电脉冲及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究

实验研究了不同电脉冲条件、6-DMAP作用不同时间以及二者联合使用时对注射hCG后18～19h采集的小鼠卵母细胞孤雌激活及发育的效果。结果表明:小鼠卵母细胞电激活后,放入2mmol/L6-DMAP的CZB中作用6h,其激活率和囊胚率都显著高于单独使用一种激活方法。其中场强2.0kv/cm,脉宽80μs,3次脉冲结合6-DMAP组的激活率和囊胚发育率最高,与其他两组差异显著。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了浅要的综述和总结。     

牛卵母细胞的孤雌激活研究

本文探讨了透明质酸酶(HYA)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲 乙醇 6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇 6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度、脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细胞成熟培养22h,用0.20%HYA作用10min或0.50%HYA作用5min效果较好。在激活电压1.6kV/cm、20μs/次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇 6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19.6%和26.9%,差异不显著。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究

研究哺乳动物卵母细胞的激活及孤雌胚发育,对了解哺乳动物早期胚胎发育、深入细致地研究核移植技术和动物克隆技术、建立生产孤雌哺乳动物品系及加速家畜育种进程等均具有重要意义。本文主要从卵母细胞孤雌激活的机制及影响因素、不同动物卵母细胞的激活、提高卵母细胞孤雌激活效果的技术途径以及对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作了详尽论述,为同类研究提供参考。     

Ca-A23187及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究

孤雌生殖(parthenogenesis)是指无雄性配子的任何作用,由雌性配子产生个体的繁殖.孤雌生殖技术通过人工刺激模拟受精过程,提高胞质内钙离子浓度,从而使卵母细胞在无需精子条件下被激活,是一项重要的生物技术.钙离子载体A23187作为常用的化学激活介质广泛应用于哺乳动物卵母细胞的激活,钙离子载体A23187通过C...     

激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响

系统探讨了几种激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响。体外成熟 (IVM) 2 6 h的水牛卵母细胞经 7%乙醇(EH)、钙离子载体 (A2 3187)或离子霉素 (Ion)激活处理 5 min后 ,在 2 m mol/ L 6 -甲二氨基嘌呤 (6 - DMAP)中培养 3～4 h,然后再继续培养 6～ 11d,观察其胚胎发育情况。结果发现 ,5μmol/ L Ion激活处理的水牛卵母细胞分裂率显著高于 EH处理的卵母细胞 (6 3.0 % vs5 4 .2 % ,P<0 .0 5 ) ,其原核形成率也显著高于 EH处理的卵母细胞。激活处理前 ,无Ca2 培养液孵育时间的长短 ,对水牛卵母细胞孤雌发育无显著影响 (P>0 .0 5 )。如用 A2 3187激活处理水牛卵母细胞 ,其激活分裂率则随着浓度的升高而提高。从而表明 ,5 μmol/ L Ion可有效激活水牛卵母细胞     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文概述了卵母细胞孤雌激活的研究历程,并从激活机制、激活方法及影响因素等方面对孤雌激活的研究意义和发展前景进行了综述。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了浅要的综述和总结。     

兔卵母细胞孤雌激活方法的研究

对兔卵母细胞的孤雌激活方法进行探讨,为兔的体细胞核移植奠定良好的技术平台。体外成熟培养20～22h的兔卵母细胞随机分组,分别进行以下试验：采用不同脉冲电压、脉冲次数和脉冲时间,电激活兔卵母细胞,摸索最佳电激活参数;比较不同的激活方法处理免卵母细胞的效果,Ⅰ：Ion5min＋6-DMAP3h,Ⅱ：Ion5min＋CHX3h,Ⅲ：Ion5min＋6-DMAP联合CHX3h,Ⅳ：电激1次联合6-DMAP＋CHX3h;优化6-DMAP与CHX作用时间。结果显示：当电激参数为：电压40V／mm,脉冲时间20μs和脉冲次数3次时,兔孤雌胚的分裂率和囊胚率最高,可达80．64％和14．51％;采用第Ⅳ种方法激活兔的卵母细胞,胚胎的分裂率和囊胚率（80．64％,13．71％）均显著高于Ⅰ组（66．67％,8．6％）和Ⅱ组（43．21％,1．24%,P〈0．05）,略高于第Ⅲ组（77．59％,12．07％）;当兔孤雌胚分别在含6-DMAP和CHX的CM中培养1。h和3h时,1h处理组在分裂率（80．68％vs77．59％）和囊胚率（15．91％vs12．07％）上都略高于3h处理组。结果表明：兔卵母细胞经Ion处理5min,或先电激1次（参数为电压40V／mm,脉冲时间20μs,脉冲3次）,再用2mmol／L6-DMAP＋5mg／LCHX处理1～3h,均可获得较好的激活效果,有利于兔孤雌胚的发育。     

猪体外成熟卵母细胞孤雌激活和胚胎培养的研究

以猪体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了不同激活方法、激活时间以及是否添加滋养层细胞的条件对猪成熟卵母细胞体外培养的影响。结果表明,Ionomycin+6-DAMP+CB法卵裂率高,且差异显著;使用6-DMAP激活3h的卵裂率要低于4h和5h组,且差异显著;在卵裂率、8细胞率和囊胚率上,添加滋养层细胞组与未添加滋养层细胞组之间无显著差异,但添加vero细胞后效果略好。     

不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

卵母细胞孤雌激活是核移植的关键技术之一，卵母细胞激活率的高低直接影响核移植的效率。作者主要对卵母细胞孤雌激活的机制、激活途径及不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活进行概括性的分析。     

兔·卵·母·细·胞·孤·雌·激·活·的·研·究

本研究探讨了兔卵母细胞孤雌激活的方法。兔卵母细胞经7%乙醇单独激活处理5min的卵裂率(13.0%),显著低于乙醇处理后在2mmol/LDMAP继续处理3h(48.1%)和5μmol/L离子霉素处理后在DMAP继续处理3h的卵母细胞(92.2%);离子霉素+DMAP处理组的囊胚发育率(27.1%)亦显著(P<0.05)高于乙醇+DMAP处理组(15.4%)和乙醇单独处理组(0%)。当用离子霉素和DMAP激活处理时,注射hCG后18h卵母细胞的卵裂率(92.1%)和囊胚率(35.3%)最高2,4h后卵母细胞的卵裂率(19.0%)和囊胚发育率(4.2%)均显著(P<0.05)下降。卵母细胞经离子霉素激活处理后,在DMAP继续处理1、35、h的卵裂率差异显著(P<0.05);而囊胚发育率无显著(P>0.05)差异。离子霉素和DMAP处理后再电激1次对卵母细胞的卵裂率(83.3%、80.0%)和囊胚率(30.0%、27.0%)无显著(P>0.05)影响。以上研究表明:离子霉素+DMAP是兔卵母细胞最有效的激活方法,注射hCG后18h的卵母细胞可取得较好的激活效果。     

小鼠卵细胞体外成熟培养及孤雌激活

[目的]利用小鼠卵母细胞体外成熟培养及3种激活方法（乙醇激活、氯化锶激活、乙醇-氯化锶激活）对小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。[方法]小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得3级未成熟卵母细胞．在成熟培养液（M199100mL＋丙酮酸钠2．2mg＋抗100IU／mL＋LH2IU／mL＋FCS10％）中对小鼠未成熟卵细胞进行体外成熟培养,获得的成熟卵母细胞分别在乙醇、氯化锶、乙醇一氯化锶不同激活剂中激活,[结果]A级卵母细胞成熟率为79％．B级卵母细胞成熟率为70％,C级卵母细胞成熟率为55％。A级卵母细胞使用氯化锶激活率可达80．0％,为最佳方法。[结论]A级卵母细胞成熟培养效果最好。孤雌激活氯化锶激活效果高于乙醇．．     

小鼠卵母细胞氯化锶激活条件

以昆明小鼠为试验对象，研究了氯化锶（SrCl2)浓度，激尖处理时间以及卵龄对卵母细胞SrCl2孤雌活化的影响。hCG注射后18h的小鼠卵母细胞在1.6,5.0,10,20mmol/L SrCl2的激活液中处理10min，各组间的激活率（原核期卵母细胞的比例）无显著性差异（P＞0．05）。10，20mmol/L SrCl2组发育至2－，4－细胞期比率（59．26％，20．37％，63．79％，20．69％）同于1．6，5．0mmol/L 组（20．63％，9．26％，47．06％，7．84）（P＜05）。只有20mmol/L组的少数激活卵母细胞（3．45％）发育至桑椹胚阶段。10，20mmol/L SrCl2组处理20，40，60min，2组间的活化率无显著性差异。处理40min,20mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（64．44％，22．22％）均显著高于10mmol/L组（30．36％，11．61％），处理60min,10mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（84．68％，46．77％）均显著高于20mmol/L组（67．46％，28．57％），10mmol/L SrCl2处理，20，40，60，180，360min，其活化率和2－细胞的发育率无显著性差异。60，180min处理组的囊胚发育率（49．58％，47．59％）差异不显著，但2者均显著高于20，40，360min组（4．50％，12．24％和35．53％），后3者组间差异显著。随卵龄的增加，活化率显著增加。hCG注射后16h卵母细胞的活化率（77．78％）显著高于14h的卵母细胞（29．63％），而hCG注射后18h卵母细胞的活化率（49．19％）又显著高于16h的卵母细胞，hCG注射后18，20h卵母细胞的活化率差异不显著（94．19％，85．90％）。hCG注射后14，16，18h卵母细胞激活后的囊胚发育率（6．71％，27．78％，47．67％），各组间差异显著。但hCG注射后20h卵母细胞激活后的囊胚发育率（39．74％）显著低于18h的卵母细胞。     

山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚的体外培养

为了比较不同的激活方法对卵母细胞孤雌激活的影响,以及培养液(CR1aa)中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。采用Eth 6-DMAP、A23187 6-DMAP和Ion 6-DMAP三种方法激活山羊卵母细胞,Eth 6-DMAP组孤雌激活胚的卵裂率和囊胚率(35.2%和4.8%)显著低于A23187 6-DMAP组(68.9%和24.1%)和Ion 6-DMAP组(88.1%和48.0%),表明以Ion 6-DMAP激活最为理想。在培养液(CR1aa)与颗粒细胞共同培养条件下,分别添加100 mL/L的发情牛血清(OCS)、胎牛血清(FBS)和新生牛血清(NCS)。添加OCS和FBS后,孤雌胚囊胚率分别为48.1%和45.0%,显著高于添加NCS组(26.0%)。表明OCS、FBS和NCS能有效的提高孤雌胚的体外发育能力,尤其是对提高孤雌胚的囊胚发育能力更佳。     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活参数研究

本研究比较了按不同方法贮藏的培养液对猪卵母细胞体外成熟及成熟后孤雌激活对胚胎发育的影响。此外,还探索了针对初情期前母猪体外成熟卵母细胞和孤雌激活方案。结果如下：①1.4 kv/cm、100 μs、1DC电激活后,卵母细胞死亡率明显高于2.0 kv/cm、30 μs、1DC和2.0 kv/cm、60 μs、1DC处理组,但激活后胚胎卵裂率和囊胚率相似;②使用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤（Ionomycin+6-DMAP）处理后,胚胎卵裂及囊胚率都明显不如电激活处理;③6次独立试验结果证明：经4℃冷藏和-20℃冷冻保存的培养液用于猪卵母细胞培养,其体外成熟率、孤雌激活后的卵裂率及囊胚发育率无显著差异（P＞0.05）。说明成熟卵在2.0 kv/cm、30 μs、1DC或者 2.0 kv/cm、60 μs、1DC电击参数激活下可以降低死卵率;按本试验设计的电激活方案处理初情期前母猪成熟卵优于化学激活;在-20℃冷冻保存猪卵母细胞成熟液是可行的。      

乙醇激活对猪体外成熟卵母细胞发育的影响

探索了单独应用乙醇或者联合 6 -氨基嘌呤 (DMAP)、细胞松弛素 B(CB)、放线菌酮 (CHX)等化学物质对体外成熟 4 4 h猪卵母细胞激活的影响。结果如下 :分别用 0、5 %、8%、11%乙醇处理 5 min,或者在 8%乙醇条件下激活处理2、5、10 min的各组试验中 ,8%乙醇处理 5 min的卵裂率为 (6 .4 2± 4 .88) % ,高于其他各组 ,但均无囊胚发育 ;乙醇(8%、5 min)激活后 ,分别用 CB、CHX、DMAP、CB+CHX、CB+DMAP培养 6 h,结果 CB+DMAP的激活率、卵裂率和囊胚率最高 ,分别为 (70 .86± 3.75 ) %、(5 3.87± 5 .36 ) %、(15 .0 7± 5 .5 3) % ,与其他组相比 ,囊胚率差异显著 (P<0 .0 5 )     

小鼠卵母细胞孤雌激活试验

应用两种激活方法(乙醇和离子霉素 6-DMAP)激活和三种培养液(CZB，KSOM，M199)对90只小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。结果显示，离子霉素结合6-DMAP的激活效果高于乙醇；三种培养液中，以CZB激活效果较为理想。在随后的卵母细胞发育率方面，CZB、KSOM和M199三者之间的差异极为明显，以CZB最高，KSOM次之，M199的发育率最低。