链霉菌YH 9407菌株的化学分类研究

在形态学分类的基础上,从细胞壁组分的氨基酸组成、糖的类型、蛋白质和同功酶谱等方面对农用抗生素TS 99产生菌YH 9407菌株的分类地位进行了探讨.结果表明,链霉菌YH 9407菌株与对照菌株杀真菌链霉菌G.4.1312的细胞壁氨基酸组成、全细胞糖型相同,均为氨基酸Ⅰ型细胞壁,糖型C;YH 9407与对照菌株在对数生长期时的蛋白质电泳谱带完全一致.在测定的6种同功酶谱带中,PAL(Phenylalanine ammonia lyase)有2条带的差别,POD(Peroxidase)只有1条带的差别,SOD(Superoxide dismutase),CAT(Catalase),PPO(Polyphenol oxidase)以及淀粉酶(Amylase)的谱带完全相同.说明链霉菌YH 9407与对照菌株杀真菌链霉菌G.4.1312在分类地位上相近,可归为同一类群.     

绣球菌菌丝体及担孢子的电镜观察

在真菌分类中,菌丝和孢子的显微特征是区分种的一个重要依据。本研究对绣球菌担孢子和菌丝进行电镜观察。结果表明：菌丝白色,粗细比较均匀,菌丝直径为1.40～2.12μm ,双核菌丝有明显的锁状联合现象;孢子近圆形至椭圆形,孢子大小为（3.1～4.4）μm ×（3.8～5.5）μm。此研究有助于绣球菌属的鉴别和分类。     

小麦纹枯病菌拮抗链霉菌SCY505的筛选与鉴定

从河南省许昌地区的小麦田土样中分离到1株对小麦纹枯病菌有稳定拮抗作用的链霉菌菌株SCY505。在形态特征、生理生化特性和细胞壁化学组分分析的基础上,结合16S rDNA及16S-23S rDNA intergenic spacer region(ISR)序列分析,对菌株SCY505进行了分类鉴定,同时测定了该菌株的拮抗谱。结果表明,SCY505的基内菌丝无横隔,不断裂;气生菌丝多分枝,孢子丝直生或呈螺旋状,孢子椭圆形或圆柱形,表面光滑;细胞壁化学组分Ⅰ型;16S rDNA序列长度1521bp(GU045548),与淡紫灰链霉菌的16S rDNA序列同源性达99.7%,ISR序列长度372bp(GU358067),与淡紫灰链霉菌亚种(U93347)的ISR序列同源性为82.9%,初步认为SCY505是淡紫灰链霉菌的一个亚种,暂命名为淡紫灰链霉菌许昌亚种(Streptomyces lavendulaesub sp.xuchangensis)。该菌株对供试的10种植物病原真菌均有较好的抑制效果。     

几丁质酶产生菌的筛选及其发酵液对病原真菌的拮抗作用

采用稀释平板涂抹法从山东的土样和水样中分离到了31株产几丁质酶的菌株,通过几丁质水解圈直径和摇瓶试验筛选出产几丁质酶活力较高的A9和A112株菌。研究发现:①经过对它们细胞形态和菌落形态特征的观察,证明A9和A11菌株分别是链霉菌和芽孢杆菌。②测定A9和A11菌株几丁质酶发酵液对植物病原真菌孢子萌发的抑制率分别为26.1%～78.6%和17.2%～73.7%,孢子和菌丝有的变畸并产生泡囊;平皿拮抗试验表明,它们能够抑制多种植物病原真菌的生长,表明它们对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。     

A2C菌株杀菌活性研究及菌株初步鉴定

从陕西户县土样中分离到放线菌A2C菌株,经培养特征、形态特征以及生理生化特性研究,初步鉴定为链霉菌属吸水类群中的烬灰吸水链霉菌的一个变种,其代谢产物具有广泛的杀菌活性。杀菌活性生测结果表明:A2C菌株发酵液滤液对15种供试病原真菌中的10种真菌的菌丝生长抑制率达90%以上,其中对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌的抑制中浓度(EC50)分别为67.25、40.87、45.19μg/ml,对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌的孢子萌发抑制中浓度分别为104.12、264.47、305.05μg/ml。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为30.1、32.6、28.5、32.9 mm。A2C菌株发酵滤液防治小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果分别达到90.3%和87.0%。田间防治番茄叶霉病和黄瓜霜霉病的效果分别为87.8%和59.8%。     

尖顶羊肚菌菌丝、分生孢子及原基显微观察与分析

借助光学显微镜对尖顶羊肚菌(Morchella conica)菌丝、分生孢子及原基进行了显微观察分析。结果表明,尖顶羊肚菌气生菌丝呈透明状,根部粗,直径40～70μm;前段菌丝变细,直径20～60μm,且分叉增多。气生菌丝上有似孢子梗形成。土壤内菌丝粗,直径40～80μm,颜色比气生菌丝深,多见分叉与三角形联接。气生菌丝前端分枝形成孢子梗,分枝菌丝直径约20μm,分生孢子轮生于孢子梗上。同时还观察到,原基根部与1～3根活跃菌丝紧密相连,活跃菌丝直径40μm左右,在近原基端颜色深红,菌丝内分隔清晰可见,常呈叉状。推测是由活跃菌丝与分生孢子相互发生作用形成了原基,据此提出了羊肚菌生活史新模型。     

土壤拮抗链霉菌R15菌株发酵产物的抑菌作用

对一株土壤拮抗链霉菌(Streptomycespp.)R15菌株发酵液的抑菌效果、热稳定性和酸碱稳定性以及作用机制进行了初步研究。结果表明,拮抗链霉菌R15发酵液对棉花枯萎病菌分生孢子萌发抑制作用强,抑制率达98.37%。烟草赤星病菌孢子萌发后芽管顶端膨大成球形,芽管停止生长;烟草炭疽病菌孢子萌发后不能产生附着胞,且芽管顶端有突起。处理烟草黑胫病菌和辣椒疫霉病菌菌丝畸变、扭曲、菌丝壁消解;R15通过菌丝缠绕、穿透、紧贴的方式重寄生于烟草黑胫病菌菌丝上,致使菌丝断裂。链霉菌R15发酵液的热稳定性和酸碱稳定性较强,在20～55℃,pH3～9范围内都具有抑菌活性。     

抗黄瓜枯萎病原真菌海洋链霉菌的筛选及其多样性分析

从大连海域不同采样地点采集海泥样品,用平板稀释法,分离获得海洋放线菌95株,根据菌丝生长状态以及可溶性色素产生情况,选取其中48株进行16SrDNA序列分析,构建系统发育树并测定其生理生化特征。研究结果表明,供试48个菌株均属于链霉菌属,分属9个类群20个种。对黄瓜枯萎病尖镰孢菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)的抑制活性测定结果表明,链霉菌菌株M95、M108、HL9、HE16、HE66和YH91对尖镰孢菌具有一定的抑制作用,其中菌株YH91的抑菌效果明显。     

茭白黑粉菌营养菌丝的分离与确证

茭白黑粉菌冬孢子通过单孢子分离所得菌株,在马铃薯琼脂培养基上菌丝呈梭状,一般1～17个隔,于分隔处可产生1～2级分支或不分支,其上产生担孢子,两端尖锐或略钝圆,大小为1.5～6.0 μm×16.5～225.0 μm.这些形态特征与冬孢子在马铃薯液体中萌发形成的菌丝形态完全一致.此外,梭状菌丝能在人工培养基上形成厚垣孢子,其萌发方式与冬孢子一致.由此,确证了梭状短菌丝是茭白黑粉菌(Ustilago esculenta)的营养菌丝.     

蓝莓叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确蓝莓叶斑病病原菌种类及其生物学特性,采用组织分离法和单孢分离法对病原菌进行分离纯化,通过形态学特征和多基因联合序列分析进行病原鉴定,采用叶片涂抹接种法测定其致病性,并于室内对其生物学特性进行研究.结果表明,从发病蓝莓叶片分离得到3株形态特征一致的菌株,代表菌株LC-1菌落呈深棕色,菌丝白色至浅红棕色;大型分生孢子梗无色透明,长303～410μm,分枝末端产生2～4个瓶梗;囊泡棒状,大小为(12～30)μm×(2～5)μm;大分生孢子无色透明,圆柱形,两端半圆形,大小为(48～82)μm×(4～7)μm.采用Act,H3,EF-1α和β-tub 4段基因联合构建系统发育树,供试菌株LC-1与柯氏丽赤壳菌(Calonectria colhounii)聚在同一分支.蓝莓叶片接种菌株LC-1后出现典型的叶斑症状.根据形态学特征和系统发育分析,将该病原菌鉴定为柯氏丽赤壳菌.生物学特性研究结果表明,菌丝最适生长温度为25℃,最适pH值为7,该菌对可溶性淀粉的利用最好,菌丝生长的最适氮源为甘氨酸.     

拮抗链霉菌S93发酵条件初探

本研究对最初的最小培养基(NMM)配方进行改进,培养及发酵的最佳条件表明,最适培养基组成(%):葡萄糖2,蛋白胨0.3,硫酸铵0.1,硫酸锌0.1,硫酸亚铁0.1,氯化钙0.1,PH 6。最适培养条件:25℃,200 R/MIN,500 ML装液量60 ML时效果较好。     

菌株Streptomyces S_(90)抗菌物质的初步鉴定及抑菌作用机制研究

采用Doskochilova溶剂系统层析、pH纸层析和纸电泳测定表明:菌株StreptomycesS90发酵液中具有抑菌活性的物质为一种单组分碱性水溶性抗生素。采用大孔树脂吸附法提取得到了该抗菌物质的粗提物,研究其对烟草赤星病菌的作用机制表明,当抗菌物质浓度为1.6mg/mL时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达到82.06%和78.80%;随着各处理浓度的增加,抗菌物质使病菌菌丝细胞膜电导率和丙二醛含量变化均增加;抗菌物质对病菌菌丝细胞壁组成物质几丁质没有影响。     

瓜类枯萎病拮抗放线菌T8-41的鉴定

[目的]为阐明1株拮抗放线菌菌株的分类地位提供依据。[方法]以从东北地区蔬菜保护地土壤中分离的1株拮抗放线菌菌株T8-41为试材,分析其形态和培养特征、细胞壁成分和生理生化特性。经PCR扩增后,对其与相关菌株的16S rDNA进行同源性分析和聚类分析。[结果]拮抗菌株T8-41属于典型的链霉菌属菌丝形态。其细胞壁中含有L-DAP和甘氨酸,细胞壁类型为I型。该菌可利用D-木糖、L-鼠李糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、葡萄糖、D-甘露醇和肌醇,但不利用乳糖。可以初步鉴定为绿产色链霉菌。T8-41菌株的16SrDNA全长为1 465 bp,与绿产色链霉菌相似性达99%。[结论]链霉菌T8-41属于青色类群的绿产色链霉菌,可将其定名为绿产色链霉菌T8-41(S.viridochromogenes T8-41)。     

农抗链霉菌BM10菌株的初步研究

[目的]开发农用抗生素新品种。[方法]对该实验室2005年从海南霸王岭原始森林土壤中分离筛选获得的BM10生防菌株进行分类鉴定,并测定其抑菌活性。[结果]链霉菌BM10菌株的孢子丝形态、生理生化特性和细胞壁化学组分与Streptomyces albogriseus基本一致,但在菌落颜色、产黑色素和棉子糖利用等方面存在不同。BM10菌株与Streptomyces albogriseus的16SrDNA序列同源性为99.67%。[结论]初步判定BM10菌株为白浅灰链霉菌的新菌株。     

农抗链霉菌BMIO菌株的初步研究

[目的]开发农用抗生素新品种.[方法]对该实验室2005年从海南霸王岭原始森林土壤中分离筛选获得的BM10生防菌株进行分类鉴定,并测定其抑菌活性.[结果]链霉菌BM10菌株的孢子丝形态、生理生化特性和细胞壁化学组分与Streptomyces albogriseus基本一致,但在菌落颜色、产黑色素和棉子糖利用等方面存在不同.BM10菌株与Streptomyces albogriseus的16SrDNA序列同源性为99.67%.[结论]初步判定BM10菌株为白浅灰链霉菌的新菌株.     

几种放线菌处理后对猪粪中主要病原菌和恶臭产生菌的影响研究

采用室内培养方法,研究评估了细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）、抗生链霉菌（Streptomyces antibioticus）、灰色链霉菌（Streptomyces griseus）三种放线菌及其组合对猪粪中主要病原菌的影响,并对其体外的抑菌作用机理进行了初步探讨。结果表明,接菌处理能有效减少猪粪中的沙门氏菌（Salmonella spp.）、病原性大肠埃希氏菌（Escherichia coli O157）、空肠弯曲杆菌（Campylobacter spp.）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenos）的数量。与对照组相比,单独添加细黄链霉菌组后猪粪中空肠弯曲杆菌的数量从3.1×101cfu·g^-1降至不可检测。放线菌胞内外活性混合物质的体外抗菌试验的结果显示,不管是单独处理还是几种放线菌的复合处理都对供试的大肠杆菌、梭菌、优杆菌、沙门氏菌、病原性大肠埃希氏菌、空肠弯曲杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌表现出一定程度的抑制作用,在抑菌能力方面,单独添加细黄链霉菌的效果优于其他各组。     

植物内生菌研究综述

本综述了植物内生菌的研究概况,并对内生链霉菌的应用前景提出了其独到见解。     

一株产黑色素链霉菌的分类鉴定

菌株S3是从厦门石胄头近海海水中分离到的,不产生抗菌活性物质,而产黑色素的一株放线菌.在其形态、培养及生理生化特征、细胞壁组分测定等传统的分类学方法的基础上测定和分析了菌株的16S rDNA序列.结果表明,菌株S3在多种培养基上产黑色素,孢子椭圆或圆柱状,在ISP培养基上培养特征与Streptomyces Puniciscabiei基本一致,菌株S3的16S rDNA序列与S.Puniciscabiei的同源性为99.595％,鉴定其为S.Puniciscabiei.     

拮抗链霉菌NW136菌株鉴定及其对番茄灰霉病等真菌病害的控制效果

从陕北地区的土壤放线菌样品中分离到一株链霉菌NW136。该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征与已报道的近似种不同,而与微白链霉菌相似。室内和田间试验表明,它所产生的抗生素对番茄灰霉病等具有良好的防治效果。     

南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)固体种子培养的研究

本研究进行了南昌链霉菌孢子培养基和培养条件的筛选。筛选到的培养基和培养条件,使南昌链霉菌每支斜面孢子达5亿多,是高氏培养基产孢量的7.5倍,培养时间缩短了7～10天。同时初步探讨了南昌链霉菌在固体培养基上孢子的消长变化及对摇瓶发酵产素的影响,发现该菌在固体培养基上能周期性地产生多代孢子;摇瓶发酵,接种第一代孢子南昌霉素 A 产量最多,接种第二代孢子则高效杀虫组分 B 的效价最高。