细胞、肺上皮细胞、法氏囊和哈氏腺淋巴细胞、食道上皮细胞和肠道粘膜上皮细胞及固有层细胞等部位;③不同免疫途径免疫的壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗在雏鸭体内的抗原表达量和持续时间的总体表达规律为：肌注组＞滴鼻组＞口服组。【结论】壳聚糖能促进DPV gC基因在雏鸭体内的表达和分布,肌肉注射是壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗首选的免疫方式。     

人工感染法氏囊病病毒后鸡法氏囊组织变化的研究

为建立传染性法氏囊病的动物模型,将法氏囊病病毒（IBDV）BC6/85毒株人工感染5周龄的SPF鸡,采用组织病理学和免疫组织化学的方法,用打分的形式研究攻毒后2～432h,感染鸡法氏囊中病毒的定位以及法氏囊组织病变和IBDV免疫反应阳性细胞的变化过程。结果显示感染鸡的法氏囊与法氏囊腔中都能检测出病毒和有病理损伤的现象,且IBDV检出的时间迟于损伤出现的时间。法氏囊小结中IBDV免疫反应阳性细胞密度和损伤程度的变化趋势有一定的规律性,表现出先协同增长后有所不同的变化趋势。并在感染后期发现感染鸡法氏囊中仍能检测出病毒且有少量新生的淋巴小结。通过详细记录鸡感染IBDV BC6/85后的整个病程,初步建立了该毒株的动物模型,并通过打分的形式,将感染鸡法氏囊中的病毒增殖与炎症损伤两者联系起来分析,进一步探讨了该病的致病机制并为其今后的研究提供基础数据和理论依据。     

鸡ANP32家族蛋白亚细胞定位及其在免疫器官中的表达特征分析

【目的】明确鸡ANP32家族蛋白的亚细胞定位及在不同月龄鸡免疫器官中的表达特征,为后续研究鸡ANP32家族蛋白与新城疫病毒（NDV）复制及其致病性的关系打下基础。【方法】分别构建鸡ANP32家族基因重组真核表达载体,转染HEK-293T细胞后进行诱导表达,利用Western blotting检测融合蛋白表达情况,并通过荧光观察分析融合蛋白亚细胞定位;同时采用实时荧光定量PCR检测ANP32家族基因在1～6月龄鸡免疫器官（脾脏、胸腺和法氏囊）中的表达水平。【结果】成功构建了鸡ANP32家族基因重组真核表达载体pEGFP-C1-ANP32A、pEGFP-C1-ANP32B和pEGFP-C1-ANP32E,转染HEK-293T细胞后得到正确表达,获得携带EGFP标签的融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFPANP32B和EGFP-ANP32E,其分子量分别为60.0、57.9和56.9 k D。亚细胞定位分析结果表明,融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFP-ANP32B和EGFP-ANP32E的荧光与细胞核荧光完全重合,即主要定位在细胞核。实时荧光定量PCR检测结果表明,ANP32家族基因...     

Oral administration of Allium sativum extract protects against infectious bursal disease in chickens

Garlic (Allium sativum, Liliaceae) has been safely used for more than 5000 years, and research on garlic extract is rapidly increasing because of its multiple biological functions. The in vivo effects of oral administration of garlic mixture (GM, water-soluble extract) on infectious bursal disease virus (IBDV)-infected specific pathogen free male white leghorn chicken were examined through histopathological, immunohistochemical, and Western blot analyses, and enzyme-linked immunosorbent assay. The results confirmed the protective effects of oral administration of 5 mg·kg⁻¹ BW GM (Group GM1) on bursal lesions after IBDV infection. In particular, protein expression of IBDV in the bursa decreased in Group GM1, indicating that GM administration decreased IBDV replication in the bursa. Furthermore, immunoglobulin M- and A-bearing B lymphocytes significantly increased 7 days post infection in bursae in Group GM1 (P<0.01), suggesting that the oral administration of 5 mg·kg⁻¹ GM offers moderate protection against B cell destruction after IBDV infection. During infection, the concentration of bursal interferon gamma (IFN-g) increased and peaked in Group GM1 earlier than in Group T (IBDV-exposed), demonstrating that GM administration prompted the production of IFN-g to protect against IBDV infection.     

鸡大肝和大脾病抗原在免疫器官的定位和分布

用免疫金－银法（ＩＧＳＳ）和免疫胶体细胞化学方法,对人工感染的大肝和大脾（ＢＬＳ）鸡鸡免疫器官作ＢＬＳ抗原（ＢＬＳＡｇ）定位,分布及其动态研究。结果感染后第１,７,１９周,在脾脏,盲肠扁桃体,胸腺,法氏囊,红骨髓和哈德尔氏腺组织中均检查到ＢＬＳＡｇ,６主要分布在淋巴细胞,网状细胞,网状上皮细胞,巨噬细胞,单核细胞、浆细胞的胞浆、内质网,线粒体和一些空泡内。ＢＬＳＡｇ阳性淋巴细胞早期主要分布在胸腺和     

美国七彩山鸡传染性法氏囊病及其并发感染

１９９８年贵阳地区两个珍禽养殖场（Ａ场和Ｂ场）的七彩山鸡爆发一种以急性死亡、法氏囊肿大为特征的传染病。Ａ场无并发感染，死亡率为１１．４％，死亡高峰出现在第５天：Ｂ场由于致病性链球菌的混合感染，死亡率上升到５０％，死亡高峰提前到么３天，剖解病变更加复杂化，该场的致病性链球菌是加剧本病高死亡率和严重出血性素质的真正原因。另对两场的鸡新城城疫（ＮＤ）和和鸡减蛋综合症（ＥＤＳ）血清效价测定结果表明， 地Ｎ     

不同法氏囊病活疫苗对鸡法氏囊发育的影响和对新城疫免疫效果影响的评价

评价常用的6种IBD疫苗株对鸡法氏囊发育的影响和对新城疫免疫效果影响,为临床选用疫苗提供参考.将SPF鸡分成6个试验组和1个对照组,每组25只.7日龄时,试验组分别用A80株、D78株、B87株、KS96株、MB株和2512株滴口免疫,每只鸡各1羽份.各组分别在免疫后4 d、9 d、20 d随机抽取5只鸡计算法氏囊指数.各组于IBD免疫后14 d用La Sota株活疫苗点眼、肌肉注射La Sota株油佐剂灭活疫苗各1羽份,对照组同时进行免疫.免疫后每隔7 d检测1次NDV抗体.42日龄时各组以鸡新城疫强毒F48E9攻击,观察攻毒保护效果.结果表明:27日龄A80、D78、B87和KS96组法氏囊指数和对照组相比差异不显著(P>0.05);MB和2512与对照组之间差异极显著(P<0.01).A80、D78对ND疫苗诱生机体产生抗体的影响小(P>0.05);MB、2512对ND抗体影响大,抗体水平显著低于对照组(P<0.01);B87、KS96对ND抗体生成有一定的影响,和对照组相比低1个滴度左右,但从统计分析来看影响较小(P>0.05).用F48E9攻毒,结果显示A80、D78、B87、KS96和对照组保护率均为100%,而MB株组保护率为80%,2512株组保护率为70%.A80、D78、B87和KS96这4株疫苗株对法氏囊的发育影响很小;MB和2512对法氏囊发育有明显的抑制作用.MB和2512对新城疫的免疫保护有较大影响,而弱毒A80、D78以及中等毒力的B87、KS96对新城疫的免疫保护影响轻微.     

鸭源呼肠孤病毒感染引起雏鸭免疫损伤的观察 征文

 【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠孤病毒,分别观察脾、法氏囊组织病理学变化,检测脾、法氏囊指数,外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率,脾、法氏囊IgY生成细胞,并分析试验组及对照组差异显著性。【结果】感染鸭源呼肠孤病毒后,雏鸭脾出现明显坏死灶,之后出现肉芽肿结构,法氏囊固有层淋巴滤泡明显减少;脾、法氏囊指数降低;外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率降低;脾IgY生成细胞数量增多、法氏囊IgY生成细胞数量减少。【结论】鸭源呼肠孤病毒感染可导致雏鸭免疫器官严重损伤并引起免疫抑制。