石刁柏花药离体培养及单倍体植株再生的研究

1988至1990年进行了石刁柏花药离体培养,将采集不同时期花蕾接种,低温处理,激素配比,花药培养过程中形态学及花粉粒发育途径,愈伤组织诱导及其类型,花药愈伤组织再分化和染色体倍性,单倍体植株的再生及染色体加倍后入土移栽等方面,均做了较深入的研究,并获得了超雄株即纯合二倍体。     

油菜小孢子培养和双单倍体育种研究 Ⅰ.供体植株和小孢子密度对小孢子培养的影响

在油菜小孢子培养中,通过对供体植株两种生长状况和在NLN液体培养基中三种小孢子密度的研究表明,来自生长室的供体植株,每天摘除将开放的花朵,使其停留在蕾期阶段,油菜花蕾中处于单核期至双核期的小孢子同步化程度高,单核期小孢子核质比大,增长速度快,小孢子成胚的百分率高。平均每毫升NLN液体培养基中接种1个花蕾的小孢子的处理,成胚率最高,而且胚的分化较快。     

油菜小孢子培养和双单倍体育种研究：I.供体植株和小孢子密度对小孢子培养？

在油菜小孢子培养中，通过对供体植株两种生长状况和在ＮＬＮ液体培养基中三种小孢子密度的研究表明，来自生长室的供体植株，每天摘除将开放的花朵，使其停留在蕾期阶段，油菜花蕾中处于单核期至双核期的小孢子同步化程度高，单核期小孢子核质比大，增长速度快，小孢子成胚的百分率高。平均每毫升ＮＬＮ液体培养基中接种１个花蕾的小孢子的处理，成胚率最高，而且胚的分化较快。     

百蕊草离体培养和植株再生体系分析

为了筛选出适合百蕊草阶段式培养的快繁方案,建立较为完善的百蕊草植株再生体系,为后期人工栽培和工厂化育苗提供技术支持.本研究以百蕊草(Thesium chinense Turcz)的茎、叶为外植体,研究不同浓度和种类的激素配比以及外源添加物组合对百蕊草阶段式培养的影响.结果显示,百蕊草愈伤组织诱导的最佳培养基为 MS+0...     

辣椒子叶离体培养再生植株

随着收集到的８个商品辣椒品种的子叶外植体在ＰＤ培养基上形成芽丛，转移到ＰＥ培养基上伸长为具２－３个节的茎芽，茎芽在ＰＲ培养基上生根，得到了再生植株。芽分化率达１００％，移栽成活率１００％。多植体切除芽后回到ＰＤ培养基上的反复操作可重复诱导芽的分化，提高繁殖系数。     

花椰菜游离小孢子培养及植株再生研究

以186个花椰菜杂交品种及组合为试材,进行了游离小孢子培养研究。结果表明:基因型是胚状体发生的决定因素;24 h 32℃的高温前处理是胚状体发生的必须条件;单核靠边期到双核期的小孢子是进行胚状体诱导的最佳时期,胚状体发生频率最高;培养基中添加6-BA 0.1 mg/L,NAA 0.005 mg/L可以促进胚状体发育。将20 d的胚状体进行脱分化处理,可以大幅度提高胚状体的成活率,植株再生率为53%,再生植株中双单倍体占83.5%。     

芜菁小孢子培养中单倍体植株的高频率自然加倍

小孢子培养技术在培养单倍体方面，技术相对简单、效率较高，所以它在植物遗传研究和育种中具有重要的应用价值。芜菁是一种重要的蔬菜作物，但是其小孢子培养难度较大。对B．rapa ssp．chinensis两个变种的各—个基因型进行小孢子培养，共得到3．8～42．4个胚，芽。通过改良的方法，包括诱导48小时后更换培养基和降低蔗糖浓度，在未经继代培养的条件，直接从小孢子诱导胚获得了高频率的再生植株。其中，     

绿菜花游离小孢子培养,胚胎发生和植株再生

取花蕾长３．０－５．５ｍｍ的花序,７％次氯酸钙溶液表面消毒１５ｍｉｎ,无菌水洗３次,然后轻压花蕾,过滤、收集滤液,离心后,将小孢悬浮于经过滤灭菌的改良的１／２ＮＬＮ培养基中,石蜡膜封口,置温度梯度培养箱作３２．５℃、１ｄ的高温热激诱导处理,后置２５℃下继续培养。本试验地１３份绿菜花供试材料的游离小孢培养能力进行初步研究,其中８种基因型（占全部材料的６１．５％）有胚胎发生,并获得５种基因型的再生株。     

基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响

１７个用于大白菜常规育种的基因型在ＮＬＮ－１３液体培养基中进行游离小孢子培养，结果有１６个基因型经由小孢子胚胎发生途径获得小孢子胚。这些基因型包括从早熟晚熟的各种类型。各基因之间在小孢子胚胎发生频率方面存在很大差异，产量最高的两个基因型Ｔ１１和ＣＣ１１，平均每百花蕾分别达３５９２８和３４１３２个胚。供体植株生长环境对小孢子胚胎发生具有明显影响；在１０／２０℃（液／昼）的部分控温温室生长的供体植株，     

大白菜SSR检测体系的优化

以不同地区栽培的5份大白菜品种为试材,从PCR反应组成、扩增程序、电泳检测等环节对SSR技术进行了优化,建立了一套适用于大白菜品种鉴定的SSR-PCR体系.即10 μL反应组成为:1×buffer;2.50 mmol/L MgCl2;0.10 mmol/L dNTPs;0.35 μmol/L SSR引物;1.00 ng/μL模板DNA和0.40 U Taq酶.适宜的扩增程序为72℃热启动3 min,94℃预变性2 min后进行20个迫降循环:94℃变性60 s,68℃退火60 s,72℃延伸45 s(-1℃ /2 cycles);再进行20个循环:94℃变性60 s,58℃退火60 s,72℃延伸45 s,72℃延伸10 min.应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(银染)电泳检测并取得很好的效果.选用108对芸薹属SSR引物,对这5份品种的基因组进行扩增,筛选出具有2条以上特异扩增条带的SSR引物22对.用这些引物对5份品种进行扩增,初步分析了SSR标记的多态性及用于大白菜指纹分析的潜力.     

小白菜抗黄曲条跳甲种质资源的抗虫性鉴定

为了研究小白菜对黄曲条跳甲的抗虫性鉴定方法,采用田间自然鉴定法,参照小菜蛾危害分级标准,比较了黄曲条跳甲成虫为害48个品种小白菜的叶面积损失百分率。结果表明,现行的小菜蛾危害分级标准不适用于黄曲条跳甲成虫;进一步分析发现48个品种小白菜叶片的叶面积损失百分率与其叶片孔洞数显著正相关(r=0.354),表明计数叶片受害孔洞数可以用来鉴定小白菜对黄曲条跳甲成虫的抗虫性。为了创新小白菜对黄曲条跳甲的抗虫性种质资源,采用"叶片受害孔洞计数法"筛选了100个品种小白菜对黄曲条跳甲成虫的抗虫性,得到了5个相对抗虫品种(‘新矮青-9’、‘新夏春3号’、‘918’、‘泰国种子-2’、‘夏冠’)和5个相对感虫品种(‘楚青325-6’、‘青优’、‘鸡毛菜’、‘12#耐抽苔青梗×668-1’、‘富士’),5个相对抗虫品种孔洞数间均无差异,但均极显著低于5个相对感虫品种,这些材料为小白菜抗虫育种奠定了基础。     

几种重金属离子对小白菜种子萌发及生理活性的影响

本试验研究了镍(Ni^2 )、镉(Cd^2 )、铜(Cu^2 )、锌(Zn^2 )、铬(Cr^3 )、银(Ag^ )、铅(Pb^2 )7种重金属离子对小白菜种子萌发和萌动种子细胞膜透性的影响。结果表明，0．5、5mg／L浓度下Zn^2 、Ag^ 、Pb^2 略促进萌发，Cu^2 在50mg／L浓度下极显著地抑制萌发，500mg／L浓度下各离子均显著抑制萌发。0．5mg／L低浓度处理时，Zn^23 和Ni^2 促进小白菜幼芽伸长。随浓度增加，重金属离子均引起小白菜细胞膜透性逐渐增加，但幼芽长度降低。发芽率与细胞膜透性间存在一定的相关关系。综合考虑，Zn^2 对小白菜种子萌发毒性相对较小，Cr^3 毒害最大，Cu^2 毒害仅次于Cr^3 ，500mg／L处理浓度下以Ag^ 毒害最大。     

不同基质对小白菜出苗及幼苗生长的影响

为了降低单独使用泥炭育苗的成本,选用丹麦进口泥炭、珍珠岩、蛭石为原料,按照3种原料的不同配比配制出6种穴盘育苗基质,调查不同基质对小白菜出苗率、叶长、叶宽、叶面积、叶柄长、株高的影响,筛选出适合小白菜育苗且成本相对比较低的基质。通过对小白菜生长发育的调查得出,出苗率的快慢顺序是3＞4＞1＞5＞6＞2,子叶展平快慢顺序是1＞3＞4＞5＞2＞6,2叶1心快慢顺序是3＞1＞5＞4＞6＞2,3叶1心快慢顺序是1＞3＞5＞6＞2＞4;通过对幼苗生长情况的调查可以看出,3号处理的叶数比CK降低了0.9%、叶长降低了1.6%、叶面积降低了1.7%、柄长升高了4.4%、株高升高了0.3%;通过对6项测定指标的相关性分析得出,叶长、叶宽、叶面积与株高呈显著正相关。综上,泥炭∶珍珠岩∶蛭石的比例为7∶2∶1时,栽培效果较为理想,接近丹麦进口泥炭。     

通过游离小孢子培养方法获得小白菜三个变种的胚胎及植株

对普通小白菜、乌塌菜和菜■三个小白菜变种的12个基因型进行了游离小孢子培养试验.从供体母株上选取2～4mm长的花蕾,机械分离小孢子并将其置于含NAA0.5mg/L、6BA0.05mg/L和蔗糖13%的NLN82液体培养基中薄层培养,先在33℃下暗培养24h,后移至25℃下继续暗培养,2周后有9个基因型形成球形期至子叶期胚.将成熟的小孢子胚移至B_5无激素琼脂培养基上,继续发育为植株.     

An Improved In Vitro Culture Procedure for Embryoids Derived from Isolated Microspores of Rape (Brassica napus L.)

An in vitro culture technique was developed that allowed the effective culturing of embryos derived from isolated microspores of rape (Brassica napus L.). The method consists of the use of microspores from buds at well-defined development stages, the use of a double-layer culture medium containing activated charcoal and the incubation of embryoids in culture flasks on a shaker. These culture modifications, together with the growing of embryoids on solid medium with high agar concentration, resulted in a high frequency of embryoids growing directly into plants.     

温州盘菜地方品种鉴定与指纹图谱的分子标记分析

利用基因组DNA的RAPD、ISSR与SRAP等3种分子标记技术,以日本芜菁品种作为外类群,对来自于温州不同地区具有代表性的10个盘菜品种进行品种鉴定与遗传多样性分析。10个RAPD引物共产生多态性条带70条,多态率为71．7％;12个ISSR引物共产生142条清晰带,其中多态性条带70条,多态率为49．3％;8个SRAP引物组合共产生105条谱带,其中多态性谱带78条,多态性比率为74．3％,表明品种间存在较高的多态性。用单个引物NAURP299、NAUISR43以及SRAP引物组合mel／em2,都可以将11个品种完全区分开来。基于3种标记的聚类分析结果表明,11个材料可以分为3大类,一定程度上能够揭示品种之间园艺学性状的相似性及亲缘关系远近。     

小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高。     

海藻酸钠寡糖对菜薹光合特性和碳代谢的影响

采用溶液培养,研究海藻酸钠寡糖对菜薹光合特性和碳代谢的影响。结果表明：海藻酸钠寡糖处理可不同程度提高净光合速率（Pn）、水分利用效率（WUE）和CO2羧化效率（CE）,增加光饱和点（LSP）,并降低光补偿点（LCP）,提高初始荧光（Fo）、最大荧光（Fm）、可变荧光（Fv）、光系统II最大光化学效率（Fv/Fm）、电子传递效率（ETR）和非光化学猝灭系数（NPQ）。蔗糖合成酶（SS）和蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性显著增强,促进蔗糖积累;处理前期转化酶活性有所提高,第6天显著降低,葡萄糖含量也相应下降;淀粉含量随时间延长逐渐增加,纤维素则相反。说明海藻酸钠寡糖可促进光能的捕获及转化,提高其光能利用效率,并改变碳代谢过程,促进碳代谢产物积累。