南昌霉纱A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素Ａ产生菌－南昌链霉菌ＮＡＷ－３菌株经原生质体再及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株ＮＡＷ－３（１）,其产南昌霉素Ａ能力由出发菌株ＮＡＷ－３的１３８３单位／ｍＬ,提高到１８９５单／ｍＬ,产纱能力提高了３７％。     

南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素 Ａ 产生菌———南昌链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎａｎｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ） Ｎ Ａ Ｗ － ３ 菌株经原生质体再生及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株 Ｎ Ａ Ｗ－ ３（１） ,其产南昌霉素 Ａ 能力由出发菌株 Ｎ Ａ Ｗ － ３ 的１ ３８３ 单位／ ｍ Ｌ,提高到１ ８９５ 单位／ｍ Ｌ,产素能力提高了３７ ％ 。     

杀虫抗生素—南昌霉素A生物和化学测定方法的研究

本文对南昌霉素 A 效价的生物和化学的测定方法分别进行了研究.生物测定方面筛选到对南昌霉素 A 的敏感菌、最适培养基及 pH 缓冲液.在5～50微克/毫升浓度范围内,敏感菌的抑菌圈直径与南昌霉素 A 的浓度的对数呈线性关系.化学测定方面探索到使南昌霉素 A 乙醇溶液显色的显色剂,摸清了最适显色条件和待测样品的处理方法.南昌霉素 A 与显色剂作用后的溶液显红色,颜色稳定,特异性强,显色后的溶液在721分光光度计上的最大吸收波长为520毫微米,在5～80微克/毫升浓度范围内其吸光度与南昌霉素 A 的浓度成正比,符合朗伯(Lambert)-比耳(Beer)定律。采用南昌霉素 A 标准品加入法和标准曲线法两种方法分别测定同一发酵液中南昌霉素 A 的含量,所获得的测定结果非常接近,表明本方法的置信度达到99%,样品效价测定的全过程可在1小时内完成.本研究结果为南昌霉素 A 发酵研究提供了较为简单、快速、准确的测定方法.     

NTG对南昌霉素产生菌的诱变选育

采用不同浓度的NTG诱变剂,对南昌霉素产生菌南昌链霉菌80-5.3-116菌株的孢子进行处理。结果表明,500μg/ml的诱变浓度对孢子致死率达79.92%,具有较好的诱变效果;初筛摇瓶产量比出发菌株提高20%以上的菌株有54株,占菌株的54%;连续3批进一步摇瓶复筛,并对复筛结果进行分析,发现116-5.8-64菌株所产南昌霉素活性单位高达9571.4mg/ml,比出发菌株提高了116.7%,差异达到极显著水平。     

南昌霉素A发酵中间代谢产物之间数学模型的初步探讨

本文根据南昌霉素A在200L不锈钢罐中发酵的测定数据在IBM/PC微机上进行数学模拟,结果表明:(1)南昌霉素A在发酵液中的累积,菌丝体DNA量的增长,糖、磷的消长变化分别与发酵时间X的函数关系为Y=a+blnX。(2)菌丝体DNA量的增长变化,糖、磷的消耗分别与南昌霉素A在发酵液中的累积y的函数关系为Y=ae~(bX)。(3)南昌霉素A的累积与还原糖的浓度X之间的函数关系为y=(a+bX)/X。(4)南昌霉素A比生产速率Q_p(在单位时间内单位菌体重量合成南昌霉素A速度)分别与发酵液中菌丝体DNA浓度、NH_3-N浓度、还原糖的浓度、总糖和溶磷消耗值之间的函数关系为Q_p=aXe~(bx)(b<0)。初步揭示了南昌霉素A发酵中间代谢物之间的内在关系。     

以脂肪酶活为指标快速筛选吉他霉素高产菌株的研究

[目的]筛选吉他霉素高产菌株。[方法]以1株北里链霉菌Zn14-05为出发菌株,进行紫外线与NTG复合诱变处理,通过以脂肪酶活力为初筛指标和摇瓶复筛筛选吉他霉素高产菌株。[结果]摇瓶发酵效价比出发菌株提高10%;传代试验结果表明其遗传性能稳定。[结论]以高脂肪酶活性为初筛指标选育吉他霉素高产突变株,缩短了选育周期,减少了初筛工作量,提高了选育效率。     

60Co γ射线对南昌霉素产生菌的诱变选育

采用不同剂量的60 Coγ射线 ,对南昌霉素产生菌———南昌链霉菌 80 - 5 .3- 116菌株的孢子进行处理。结果表明 ,3万仑琴的诱变剂量在对孢子致死率 90 %左右时 ,具有较好的诱变效应 ;初筛摇瓶产量正变率达到2 1.0 8% ;复筛摇瓶发酵单位比出发菌株提高 5 0 %以上的有 10株 ,占初筛菌株的 5 % ;连续 4批摇瓶发酵试验平均产量比出发菌株的产量提高 5 0 %以上 ;有 6个菌株摇瓶产量分别比出发菌株提高 6 0 %和 70 %以上     

井冈霉素高产菌株的复合诱变筛选

吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hygroscopicus var. jinggangensis Yen)KN-16经紫外线、60Coγ射线、亚硝酸-紫外线复合诱变处理,摇瓶发酵筛选得到一株井冈霉素A高产菌株F-101,该菌株产井冈霉素A含量较出发菌株提高了33.5%.     

阿维菌素高产工业菌株的推理选育研究

[目的]通过推理选育,获得高产的阿维菌素工业生产菌种。[方法]以Biok AV-023为出发菌株,首先采用常规紫外诱变筛选出正突变菌株,再通过添加L-异亮氨酸诱导推理选育方法选育高产阿维菌素生产菌株。[结果]经紫外诱变和L-Ile定向筛选表明,L-Ile筛选浓度以0.5%最佳,经复筛后获得的高产突变菌株AV60s-32最高效价可达4 520 IU/ml,与出发菌株相比提高了23.4%。[结论]采用紫外诱变和L-Ile推理选育相结合的方法可有效提高阿维菌素菌种发酵效价。     

基于诱变和抗性突变的多杀霉素高产菌株的选育

为提高菌株发酵液中多杀霉素产量,本试验利用常温常压等离子体(ARTP)诱变、紫外(UV)诱变和抗性突变技术处理刺糖多孢菌株DS0322-3,结合高通量筛选和摇瓶发酵选育多杀霉素高产菌株。结果显示,通过ARTP诱变和UV诱变育种,筛选获得384株突变菌株,其中有9株突变菌株的效价较原始菌株增加10%以上,且1株效价较原始菌株增加20%以上,经过ARTP诱变30 s,得到的突变菌株AR1019-4效价为547.78 mg/L,较原始菌株增加了21.88%。以ARTP诱变得到的高产突变菌株AR1019-4为出发菌株,通过抗性突变筛选技术筛选获得1 152株突变株,其中13株突变菌株的效价较出发菌株增加10%以上,且2株效价较出发菌株增加15%以上,在0.5 mg/L的氯霉素平板上得到的突变菌株Chl 1215-5效价为637.12 mg/L,较出发菌株增加了16.31%;12 mg/L的庆大霉素抗性突变筛选到了突变菌株Gen 1207-8,效价为597.59 mg/L,该菌株的Spinosyn D组分由10%～15%增加至30%～35%左右,经遗传稳定性试验验证,突变菌株Chl1215-5和Gen1207-8可稳定遗传。试验结果表明ARTP诱变、紫外诱变和抗生素突变技术对选育多杀霉素高产菌株具有重要意义。     

链霉素抗性筛选吸水链霉菌高产农用抗生素菌株研究

[目的]筛选吸水链霉菌的高产农用抗生素菌株。[方法]从海南土壤中筛选出1株吸水链霉菌,以经过自然分离和2次紫外诱变的S6-7为出发菌株,经过紫外光照射辅以链霉素抗性筛选后,再进行摇瓶发酵复筛。[结果]从62株随机挑选的单菌落中初筛出7株较好菌株,经斜面连续传代3次后复筛,发现5株菌株具有较好的正突变,正突变率可达8.06%,效价最高提高25.11%。[结论]将链霉素筛选法与传统紫外诱变法相结合,使菌株的产素能力有较大提高,而且极大地提高了菌种正向突变的筛选效率。     

链霉素抗性筛选吸水链霉菌高产农用抗生素菌株研究

农用抗生素作为一类生物农药,具有使用剂量低,环境相容性好,选择性强的特点,因此受到普遍重视。目前已发现的天然抗生素有约2／3来源于链霉菌。利用链霉菌产抗生素能力与链霉素抗性基因之间的对应关系来定向筛选正向突变株,是目前农用抗生素科研领域的研究热点。     

链霉素抗性筛选吸水链霉菌高产农用抗生素菌株研究（英文）

[Objective] The research aimed to screen Streptomyces hygroscopicus strains with high production of agricultural antibiotics.[Method] A strain of S.hygroscopicus was screened from the soil of Hainan Island.After natural screening and consecutive ultraviolet induced mutation twice,S6-7 strain was obtained as the original strain then treated by UV irradiation and streptomycin resistance screening,and finally rescreened through shake-flask fermentation.[Result] 7 better strains were selected by primary screening from 62 single colonies which were picked out randomly.After 3 generations of consecutive cultivation on slant media and rescreening,5 strains presented obvious forward mutation.The forward mutation rate reached 8.06%,and the largest production increasing rate came up to 25.11%.[Conclusion] By combining streptomycin resistance screening and conventional ultraviolet induced mutation,both the antibiotic-producing capacity and forward mutation screening efficiency of the original strain were greatly enhanced.     

青海高原东部土壤辣椒疫霉生防菌的初步筛选

以辣椒疫霉为病原靶标菌，采用平皿体外筛选法分离到在皿内对辣椒疫霉有明显拮抗作用的放线菌17株，细菌及霉菌各3株；经辣椒盆栽接种复筛从中筛选出有明显抗病作用的放线菌7株，细菌和霉菌各1株；经鉴定，6株放线菌为链霉菌，霉菌为曲霉属疏展曲霉，1株放线菌和细菌未鉴定。     

替考拉宁产生菌的抗性筛选及发酵条件研究

[目的]通过对替考拉宁产生菌的菌种选育及发酵工艺的研究,提高其对自身代谢产物的耐受性,进而提高替考拉宁的产量。[方法]以替考拉宁产品本身为筛选剂,利用紫外诱变,对替考拉宁产生菌进行耐自身抗性的筛选。将筛选得出的高产菌进行发酵研究,在发酵起始将不同型号的大孔树脂加入培养基中以吸附发酵过程中释放的替考拉宁,发酵结束后用浓度80%甲醇洗涤树脂,用微生物管碟法测其洗脱液效价。[结果]通过抗性筛选的方法,获得比亲株发酵水平提高18%的菌株。在发酵液培养基中添加7%（w/V）的吸附树脂Diaion HP-20能有效消除替考拉宁对自身菌体的抑制作用,使得替考拉宁产量提高3.52倍。[结论]通过对替考拉宁的抗性筛选及向发酵液中加入吸附树脂能有效提高菌体对自身的耐受性,为进一步的工业化生产提供理论依据。     

链霉菌BM10菌株的诱变选育

链霉菌BM10菌株是中国热带农业科学院热带生物技术研究所从海南原始森林土壤中分离得到的一株生防菌,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行紫外(UV)、微波(MW)、亚硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯(DES)和氯化锂(LiCl)诱变处理,采用平板对峙初筛和摇瓶培养复筛,均能筛选到拮抗活性明显提高的突变菌株,尤以亚硝基胍诱变效果最好,其次是紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变、氯化锂诱变和微波诱变。经传代实验,高效突变株N1-45-9对香蕉枯萎镰刀菌的拮抗效果比原始菌株提高69.4%,且遗传稳定性良好。     

斜纹夜蛾抗性品系选育及其在肟醚类杀虫剂活性评价中的应用

以氰戊菊酯为供试药剂,对斜纹夜蛾种群进行了抗性选育,同时评价了肟醚类化合物对抗性品系的毒力。结果表明,斜纹夜蛾经过连续3代的单对筛选和群体筛选得到的氰戊菊酯抗性品系(Fen-R),其抗性倍数达101.74,比筛选前提高了2.17倍,并对乙酰甲胺磷和丁硫克百威具有明显的交互抗性;经过连续2代单对筛选得到的相对敏感品系,其对氰戊菊酯的LC50从126.34μg/mL下降到46.89μg/mL;HNPC-A9835、A9908和A9955等3个新化合物对斜纹夜蛾Fen-R的毒力均显著地高于乙酰甲胺磷和丁硫克百威,其中HNPC-A9955还优于氰戊菊酯。     

NTG诱变筛选高产柚苷酶抗药性突变株

通过筛选柚苷酶产生菌3-54菌株孢子的敏感抗生素最低致死浓度,采用NTG对出发菌株孢子进行诱变处理,将诱变后的孢子涂在含纳他霉素致死浓度(2.0 U/mL)的平板筛选培养基上,获得了大量的抗药性致死突变株。再结合透明圈法,经过透明圈初筛和多次摇瓶复筛,从180个纳他霉素抗性基因突变株中筛选得到1株摇瓶发酵单位达770.06 U/mL的3-54-NTG-16号菌株,比出发菌株的产酶能力提高了近100%。     

高产碱性纤维素酶细菌的筛选鉴定及其酶学特性与发酵条件研究

【目的】从自然环境中分离筛选高产纤维素酶的菌株,开展碱性纤维素酶的酶学特性分析,为该菌株及所产纤维素酶的综合开发利用打下基础。【方法】采用羧甲基纤维素钠（CMC_Na）平板筛选法筛选纤维素酶高产菌株,利用生理生化分析结合分子生物学法对菌株进行鉴定,并通过3, 5-二硝基水杨酸（DNS）法研究其活性特征与发酵条件。【结果】在长期覆盖枯树叶的土壤中分离获得1株高产碱性纤维素酶的菌株,经鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）,名称为B. cereus strain CQNUX 3-1。酶活性分析显示该菌株胞外分泌液具有内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶的活性,其酶活力分别达107.7、33.1和155.6 U/mL。酶学特征分析表明3种酶组分均具有较好的耐碱和一定的耐高温能力。其中,内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的最佳反应温度分别为70、60和40℃;最佳反应pH分别为8.0、9.0和9.0;Fe3+能增加3种酶的酶活力,而β-葡萄糖苷酶具有较好的EDTA、尿素和Cu2+耐受性。发酵条件对菌株产酶的分析结果表明,该菌株发酵温度在37℃较适宜;发酵第4 d时的酶活力达最大值;该菌株能在碱性发酵环境下生长并产酶,在初始pH为7.0时发酵酶活力最高。【结论】筛选获得的纤维素酶高产菌株B. cereus strain CQNUX 3-1所生产的纤维素酶具有较高的反应温度适用性和较强的碱耐受性,菌株发酵产酶温度适中,且有较宽的发酵pH适用范围,可作为碱性纤维素酶生产资源菌株,具有应用于纤维素酶制剂制备与生产、纤维素资源综合利用等领域的潜力。     

原生质体诱变结合复合抗性筛选杆菌肽高产菌株

[目的]筛选杆菌肽的高产菌株。[方法]将原始菌株经活化后制备原生质体,采用紫外照射75s后再用终浓度为100μg／ml的NTG诱变通过硫酸链霉素＋杆菌肽复合抗性平板筛选杆菌肽的高产菌株。[结果]经过7轮诱变,一共分离了1000个菌株（筛选过的所有菌株）;最终获得C-67号高产菌株,其杆菌肽效价达到963．2957U／ml,相比原始菌株提高22．34％。C-67连续传代5次后,产量仍稳定,表明其遗传稳定性较高。[结论]原生质体诱变结合复合抗性筛选是一种简单高效的微生物育种及筛选方法。