陕西西安蛋鸡禽肝炎脾大综合征HEV基因3型病毒分离与鉴定

2019年9月,陕西西安市某海兰褐蛋鸡场场出现产蛋率下降,死淘率升高,剖检部分死亡鸡只表现肝脾肿大且易脆破裂,为弄清该鸡场疫情的病因。我们采集了鸡血清32份,胆汁13份,粪便、肝脏和脾脏各11份,然后利用间接ELISA检测血清中是否存在禽HEV抗体,巢式RT-PCR检测粪便、肝脏、脾脏和胆汁样品中是否存在禽HEV核酸。间接ELISA检测结果发现,28份鸡血清禽HEV抗体阳性,阳性率为87.5%;巢式RT-PCR检测结果发现,6份胆汁,5份粪便,3份肝脏和脾脏样品为禽HEV RNA阳性。阳性PCR产物测序后基因序列同源性分析发现,获得的禽HEV ORF2部分基因序列相互之间同源性为99%～100%,与GenBank已知的禽HEV序列同源性在78%～99%,进化树分析表明分离的禽HEV与国内多数禽HEV分离株以及欧洲部分分离株在同一分支上,属于基因3型。上述临床剖检病变和实验室检测技术说明,该鸡场存在禽HEV的感染,此次疫情可能主要是由该病毒感染引起的。     

云南省临沧市猪戊型肝炎病毒流行株遗传进化分析

猪是人兽共患病病原戊型肝炎病毒（HEV）Ⅲ、IV基因型的重要贮存宿主。为了解云南省临沧市猪HEV的遗传进化情况，从规模猪场、猪散养户以及猪屠宰场，随机采集粪便153份、肝脏36份和胆汁54份，采用巢氏PCR进行HEV ORF2基因片段扩增、克隆、测序和生物信息学分析。结果显示：在243份样品中，检出137 bp目标片段阳性61份，阳性率为25.1%(61/243)；对检出的阳性样品进行ORF2部分序列扩增，得到6份348 bp目标片段。6份348 bp目标片段间的核苷酸同源性为86.0%～95.6%，均为基因IV型；与HEVI—VⅢ型代表株的同源性分别为75.0%～81.7%、72.7%～77.0%、72.7%～79.3%、80.5%～94.1%、75.7%～80.7%、75.0%～81.0%、73.3%～80.3%和71.3%～76.1%，与我国人源代表毒株AJ272108BeijingHuman的同源性为81.3%～87.7%；基因亚型分析显示，6份348 bp目标片段中，除1份是4b亚型外，其他5份都属于4a亚型。结果表明，临沧市猪群中存在人兽共患病病原HEV基因Ⅳ型流行，且有通...     

陕西杨凌某蛋鸡场禽戊型肝炎病毒的检测

2014年-2015年陕西杨凌地区部分商品蛋鸡场产蛋量下降了10%~40%,剖检部分鸡只发现肝脏肿大出血。为确诊该疫情的病因,从发病的6个蛋鸡场采集了337份血清和268份粪便,利用间接ELISA和套式RT-PCR分别对血清中的禽戊型肝炎病毒(HEV)抗体和粪便中的禽HEV RNA进行了实验室检测。ELISA检测结果发现,168份血清为禽HEV抗体阳性,阳性率为49.85%;套式RT-PCR检测结果发现,63份粪便为禽HEV RNA基因片段阳性,阳性率为23.51%。基因片段的序列同源性分析发现,杨凌地区的禽HEV分离株与国内的同源性为93.0%~99.2%;进化树分析表明,其与国内其他地区的分离株在同一进化分支上,同属禽HEV基因3型。     

2015年-2016年度南宁部分地区猪戊型肝炎病毒基因型分析

为了解广西猪群中戊型肝炎病毒(HEV)基因型,利用套式RT-PCR用对南宁周边猪场采集到的104份新鲜猪粪便进行HEV检测、分离并成功扩增和克隆了11株阳性毒株的ORF2基因部分保守片段.序列测定结果表明,11株HEV ORF2序列自身核苷酸同源性为97.7%~100%,推导编码的氨基酸同源性为97.9%~100%;与4型HEV代表毒株Ch-S-1、Ch-T11、swGX40等的核苷酸同源性为84.6%~90.6%,而与其他各型之间的同源性较低.系统发育进化树结果表明,11株HEV广西株为基因4型,其中,10株HEV为4a亚型,1株毒株为4e亚型.结果表明,广西猪群中流行的HEV均为基因4型,且以4a亚型为优势流行毒株.     

江西部分地区猪粪便戊型肝炎病毒核酸检测及序列分析

采集江西省A猪场2～3月龄猪粪便40份,B猪场2～3月龄猪粪便40份,利用反转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR),检测戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)RNA,结果表明,A猪场7份样品为阳性,阳性率17.5%.B猪场10份样品为阳性,阳性率25.0%.总阳性率21.3%.对4份PCR扩增阳性产物进行纯化并测序,利用生物学软件进行序列分析和进化树绘制,4个分离株ORF2 348 bp同源性为92.1%～97.5%,为同一基因型,与HEV1、HEV2、HEV3同源性分别为70.7%～77.4%、72.5%~75.7%和71.6%～76.8%,与HEV4型的同源性79.2%～83.9%.4个分离株与HEV4型的代表株T1在同一分支上,属基因4型.与中国大陆6株猪源HEV比较,同源性为79.0%～87.3%,提示中国大陆猪源HEV的基因型比较一致,同属HEV 4型.     

东北边境地区野猪及放养杂交野猪戊型肝炎流行病学调查

为了解东北边境地区野猪及放养杂交野猪群体猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况,于2015—2018年在吉林省、黑龙江省的中朝、中俄边境和内蒙古自治区境内加格达奇周边地区采集6月龄以上杂交野猪血清、粪便或肛拭子样品共520份,采集野猪血清和粪便样品共248份。ELISA检测、RT-nPCR检测、全基因组测序、同源性及进化分析结果显示,杂交野猪和野猪感染HEV的血清抗体总阳性率为34.1%(136/399);核酸总阳性率为1.56%(12/771),12份核酸阳性样品均来自杂交野猪,病毒基因组ORF2部分核苷酸序列同源性为85.4%～100.0%,属于基因4型,4a、4b亚型。对4a亚型的1份阳性样品(LJG-18)进行病毒全基因组扩增测序,其核苷酸序列与日本的人源毒株JKO-ChiSai98C同源性最高,为94.9%,与吉林省猪源毒株Ch-S-1同源性为90.2%。结果表明:东北边境地区放养杂交野猪群具有较高的HEV血清抗体阳性率,HEV流行毒株以4a亚型为主。本试验针对我国野猪及放养杂交野猪群体开展猪戊型肝炎流行病学调查,为该病的流行情况提供了新的科学数据,对我国养猪业健康发展和公共卫生安全具有重要意义。     

在肝脏肿大和产蛋率下降综合征病鸡中检出禽戊型肝炎病毒核酸

为弄清辽宁某蛋鸡场鸡只产蛋量突然下降,死亡率上升及部分剖检鸡只肝脏肿大出血的原因,对采集的发病鸡肝脏组织进行病理学观察,同时对肠道内容物进行禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸片段的RT-PCR检测。肝脏的组织病理学观察发现,肝细胞坏死和汇管区周围淋巴细胞浸润;RT-PCR从肠道内容物中成功扩增到禽HEV ORF2基因的部分片段;基因序列同源性分析结果表明,其与国内禽HEV参考株的序列同源性为97.5%~99.6%,而与其他国家的HEV序列同源性为77.9%~97.6%;进化树分析表明,该序列(命名为China 15-LN)与国内其他地区及欧洲的部分分离株在同一进化分支上,同属禽HEV基因3型。     

猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学

对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析,针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性,且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高10～100倍。利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测。其中,77份人血清样本仅有2份为HEV核酸阳性(2.6%)。而猪粪便样品阳性率则高达20.5%(56/273),且所调查的猪场均存在HEV感染。进一步的分子流行特征分析表明,浙江及周边地区的猪HEV毒株多为基因Ⅳ型,与其他地区的Ⅳ型HEV毒株同源性较高(83.4%～89.5%),但它们之间也存在较多的变异位点。猪源HEV毒株PJ-1则与多数Ⅲ型HEV毒株同源性较高(88%),进化分析也表明其为基因Ⅲ型。人血清样品中检测到的2份HEV毒株Human-1与Human-2与本地区Ⅳ型猪源毒株在分子进化关系上具有很高的亲源性,它们分布于同一分支内,而不构成独立分支。以上分析结果表明浙江及其周边地区猪HEV感染较为广泛,且以基因Ⅳ型毒株为主,但也存在...