O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立

在比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上，设计了检测FMDV的PCR引物及O型FMDV不同基因型即中国型(Cathay)与乏亚株(PanAsia)的二联PCR引物。在确定单项RT-PCR反应条件的基础上，建立、优化了二联RT-PCR反应体系和条件，并进行了相关病毒检测试验。结果表明，建立的检测O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联RT-PCR，有效、特异且敏感，为FMD的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。     

口蹄疫病毒(FMDV)多重RT-PCR检测方法的建立

在大量比较国内外口蹄疫病毒（FMDV）流行毒株序列的基础上自行设计了检测FMDV通用型引物及FMDV AsiaⅠ型、O型口蹄疫病毒不同基因型即：中国型（Cathay）与泛亚株（PanAsia）的多重PCR引物。本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了多重RT-PCR反应体系和反应条件,并进行了相关病毒检测试验。结果表明,本试验建立了有效、特异、敏感的检测FMDV AsiaⅠ型及O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的多重RT-PCR检测方法,为口蹄疫的诊断防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。     

口蹄疫病毒3ABC基因的扩增与序列分析

参考GenBank中发表的猪源O型口蹄疫病毒(FMDV)3ABC的基因序列,设计一对特异引物,分别以5株猪源O型FMDV流行毒株基因组RNA为模板,通过RT-PCR的方法获得3ABC基因,并克隆到pMD18-T载体中.测序结果显示:5株O型FMDV流行毒株的3ABC基因cDNA均为1 281bp,编码由427个氨基酸残基组成的多肽.同源性比较和系统发育树分析表明:5株O型FMDV流行毒株亲缘关系密切,属同一基因型.     

我国口蹄疫流行现状与控制策略

[目的]科学研判我国口蹄疫流行形势,明确今后我国口蹄疫防控的重点工作。[方法]以口蹄疫分子流行病学和我国口蹄疫疫情情况、国家口蹄疫参考实验室疫情监测、主动监测数据为基础,分析了我国口蹄疫流行的现状和特点。[结果]目前,我国口蹄疫流行呈零星散发,毒株复杂,但总体疫情形势平稳。通过口蹄疫分子流行病学分析,表明我国目前主要流行有O型Mya-98毒株、A型Sea-97毒株,而这些毒株均来源于东南亚国家,污染面广,危害严重。[结论]境外流行毒株的威胁依然存在,防堵境外毒株的传入,加强威胁毒株的储备研究,加强免疫与免疫监测仍然是今后工作的重点。     

口蹄疫病毒3ABC基因遗传关系分析

参考GenBank中发表的猪源O型口蹄疫病毒3ABC的基因序列。设计一对特异引物,分别以5株猪源O型FMDV流行毒株基因组RNA为模板。通过RT-PCR的方法获得3ABC基因,并克隆到pMD18-T载体中。测序结果显示,5株O型FMDV流行毒株的3ABC基因cDNA均为1281bp。编码由427个氨基酸残基组成的多肽。同源性比较和系统发育树分析表明,5株O型FMDV流行毒株亲缘关系密切,属同一基因型。     

2006～2007年以色列和巴勒斯坦地区口蹄疫聚集性暴发

口蹄疫在中东地区广泛流行,有观点认为政治的不稳定性及资源的有限性导致了该地区难以控制的口蹄疫疫情。但是口蹄疫流行的真正原因目前尚不清楚。本研究的目的是确定从2006年2月4日至2007年7月15日这段时间在以色列和巴勒斯坦地区暴发的70起口蹄疫疫情的地理位置、持续时间以及扩散方向。扫描统计监测的时空装换模型检测到了9种显著不同的病毒群体(P<0.1),并鉴定出其中4种病毒的扩散方向:加沙地带(该地区未有该病暴发的报道)或相邻地区是2007年4月南部地区该病暴发的来源;2006年约旦河西岸暴发的口蹄疫可能源自北以色列;北部区2007年1月暴发的口蹄疫可能源于约旦边界附近;北部区北部的暴发病毒很可能来自黎巴嫩及叙利亚边界地区。对从暴发口蹄疫地区采集的样本的系统发育分析结果表明,存在约旦河西岸毒株和早期以色列毒株的重组株及北部区和约旦重组株。本研究结果表明,2006和2007年间暴发于以色列及巴勒斯坦地区的口蹄疫毒株可能是中东地区流行的口蹄疫病毒的重组毒株。     

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原，与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构，所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗，用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫，以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础，在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因，经双酶切及测序鉴定，成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞，拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示，该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明，重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性，插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。     

口蹄疫病毒感染与复制多元调控因素研究进展

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是发生于偶蹄动物的一种急性高度传染性疫病,曾多次在世界范围内暴发流行。FMD致病原口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)于感染后利用多种策略操纵宿主免疫机制和逃避抗病毒反应,以利于其感染复制。现对最近几年来影响调控FMDV感染与复制的多种因素从不同角度进行总结分析,以期为后续研究提供参考。     

O型口蹄疫病毒衣壳酸敏感性位点的筛选

为筛选与O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳酸敏感性相关的位点,本研究以牛源O型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株筛选工作.通过给予pH 6.0酸性环境连续诱变,筛选获得6株耐酸性毒株.将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后发现7个核苷酸突变,即共同存在于6株耐酸毒株P1区的错义突变A1334G(Y445C)、A1643G(Q548R)、A1822G/A1823C(N608A)及同义突变G1371A,另有仅存在于耐酸毒株m2 P1区的错义突变C1849T(P617S)和仅存在于耐酸毒株m1 P1区的同义突变G468T.本研究为O型FMDV酸敏感性分子机制的揭示及病毒衣壳酸稳定性的提高奠定了基础.     

O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立

为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法,本实验设计2对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时扩增O型、A型及Asia1型FMDV VP1全基因的套式RT-PCR (RT-nPCR)方法.该方法能特异性检测O型、A型和Asia1型FMDV,对其它相关动物病毒的检测结果均为阴性;比FMDV多重RT-PCR商品试剂盒敏感约1 000倍.利用该方法对10份FMDV样品进行扩增检测,结合扩增产物的克隆测序技术,对所检样品进行了准确定型.实验结果表明,该方法通用型强,可用于3个血清型FMDV的检测和分子流行病学调查.