中国龙虾食物变态反应BALB_c鼠模型的建立

通过腹腔注射的致敏方式建立中国龙虾食物变态反应Balb/c小鼠模型,探讨中国龙虾食物变态反应体外鉴定与评价方法.将40只雄性Balb/c小鼠分为卵清蛋白(OVA)阳性对照组、Coca's液阴性对照组、空白对照组和模型组,以OVA、中国龙虾粗提蛋白,加氢氧化铝佐剂腹腔注射免疫Balb/c小鼠,建立食物变态反应小鼠模型.ELISA法测定第二次致敏激发后血清中IgE与组胺水平并进行被动皮肤过敏试验(PCA)确定特异性IgE抗体滴度,同时观察脾指数、小肠组织学变化及激发后的食物变态反应症状.末次激发后1h采血,中国龙虾粗提蛋白组血清IgE含量为236.75(±73.39) μg/L,与阳性对照OVA组无区别,与阴性对照Coca's液组和正常对照组相比显著升高(P＜0.01);中国龙虾粗提蛋白组的组胺含量406.55(±232.79) μg/L与正常对照组相比显著升高(P＜0.01); PCA反应中国龙虾粗提蛋白组血清特异性IgE抗体滴度达到1/16;中国龙虾粗提蛋白组和OVA致敏组小鼠脾指数明显大于Coca's液或正常对照组(P＜0.01)且前两组小肠粘膜固有层皆出现淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润.建立了一种中国龙虾食物变态反应小鼠模型,通过ELISA测定血清IgE和组胺以及PCA确定特异性IgE抗体滴度可作为一种鉴定与评价中国龙虾食物变态反应的方法.     

中国龙虾食物变态反应BALB/c鼠模型的建立（英文）

[目的]通过腹腔注射的致敏方式建立中国龙虾食物变态反应Balb/c小鼠模型,探讨中国龙虾食物变态反应体外鉴定与评价方法。[方法]将40只雄性Balb/c小鼠分为卵清蛋白（OVA）阳性对照组、Coca’s液阴性对照组、空白对照组和模型组,以OVA、中国龙虾粗提蛋白,加氢氧化铝佐剂腹腔注射免疫Balb/c小鼠,建立食物变态反应小鼠模型。ELISA法测定第二次致敏激发后血清中IgE与组胺水平并进行被动皮肤过敏试验（PCA）确定特异性IgE抗体滴度,同时观察脾指数、小肠组织学变化及激发后的食物变态反应症状。[结果]末次激发后1 h采血,中国龙虾粗提蛋白组血清IgE含量为236.75（±73.39）μg/L,与阳性对照OVA组无区别,与阴性对照Coca’s液组和正常对照组相比显著升高（P〈0.01）;中国龙虾粗提蛋白组的组胺含量406.55（±232.79）μg/L与正常对照组相比显著升高（P〈0.01）;PCA反应中国龙虾粗提蛋白组血清特异性IgE抗体滴度达到1/16;中国龙虾粗提蛋白组和OVA致敏组小鼠脾指数明显大于Coca’s液或正常对照组（P〈0.01）且前两组小肠粘膜固有层皆出现淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润。[结论]建立了一种中国龙虾食物变态反应小鼠模型,通过ELISA测定血清IgE和组胺以及PCA确定特异性IgE抗体滴度可作为一种鉴定与评价中国龙虾食物变态反应的方法。     

异叶败酱多糖的体内抗肿瘤活性研究

【目的】研究异叶败酱多糖抑制U14宫颈癌实体瘤小鼠肿瘤生长的作用机制。【方法】建立小鼠宫颈癌(U14)实体瘤模型,以灌胃生理盐水和皮下注射环磷酰胺(25mg/kg)分别作为阴性和阳性对照,观察异叶败酱多糖不同剂量(30,60,90mg/kg)灌胃给药14d后,对小鼠肿瘤生长抑制作用的影响;检测异叶败酱多糖对荷瘤小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响;用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;利用免疫组织化学法分析与细胞凋亡密切相关蛋白(突变型p53、Bcl-2、Bax)的表达情况。【结果】与阴性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组瘤质量显著下降,荷瘤小鼠血清LDH活性显著降低,Bax蛋白表达量显著升高,突变型p53和Bcl-2蛋白表达量显著下降(P0.05);异叶败酱多糖各组肿瘤组织的细胞凋亡数较阴性对照组均显著提高(P0.05),荷瘤小鼠血清AKP活性有所升高,但与阴性对照差异不显著(P0.05)。与阳性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组抗U14宫颈癌效果接近于临床化疗药环磷酰胺。【结论】异叶败酱多糖具有抑制实体瘤U14生长的作用,揭示该多糖可能通过调节细胞凋亡相关基因的表达,进而促进肿瘤细胞的凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

连翘酯苷A对感染H9N2型禽流感小鼠Toll样受体4信号通路影响的研究

【目的】探究连翘酯苷A对感染H9N2型禽流感病毒小鼠Toll样受体4信号通路的影响。【方法】采用滴鼻方法建立小鼠H9N2型禽流感病毒急性肺损伤模型,120只小鼠随机分为5组(对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组),连翘酯苷A治疗连续7 d,各组在3、5、7、14 d随机选3只小鼠,称量体质量后取肺组织进行肺水肿评估、细胞因子检测、病理切片制作及Toll样受体4相关蛋白变化检测。【结果】与对照组相比,模型组小鼠体质量显著下降出现肺水肿现象,加入连翘酯苷A治疗后体质量呈现上升趋势肺部症状减轻;显微镜观察,模型组小鼠肺部组织比对照组小鼠肺部组织损伤严重,加入连翘酯苷A治疗后有所缓解;模型组血清中细胞因子白介素6含量极显著高于对照组(P0.01),加入连翘酯苷A治疗后,呈现下调趋势;与对照组相比,模型组髓样分化因子、核因子-κB及磷酸化核因子-κB蛋白表达量极显著高于对照组(P0.01),中剂量组与高剂量组髓样分化因子、核因子-κB及磷酸化核因子-κB蛋白表达量极显著(P0.01)低于模型组。【结论】连翘酯苷A可下调Toll样受体4信号通路相应蛋白减轻炎症因子释放。     

美洲大蠊粉对腹泻小鼠治疗的效果

【目的】研究小鼠饲料添加剂美洲大蠊粉对腹泻小鼠腹泻率、稀便率、体重、采食量、饮水量的影响。【方法】采用腹腔注射0.02 mL/g的3×10⁸ cfu/mL大肠杆菌菌悬液建立腹泻模型(5 d),其后在小鼠饲料中添加不同剂量的美洲大蠊粉用于治疗(10 d)。分别在1、3、5、7、9、11、13和15 d测定小鼠体重、采食量、饮水量、腹泻小鼠数、2 h内的稀便数。【结果】在1~5 d,与空白组相比,稀便率、腹泻率逐渐增加, 3~5 d内模型组、高、中、低剂量组的体重、采食量、饮水量差异显著(P＜0.05)。6~15 d,与模型组相比,稀便率、腹泻率逐渐减小,高、中、低剂量组在第7、11 d的体重、9 d的饮水量差异显著(P＜0.05),13 d高剂量组的体重、饮水量、采食量差异显著(P＜0.05),15 d高剂量组的体重、饮水量差异显著(P＜0.05)。【结论】小鼠饲料添加剂美洲大蠊粉能显著的降低小鼠的腹泻率及稀便率,提高腹泻小鼠体重、采食量、饮水量,且高剂量组显著高于中、低剂量组。     

黄花补血草多糖的抗肿瘤作用研究

【目的】研究黄花补血草多糖对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。【方法】制备小鼠H22实体瘤模型。提取黄花补血草多糖,研究其对小鼠H22实体瘤的抑瘤率,并通过病理切片观察肿瘤细胞的形态学变化。用免疫组化SP法检测黄花补血草多糖对H22肝癌细胞Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞数的影响,探讨其抗肿瘤机理。【结果】以阴性对照组为基数,黄花补血草多糖低(120mg/kg)、高(240mg/kg)剂量组及环磷酰胺(CTX,25mg/kg)阳性对照组实体瘤各组抑瘤率分别为31.32%,40.52%和56.61%,与阴性对照组瘤体质量相比显著或极显著减轻。与阴性对照组相比,黄花补血草多糖低、高剂量组Bcl-2蛋白表达分别显著和极显著下调,而Bax蛋白表达显著上调。黄花补血草多糖高剂量组肿瘤细胞表现出坏死如核固缩深染、碎裂或溶解,甚至出现红染区,个别细胞出现染色质浓缩、细胞皱缩、胞膜空泡化和膜周围凋亡小体的形成等凋亡现象。【结论】黄花补血草多糖对小鼠肝癌H22的生长有一定的抑制作用,其机制可能与抑制Bcl-2和提升Bax蛋白表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

健脾益气汤对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响

【目的】探讨健脾益气汤对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。【方法】给小鼠皮下注射环磷酰胺(CTX)30mg/(kg·d),制备免疫抑制模型;阴性对照组小鼠灌胃生理盐水,阳性对照组灌胃0.1g/(kg·d)左旋咪唑,健脾益气汤低剂量给药组(16g/(kg·d))和高剂量给药组(44g/(kg·d))分别灌胃健脾益气汤,研究健脾益气汤对小鼠体质量、脾脏指数以及血清中IgG、IL-2、TNF-α质量浓度和T淋巴细胞亚群中CD4+、CD8+数量的影响。【结果】健脾益气汤低剂量给药组和高剂量给药组均能拮抗由环磷酰胺所导致的体质量下降,健脾益气汤高剂量组显著降低了免疫抑制小鼠的脾脏指数。健脾益气汤可以明显提高免疫抑制小鼠血清中的IgG、IL-2和TNF-α质量浓度,增加免疫抑制小鼠外周血中T淋巴细胞CD4+数量,降低CD8+数量,使CD4+/CD8+提高。【结论】健脾益气汤能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。     

利用Balb/c 小鼠构建家蚕蛹食物过敏模型的研究

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹过敏模型并研究其致敏作用。48只雌性Balb/c小鼠分别用灌胃和皮下注射家蚕蛹蛋白的方法进行致敏。小鼠致敏后通过尾静脉注射伊文斯蓝考察其对血管通透性的影响;光镜和扫描电镜下观察致敏小鼠空肠组织的病理切片;测定血清中IgE、组胺、IFN-γ、IL-4和IL-6等的含量;免疫印记反应测定小鼠血清特异性抗体与家蚕蛹变应原的结合度。结果表明:小鼠发生过敏反应时,血清中产生与家蚕蛹蛋白特异性结合的IgE抗体,血清中组胺、IL-4和IL-6等的含量显著上升,而IFN-γ含量显著下降,同时各致敏试验组小鼠血管通透性增加,空肠组织出现糜烂和结构受损症状。该小鼠致敏模型的成功构建对于后续研究家蚕蛹变应原及其致敏的抗原表位等均具有重要基础作用。     

金莲花胶囊对卵清蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用研究

为探讨金莲花胶囊对卵清蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用,将C57BL/6J小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、阳性药物地塞米松组(2 mg·kg^-1)和金莲花胶囊给药组(200和400 mg·kg^-1),每组6只。采用卵清蛋白和铝佐剂致敏小鼠,每周1次,连续3周;气管滴注卵清蛋白激发1次,滴鼻法给予卵清蛋白激发4 d,建立哮喘模型。金莲花胶囊给药组小鼠D19开始灌胃给药,连续给药7 d;阳性药物组腹腔注射给药7 d。末次激发24 h (D26),检测肺重/体重比值,HE染色观察肺组织形态学变化,PAS染色观察气道上皮细胞黏液分泌状态,天狼星红染色观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润,分光光度法检测肺组织嗜酸性粒细胞过氧化物酶活性。结果表明：与模型组相比,金莲花胶囊能降低哮喘小鼠肺重/体重比值,改善气道嗜酸性粒细胞炎症,减少黏液高分泌和PAS评分,降低肺组织嗜酸性粒细胞过氧化物酶活性;还能减少肺组织中IL-5含量,抑制肺组织IL-5、IL-13、Muc5ac和Eotaxin的mRNA水平。且金莲花胶囊(12.5～50μg·mL^-1     

锁阳乙醇提取物对运动小鼠抗疲劳能力的影响

【目的】研究锁阳乙醇提取物对小鼠抗运动性疲劳作用的影响.【方法】选取青海产药材锁阳,通过加热回流提取获得锁阳乙醇提取物.将小鼠随机分为模型对照组,阳性对照组(红景天口服液、维生素E软胶囊),锁阳乙醇提取物低、中、高剂量组(0.125、0.25、0.5 g/mL),连续灌胃给药14 d后,记录小鼠爬杆时间、负重游泳时间及测定小鼠三磷酸腺苷(ATP)、肝糖原、肌糖原、血糖、血尿素氮(BUN)、血乳酸(LD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)生化指标.【结果】与模型对照组比较,锁阳乙醇提取物不同剂量组均能明显延长小鼠爬杆及负重游泳时间;显著增加ATP、肝糖原、肌糖原、血糖含量;显著减少CK、LD、BUN含量;锁阳乙醇提取物中、高剂量组显著减少MDA含量(P0.05).【结论】在一定剂量范围内,锁阳乙醇提取物可以增强运动耐力、提高氧化应激能力和改善能量代谢,有显著的抗疲劳作用.     

马齿苋多糖对糖尿病小鼠糖脂代谢相关因子的影响

【目的】探讨马齿苋多糖（Polysaccharide of Portulaca oleracea L.,POP）对糖尿病小鼠糖、脂代谢相关因子的影响,为POP的开发利用提供依据。【方法】采用饲喂高糖高脂日粮并注射链脲佐菌素（STZ）的方法,诱导Ⅱ型糖尿病（NIDDM）小鼠动物模型,然后将其分为正常对照组、模型对照组、POP低剂量灌胃组(POP用量100 mg/kg)、POP高剂量灌胃组(POP用量200 mg/kg)和罗格列酮灌胃组(罗格列酮用量3 mg/kg),连续灌胃28 d后,将小鼠断头处死,采集肾组织,检测蛋白激酶B（PKB）、PKC、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）等糖脂代谢相关因子在糖尿病小鼠肾脏中表达量的变化。【结果】与模型对照组相比,其余各组小鼠肾组织PKB蛋白、PPARγ蛋白表达量均显著增加(P<0.05),正常对照组、POP高剂量灌胃组和罗格列酮灌胃组小鼠肾组织PKC蛋白表达量显著降低(P<0.05)。【结论】POP能上调NIDDM小鼠PKB、PPARγ基因的表达,能下调PKC基因的表达,从而发挥降低血糖的作用。     

枸橼酸氢钾钠颗粒与八正散对小鼠三聚氰胺中毒模型的治疗效果

【目的】观察八正散(bazheng powder,BZP)和枸橼酸氢钾钠颗粒(potassium sodium hydrogen citrate,PSHC)单独或联合用药对三聚氰胺中毒小鼠模型的治疗效果,为三聚氰胺中毒的临床治疗提供参考。【方法】以1 500 mg/kg三聚氰胺连续15 或30 d对小鼠灌胃0.4 mL/（只·d）,构建小鼠三聚氰胺中毒模型,然后将其分成生理盐水对照组和药物治疗组,用质量浓度为1.12,0.56,0.28 g/mL的BZP和含量为1.44,0.72,0.36 g/kg的PSHC单独或联合治疗,每天1次,灌胃量0.4 mL/（只· d）,7 和15 d后测定血清肌酐(CRE)、尿素氮( BUN)和尿酸(UA)浓度,治疗15 d后处死小鼠,取肾脏称质量,计算肾脏系数。【结果】治疗7 d后,治疗组血清指标CRE、BUN、UA值均比对照组低;与治疗7 d相比,治疗15 d 时,CRE、BUN、UA值进一步降低,且仍低于对照组。 除0.56 g/mL BZP+0.72 g/kg PSHC和1.44 g/kg PSHC组外,其他各治疗组小鼠总肾脏系数均显著低于对照组（P<0.05）。【结论】BZP和PSHC单独或联合用药对小鼠三聚氰胺（1 500 mg/kg）中毒有治疗效果。治疗7 d 时,0.56 g/mL BZP+0.72 g/kg PSHC组和0.28 g/mL BZP+1.44 g/kg PSHC组的联合治疗效果较好;治疗15 d 时,以0.28 g/mL BZP组的单独治疗效果及0.28 g/mL BZP+1.44 g/kg PSHC和0.28 g/mL BZP+0.36 g/kg PSHC组的联合治疗效果较好。     

溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的影响

【目的】研究溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的影响,为溶葡萄球菌素的食用安全性评估提供参考。【方法】将24只7周龄ICR小鼠随机分为3个试验组和对照组,3个试验组分别提供溶葡萄球菌素含量为1 μg/mL（低剂量）、5 μg/mL（中剂量）和15 μg/mL（高剂量）的饮水10 mL/(只·d),于饮用第0(饮用前),1,3,7,14,21天以及停饮第3,7,14天采集小鼠新鲜粪便样品,采用PCRDGGE技术检测小鼠肠道菌群结构变化。【结果】DGGE图谱显示,各组小鼠试验前后不同时间肠道内的优势菌种相似;经UPGMA聚类分析,与对照组相比,低、中剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较小,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较大;差异性分析结果显示,试验组饮用各阶段带谱与试验前的相似性与对照组相应阶段的相似性差异均不显著（P＞0.05）,溶葡萄球菌素低、中和高剂量组在停饮后第7天带谱与饮用前的相似性分别达到了70.8%,66.9%和63.8%;对图谱中主要条带进行测序和比对分析,结果表明,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道中Lactobacillus taiwanensis和1株不可培养细菌有促进作用。【结论】溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的改变具有浓度依赖性,且停饮后小鼠肠道菌群结构有一定程度的恢复。     

监测重组蛋白EgM9免疫犬的特异性抗体变化

[目的]探索EgM家族重组蛋白(EgM 9)与Iscom为佐剂结合免疫犬后血清抗体变化规律.[方法]利用间接ELISA法检测免疫组与对照组血清特异性抗体(IgG、IgGi,IgG2,IgA、IgM和IgE)的变化规律,并以Western-blotting方法进行验证.[结果]经统计学方法分析显示,免疫组与对照组特异性抗体IgG及其亚类IgG1,IgG2,差异极显著(P <0.01),而特异性抗体IgA,IgM和IgE差异不显著(P > 0.05).[结论]证实EgM家族重组蛋白(EgM 9)与Iscom为佐剂结合能引起犬特异性免疫应答.     

甘薯叶黄酮对Ⅱ型糖尿病模型小鼠的降糖及DNA损伤修复作用

【目的】探讨甘薯叶黄酮（FIBL）的降糖作用及其对糖尿病DNA损伤的修复作用。【方法】采用高糖高脂日粮和链脲佐菌素（STZ）建立Ⅱ型糖尿病（NIDDM）小鼠动物模型,然后将其分为模型对照组（DC）、FIBL低剂量组（FTL）、FIBL高剂量组（FTH）和罗格列酮组(RT组),另取正常小鼠作为正常对照组（NC）。其中,正常对照组、模型对照组小鼠每天灌胃0.2 mL dH₂O,FIBL低剂量和高剂量组小鼠每天分别灌胃75 和150 mg/kg 的FIBL,RT组每天灌胃3 mg/kg 罗格列酮,连续灌胃28 d。对小鼠一般情况进行观察,并于灌胃0(灌胃前),7,14,21,28 d尾静脉采血检测血糖;29 d时,断头采血检测血脂,并分离淋巴细胞,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA损伤情况。【结果】动物模型建模成功后,Ⅱ型糖尿病（NIDDM）小鼠存在多饮、多尿、多食,及一定程度的胰岛素抵抗等情况。FIBL治疗结果显示,FIBL能控制NIDDM小鼠体质量的增长;能有效降低NIDDM小鼠的血糖、血脂水平;对NIDDM小鼠的DNA损伤具有修复作用。【结论】甘薯叶黄酮能改善高血糖症状及脂质代谢紊乱状况;可以治疗和延缓NIDDM并发症的发生。     

热应激对猪睾丸Cyt-C和Caspase-3表达的影响

【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20—27℃的猪舍。手术摘取睾丸组织,用QRT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测Cyt-C和Caspase-3表达与定位的变化。【结果】QPT-PCR结果显示,与对照组相比,热应激处理7 d组和42 d组,Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量最高。Western blot结果显示,热应激处理7 d组和42 d组Cyt-C和Caspase-3蛋白水平与对照组相比均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3的蛋白表达水平最高。免疫组织化学研究发现,Cyt-C在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中,在生精细胞Cyt-C低表达于精原细胞,高表达于减数分裂后精母细胞和精子细胞。热应激处理导致Cyt-C的胞质内定位更加弥散,提示Cyt-C从线粒体到胞质的释放。Caspase-3在间质细胞和精原细胞低表达,大量减数分裂后的生精细胞呈Caspase-3阳性。与对照组相比,热应激处理导致部分支持细胞Caspase-3的表达,大量生精细胞的细胞核呈Caspase-3阳性着色。【结论】高温热应激处理导致猪睾丸Cyt-C和Caspase-3的蛋白和m RNA表达水平升高、细胞定位改变,提示Cyt-C和Caspase-3可能与热应激导致的猪精液品质下降存在关联。     

盐酸克伦特罗对小鼠肺脏组织结构及抗氧化能力的影响

【目的】通过对肺脏组织结构的观察及其抗氧化指标的测定,研究盐酸克伦特罗（CLH）对肺脏损伤的影响。【方法】给小鼠分别灌胃12.5,25.0,50.0 mg/kg的CLH连续30 d,对照组灌胃等量生理盐水,在灌胃处理5,10,20,30 d时用生物显微技术观察小鼠肺脏结构的变化,用免疫组织化学方法观察Bax蛋白在肺脏的表达,用比色法检测肺脏SOD、CAT活性及MDA含量的变化。【结果】与对照组比较,灌胃CLH小鼠肺脏SOD、CAT活性降低,MDA含量升高,肺泡直径、肺泡隔厚度、Bax蛋白阳性表达的面密度值升高;CLH对小鼠肺脏的影响具有时间剂量效应;双因素方差分析表明,剂量因素对结果的影响大于时间因素。【结论】CLH可破坏机体氧化与抗氧化的动态平衡,对小鼠肺脏组织结构的损伤可能与肺脏中SOD、CAT活性的降低及MDA含量的升高有一定相关性。     

原核表达番鸭呼肠孤病毒σC与σB蛋白对雏番鸭的免疫保护

【目的】探讨原核表达的番鸭呼肠孤病毒（DRV）外壳蛋白σC与σB对于雏番鸭的免疫保护作用,为研制有效的DRV亚单位疫苗提供理论基础。【方法】对pET-30a-S3/BL21重组菌与pET-30a-S4 ORF2/BL21重组菌进行稳定性检验,表达的重组蛋白进行纯化和复性后,进行油乳剂制备,50只1日龄雏番鸭随机平均分为5组,即DRV σB蛋白免疫组、DRV σC蛋白免疫组、DRV σB + σC蛋白免疫组及PBS对照组和攻毒对照组,免疫组皮下接种剂量为500 μg/只,7日龄时进行二次免疫,14日龄时进行攻毒试验,ELISA和琼扩（AGP）检测抗体水平并计算保护指数。【结果】重组菌具有良好的稳定性,各免疫组的雏番鸭均在第2次免疫后7 d产生了一定效价的抗体,其中DRV σB + σC蛋白免疫组和DRV σC蛋白免疫组的雏番鸭血清抗体ELISA效价均为1﹕200,高于DRV σB蛋白免疫组的1﹕100。攻毒保护试验结果表明,联合免疫的保护指数最高,可达70,重组DRV σC保护指数次之,为60,重组DRV σB蛋白保护指数最低,仅为40。【结论】使用原核表达的DRV外壳蛋白σC与σB制备油乳剂,联合免疫可诱导雏番鸭快速产生一定效价的抗体,并提供良好的免疫保护力。